廣東省惠州市第二婦幼保健院（516000）梁罕超 胡碧英 許冠杰

出生缺陷一直以來都是影響出生人口質量的主要因素之一，其出現(xiàn)會給家庭和社會帶來沉重的負擔。流行病學調查顯示，我國是出生缺陷高發(fā)國家，每年約80萬～120萬的新生兒存在不同程度的缺陷，嚴重降低了出生人口質量[1]。因此，必須重視對出生缺陷的研究和分析。至今，出生缺陷的發(fā)病原因和機制尚未明確，多數(shù)研究認為與生殖道感染、內分泌異常以及外部環(huán)境等因素有關[2]。同型半胱氨酸（Hcy）升高和葉酸代謝異常是兩個導致出生缺陷的重要因素，已得到醫(yī)學界的高度重視[3]。但是從現(xiàn)階段臨床關于出生缺陷的因素來看，針對不同Hcy水平與葉酸代謝關鍵酶基因多態(tài)性的分布報道并不多見，而二者的相關性研究可能給出生缺陷的防治和處理提供重大的價值，因此有必要進行深入探究。為此，本研究納入我院2018年11月～2020年2月收治的200例前來進行體檢的育齡婦女視展開分析?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年11月～2020年2月在我院體檢的200例育齡婦女進行研究。對全部受試者進行Hcy水平檢測，根據(jù)Hcy的監(jiān)測水平分為高Hcy組（≥15μmol/L）和低Hcy組（＜15μmol/L），其中高Hcy組102例，低Hcy組98例。高Hcy組：年齡23～38歲，平均年齡（27.41±1.25）歲；已婚32例，未婚70例。低Hcy組：年齡22～35歲，平均年齡（26.97±1.20）歲；已婚13例，未婚85例。兩組各資料經(jīng)比較，具有均衡性（P＞0.05），可比。

納入標準：①接受并完成遺傳檢測、Hcy檢測；②精神和認知正常，可配合完成基本調查研究；③熟悉和了解本次研究情況，自愿參與并簽署知情同意書。排除標準：①合并嚴重心肝腎等器質性病變；②伴有心腦血管疾病、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤；③存在全身性感染；④糖尿病、消化系統(tǒng)疾?。虎菖R床資料不完善。

附表1 兩組MTHFR基因組C677T位點基因型比較

附表2 兩組MTRR基因組A66G位點基因型比較

1.2 方法

1.2.1 Hcy水平檢測 ①標本采集：于清晨空腹狀態(tài)下，采集受試者肘靜脈血5ml，保存于黃色凝膠管中。采用德國HERMLE公司A206A臺式醫(yī)用離心機進行離心處理，3000r/min，持續(xù)10min，處理后靜置15min，分離上層血清，-30℃保存。②檢測操作：采用全自動生化儀（雅培C1600型）檢測，試劑盒購自上?？迫A生物試劑廠，檢測方法為雙試劑循環(huán)酶法。檢測時嚴格按照試劑盒說明操作，確保檢測的質量。③參考范圍：≤5μmol/L過低，5～15μmol/L正常，≥15μmol/L偏高。

1.2.2 基因型的檢測 對所有受檢者空腹抽取外周靜脈血5ml，使用深圳泰樂德醫(yī)療有限公司的亞甲基四氫葉酸還原酶基因677C/T檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）提取核酸。檢測時根據(jù)試劑盒說明操作，使用SLAN-96S熒光定量PCR儀進行檢測。對于基因分型，采用連接酶檢測反應（LDR）進行；針對所獲取到的數(shù)據(jù)信息，采用Genemapper軟件分析。

1.3 觀察指標 比較H-W遺傳平衡情況，觀察兩組葉酸代謝關鍵酶各基因點位基因型頻率分布，并進行比較分析。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS21.0軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料采用（±s）表示，行t檢驗；計數(shù)資料采用n（%）表示，行X2檢驗。P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組H-W遺傳平衡情況的比較 在H-W遺傳平衡結果方面，兩組育齡婦女相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。由此可以看出，各位點基因型頻率分布差異不顯著，表明了受試對象具有群體代表性，因此可作為研究的對象。

2.2 兩組MTHFR基因組C677T位點基因型 高Hcy組C677T基因組TT占比高于低Hcy組，CC占比低于低Hcy組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。如附表1所示。

2.3 兩組MTRR基因組A66G位點基因型 高Hcy組A66G基因組AG占比高于低Hcy組，AA占比低于低Hcy組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳情見附表2。

3 討論

葉酸是碳單位載體之一，對機體各組織功能的正常運行起著關鍵性的作用，常見的如甘氨酸、絲氨酸以及Hcy等，另外在DNA以及血紅蛋白的合成過程中也扮演著重要的角色[4]。研究發(fā)現(xiàn)[5]，葉酸代謝對Hcy的影響，主要是由各關鍵酶實現(xiàn)，如MTHFR、MTRR等，在這一過程中，MTHFR、MTRR等關鍵酶參與到Hcy向蛋氨酸轉化以及DNA合成的過程中，引起代謝變化，進而實現(xiàn)對機體葉酸代謝網(wǎng)絡的干擾，引起相關指標的變化。Hcy是人體內含硫氨基酸的一個重要的代謝中間產(chǎn)物，可能是動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)病的一個獨立危險因子[6]。正常情況下[4]，Hcy水平介于5～15μmol/L范圍內，異常狀態(tài)下其水平可能升高，進而嚴重影響血管增殖，相應的修復功能也出現(xiàn)障礙。

研究發(fā)現(xiàn)[7]，葉酸代謝相關酶在體內Hcy水平的維持過程中作用顯著，具體可以從以下兩個關鍵酶體現(xiàn)：①MTHFR酶，對Hcy催化甲基化生成met有積極的作用，有利于Hcy水平在體內維持平穩(wěn)狀態(tài)。MTHFR酶中，主要的基因位點為C677T，其在不良妊娠中受到高度的關注。②MTRR酶，是met合成酶的輔助因子，對于Hcy水平的維持意義重大，特別是A66G基因位點可引起Hcy水平的明顯變化。目前，葉酸代謝關鍵酶主要集中于基因多態(tài)性研究，但其與高Hcy水平兩者的關系的研究卻較少。本研究針對育齡婦女不同Hcy水平與葉酸代謝關鍵酶基因多態(tài)性分布進行研究，結果發(fā)現(xiàn)兩組MTHFR基因組C677T位點基因型、MTRR基因組A66G位點基因型分布均存在顯著的差異（P＜0.05），表明了不同Hcy水平與葉酸代謝關鍵酶基因多態(tài)性之間的關系，從而間接體現(xiàn)了葉酸代謝關鍵基因位點對Hcy水平的影響。

綜上所述，育齡婦女不同Hcy水平與葉酸代謝關鍵酶基因多態(tài)性分布存在一定的差異，高Hcy水平極有可能引起高風險基因突變，因此需加強對Hcy水平的定期檢測，以為預防出生缺陷提供有效的參考，提高出生人口的質量和水平。