○張喜貴 孟長(zhǎng)明 陳昌福

（1.453700，河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司；2.430070，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢）

④ 血藍(lán)蛋白與酚氧化酶血藍(lán)蛋白是存在于節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物血淋巴中的含銅呼吸蛋白。血藍(lán)蛋白不僅具有運(yùn)輸氧氣、調(diào)節(jié)滲透壓、貯存能量、調(diào)節(jié)蛻皮過(guò)程和合成黑色素等功能外，近年來(lái)研究表明，血藍(lán)蛋白及其降解片段還具有酚氧化酶活性、凝集素活性以及抗菌抗病毒等多種免疫學(xué)功能。雖然血藍(lán)蛋白的氨基酸序列與酚氧化酶的氨基酸序列顯示出高度同源性，但二者的合成部位不同。酚氧化酶在血細(xì)胞中表達(dá)，以酶原的形式合成，其氨基端被裂解后才發(fā)揮生物學(xué)活性，參與角質(zhì)硬化和免疫防御反應(yīng)；血藍(lán)蛋白則是在肝胰腺中合成并釋放至血漿中的。

（六）其它免疫因子

除上述幾種重要的體液免疫因子外，甲殼動(dòng)物體內(nèi)還含有一些與免疫應(yīng)答有關(guān)的免疫因子，如類免疫球蛋白和補(bǔ)體分子、蛋白酶抑制劑、溶酶體酶等。

1.類免疫球蛋白和補(bǔ)體分子

一般認(rèn)為無(wú)脊椎動(dòng)物體內(nèi)無(wú)免疫球蛋白和補(bǔ)體存在，但近年來(lái)一些研究表明甲殼動(dòng)物血淋巴中可能存在類免疫球蛋白和補(bǔ)體分子。王雷采用單向免疫擴(kuò)散法測(cè)定出中國(guó)對(duì)蝦血淋巴中存在類似IgM的因子；王偉慶采用免疫比濁測(cè)定出中國(guó)對(duì)蝦血淋巴中存在類IgG、類IgA、類IgM等免疫球蛋白樣物質(zhì)以及類C3、類C4等補(bǔ)體蛋白樣物質(zhì)。免疫系統(tǒng)的進(jìn)化是與動(dòng)物的進(jìn)化緊密相連的，隨著動(dòng)物從無(wú)脊椎動(dòng)物到脊椎動(dòng)物的進(jìn)化，免疫系統(tǒng)的進(jìn)化也發(fā)生了重大飛躍。突出表現(xiàn)在：無(wú)脊椎動(dòng)物只有簡(jiǎn)單的細(xì)胞吞噬等防御手段；低等脊椎動(dòng)物開(kāi)始有彌散的淋巴系統(tǒng)，出現(xiàn)IgM樣大分子抗體；哺乳類動(dòng)物體內(nèi)抗體進(jìn)化順序?yàn)?IgM→IgG→IgA→IgD→IgE。由于進(jìn)化的連續(xù)性，作為最早出現(xiàn)的免疫球蛋白IgM，在無(wú)脊椎動(dòng)物中極可能含有其結(jié)構(gòu)類似物。然而這些物質(zhì)究竟是否存在于甲殼動(dòng)物血清中，還有不同的觀點(diǎn)，因此，這些能與哺乳動(dòng)物抗血清發(fā)生反應(yīng)的甲殼動(dòng)物血清成分的本質(zhì)有待于進(jìn)一步研究。采用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)克隆表達(dá)其基因，研究其功能則是一重要研究手段。

2.蛋白酶抑制劑

蛋白酶抑制劑是另一種由血細(xì)胞產(chǎn)生的重要免疫因子，參與蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)，防止蛋白酶的過(guò)量激活，從而避免宿主組織的自身?yè)p傷。目前己在甲殼動(dòng)物血淋巴及血細(xì)胞顆粒中發(fā)現(xiàn)了多種蛋白酶抑制劑，其中比較重要的有以下3種：枯草菌素蛋白酶抑制劑、α2-巨球蛋白、絲氨酸蛋白酶抑制劑。

3.溶酶體酶

溶酶體酶的水解作用是甲殼動(dòng)物免疫系統(tǒng)抵抗病原微生物的一種重要機(jī)制。溶酶體酶一般包括溶菌酶、過(guò)氧化物酶及各種水解酶類（蛋白酶、肌酶、磷酸酶、脂酶和糖酵解酶等）。吞噬細(xì)胞對(duì)病原微生物進(jìn)行吞噬或包囊后，細(xì)胞內(nèi)的溶酶體與病原微生物進(jìn)行融合形成吞噬溶酶體，繼而溶酶體發(fā)生脫顆?，F(xiàn)象，外來(lái)入侵的病原微生物可以被其中的溶菌酶、過(guò)氧化物酶、磷酸酶等直接殺死，隨后各種水解性酶類再進(jìn)一步將它們水解消化而排出體外。

4.活性氧中間體（Reactive oxygen intermediats，ROIs）

血細(xì)胞吞噬病原微生物后形成吞噬體，并向吞噬體內(nèi)釋放各種消化酶，產(chǎn)生一系列ROIs?；钚匝醯漠a(chǎn)生最初是在哺乳動(dòng)物的嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，被稱為呼吸爆發(fā)，即超氧陰離子的釋放。它是可溶性刺激物或外來(lái)顆粒激活吞噬細(xì)胞膜上NAD（P）H氧化酶的結(jié)果，其表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)糖原分解增強(qiáng)、氧耗增加，并產(chǎn)生超氧陰離子（O2-）、過(guò)氧化氫（H2O2）,羥自由基〔OH-〕和單線態(tài)氧（1O2）等一系列 ROIs。這些活性氧有極強(qiáng)的殺菌功能，可直接或同溶酶體共同抵抗外源性病原微生物的侵入，也可通過(guò)髓過(guò)氧化酶一鹵化物一H2O2系統(tǒng)產(chǎn)生次鹵化物或高鹵化物等，形成潛在的殺菌體系。不同甲殼動(dòng)物個(gè)體，其血細(xì)胞產(chǎn)生ROls的水平存在明顯差異，此與甲殼動(dòng)物的生理狀況、免疫水平及血細(xì)胞的類別有關(guān)，活性氧產(chǎn)生的量可直接反映血細(xì)胞的殺菌能力。

5.可凝固蛋白（clottable protein，CP）

可凝固蛋白是甲殼動(dòng)物血淋巴內(nèi)不同于凝集素的又一類免疫因子，具有凝血作用，從而阻止血細(xì)胞通過(guò)傷口損失。1999年Hall首先從螯蝦體內(nèi)分離鑒定出第一種甲殼動(dòng)物的可凝固蛋白，隨后在龍蝦、淡水大對(duì)蝦、沙螯蝦、蟹類和軟尾太平蝲蛄體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)CP。甲殼動(dòng)物CP為一二聚體極高密度脂蛋白，分子量為380～400 KDa，由2個(gè)相同的亞基通過(guò)二硫鍵組成，每個(gè)亞基各含一個(gè)游離的賴氨酸和谷氨酸。在轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下，兩者之間共價(jià)結(jié)合在一起。序列分析表明不同甲殼動(dòng)物的CP具有相似的氨基酸組成和N端序列。雖然甲殼動(dòng)物CP與鱟的血凝素以及脊椎動(dòng)物的纖連蛋白具有相似的血凝作用，但在序列上并無(wú)任何同源性。甲殼動(dòng)物CP的凝血過(guò)程是甲殼動(dòng)物受傷后，血細(xì)胞（尤其是透明細(xì)胞和小顆粒細(xì)胞）釋放谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶，在谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶和血漿鈣離子作用下不同CP分子之間的游離賴氨酸和谷氨酸進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，形成CP二聚體，從而使血淋巴發(fā)生凝固，防止機(jī)體血淋巴的流失。

（全文完）