曾慶賀，肖立燕，孟 艷，楊 艷，史貴秀，董加秀

(1.棗莊市婦幼保健院感染性疾病科，山東 棗莊 277100；2.棗莊市婦幼保健院檢驗(yàn)科，山東 棗莊 277100；3.棗莊職業(yè)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，山東 棗莊 277800)

人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)即人皰疹病毒5型，屬于β皰疹病毒科，為雙鏈線性DNA病毒，含220多個(gè)開放閱讀框[1]，是引起人類感染性疾病最常見的病毒之一，同時(shí)也是人類出生缺陷的主要病原體之一，嬰幼兒因?yàn)槊庖吖δ懿煌晟疲蔀镠CMV感染的主要人群[2]。臨床上，由于HCMV是弱致病因子，感染HCMV后多以隱性感染為主，但其組織嗜性廣泛，內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞是其主要靶細(xì)胞，且可長期潛伏在骨髓造血祖細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞內(nèi)，因此顯性感染患兒臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，HCMV可引起呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等單個(gè)或多個(gè)系統(tǒng)損害[1]。目前治療使用的一線用藥更昔洛韋只能抑制病毒復(fù)制，不能有效地清除病毒，疫苗接種尚處于試驗(yàn)階段。因此，通過對(duì)棗莊地區(qū)0～12歲兒童HCMV感染的流行病學(xué)及臨床特點(diǎn)進(jìn)行研究，了解本地區(qū)兒童HCMV感染現(xiàn)狀，為本地區(qū)HCMV感染的防控提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料來源

收集棗莊市婦幼保健院檢驗(yàn)中心2015年1月至2016年12月的2 750例兒童血液標(biāo)本，其中男1 656例，女1 094例，男女比例1.51∶1，年齡在0～12歲，平均(3.21±2.84)歲。2 750例兒童按照年齡分為0～<28天組(1 689例)、28天～<6月齡組(503例)、6月齡～<1歲組(152例)、1～<3歲組(207例)、3～<6歲組(99例)及6～12歲年齡組(100例)。本研究獲得研究對(duì)象家長的知情同意。

1.2 標(biāo)本采集

晨起空腹抽取約2mL外周靜脈血，排除溶血等不合格血液標(biāo)本，常溫下3 000r/min離心5min，吸取上層血清液后于8小時(shí)內(nèi)檢測HCMV抗體。

1.3 儀器與試劑

應(yīng)用AutolumoA2000 Plus化學(xué)發(fā)光檢測儀。HCMV IgM抗體、IgG抗體檢測試劑盒由中國安圖生物工程股份有限公司提供。

1.4 抗體檢測方法

操作步驟及結(jié)果的判定均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，所用試劑盒均在外包裝標(biāo)示的有效期內(nèi)使用。利用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測HCMV IgM及IgG抗體，其中HCMV IgM抗體檢測采用免疫捕獲法原理，濃度≥12AU/mL判定為陽性，<8AU/mL判定為陰性，介于兩者為可疑，進(jìn)行重復(fù)檢測；HCMV IgG抗體檢測采用間接法原理，濃度≥14AU/mL判定為陽性，<10AU/mL判定為陰性，介于兩者為可疑，進(jìn)行重復(fù)檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

建立Excel數(shù)據(jù)庫，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。獨(dú)立樣本間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，多個(gè)樣本間兩兩或多重比較采用χ2分割法或bonferroni法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCMV血清學(xué)感染率

在2 750例患兒中，HCMV血清學(xué)陽性率為71.89%(1 977/2 750)，其中，總IgM抗體及總IgG抗體陽性率分別為7.20%(198/2 750)、68.69%(1 889/2 750)。HCMV IgM抗體及IgG抗體均陽性者為110例(4.00%)，僅IgM抗體陽性者為88例(3.20%)，僅IgG抗體陽性者為1 779例(64.69%)，HCMV IgM抗體及IgG抗體均陰性者為773例(28.11%)。性別上，198例IgM抗體陽性患兒中，男童116例(58.59%)，女童82例(41.41%)，男、女童的IgM抗體陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.24，P>0.05)；1 889例IgG抗體陽性患兒中，男童1 123例(59.45%)，女童766例(40.55%)，男、女童的IgG抗體陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.49，P>0.05)。

2.2 不同年齡組HCMV抗體檢測結(jié)果

0～<28天組總IgM抗體陽性率處于低水平(0.30%)，與28天～<6月齡、6月齡～<1歲、1～<3歲、3～<6歲及6～12歲組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為300.36、316.35、338.69、170.51、63.69，均P<0.05)；1～<3歲組總IgM抗體陽性率最高(22.22%)，與0～<28天、6月齡～<1歲及6～12歲組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為338.69、6.86、10.94，均P<0.05)，但與其他年齡組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；HCMV總IgG抗體陽性率在0～<28天組最高(80.52%)，與28天～<6月齡、6月齡～<1歲、1～<3歲、3～<6歲及6～12歲組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為117.83、117.46、667.36、53.89、34.40，均P<0.05)；1～<3歲組總IgG抗體陽性率最低(36.23%)，與6月齡～<1歲組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.27，P>0.05)，但與0～<28天、28天～<6月齡、3～<6歲及6～12歲年齡組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為667.36、156.22、44.12、63.09，均P<0.05)。原發(fā)感染率在0～<28天組最低(0.30%)，隨著年齡增長原發(fā)感染率逐漸升高，在1～<3歲組達(dá)到最高，為13.53%(28/207)，3歲以后下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=179.20，P<0.05)，見表1。

2.3 不同季節(jié)HCMV抗體檢測結(jié)果

HCMV IgM抗體陽性率在不同季節(jié)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.29,P>0.05)；HCMV IgG抗體陽性率在不同季節(jié)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=208.35，P<0.05)，HCMV IgG抗體陽性率在冬季最低，為44.44%，與春、夏、秋三個(gè)季節(jié)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為149.66、129.48、113.35，均P<0.05)，見表2。

表2 HCMV抗體與季節(jié)的關(guān)系[n(%)]Table 2 Detection rates of anti-HCMV antibodies in different seasons[n(%)]

2.4 合并HCMV IgM抗體陽性兒童相關(guān)疾病分布

在198例HCMV IgM抗體陽性的兒童中，呼吸系統(tǒng)疾病比例最高(42.42%)，其中肺炎、支氣管炎、支氣管肺炎比例分別為21.21%、7.58%、6.06%。消化系統(tǒng)疾病中以人巨細(xì)胞病毒性肝炎比例較高(11.61%)。傳染性單核細(xì)胞增多癥、嬰兒肝炎綜合征比例分別為7.58%、6.06%，見表3。

表3 合并HCMV IgM抗體陽性兒童相關(guān)疾病分布[n(%)]Table 3 Distribution of diseases related to postive anti-HCMV IgM antibody in the children[n(%)]

3 討論

HCMV于1956年首次由Smiths從死亡嬰兒的頜下腺組織中分離獲得，該病毒人群普遍易感，且大多數(shù)人在嬰幼兒或青少年期初次感染[3]，隨著年齡的增長，HCMV抗體的陽性率亦增加。國內(nèi)流行病學(xué)研究顯示我國HCMV的感染普遍，一般人群HCMV抗體陽性率為86.00%～96.00%，育齡期婦女HCMV血清學(xué)陽性率為90.00%～97.70%，而孕婦則高達(dá)95%以上，且4.30%～7.00%的孕婦為原發(fā)性感染，其中30.00%～50.00%可發(fā)生母嬰垂直傳播，嬰幼兒感染率為60.00%～80.00%，住院兒童感染率則高達(dá)83.70%[4-6]。因此，本文對(duì)在棗莊市婦幼保健院就診的2 750例0～12歲兒童進(jìn)行HCMV IgM及IgG抗體檢測，并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行分析，對(duì)棗莊地區(qū)兒童HCMV感染流行病學(xué)進(jìn)行初步研究。

3.1 兒童HCMV總體血清學(xué)感染率分析

本研究發(fā)現(xiàn)，棗莊地區(qū)0～12歲兒童HCMV血清學(xué)陽性率為71.89%，低于國內(nèi)的83%[7]，但仍高于發(fā)達(dá)國家的50.40%[8]。對(duì)于活動(dòng)性感染(HCMV IgM陽性)，本地區(qū)0～12歲兒童感染率約為7.20%，也低于國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道[9]?？赡芘c本地區(qū)積極進(jìn)行產(chǎn)前篩查及宣傳HCMV感染相關(guān)知識(shí)有關(guān)。本研究顯示不同性別間兒童HCMV感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與HCMV的致病特征相符。

3.2 不同年齡組HCMV感染分析

本數(shù)據(jù)顯示HCMV IgM抗體陽性率在0～<28天年齡組最低(0.30%)，但其HCMV IgG抗體陽性率最高(80.52%)，與國內(nèi)報(bào)道一致[4]。IgG抗體因其分子量小，可通過胎盤，半衰期為20～23天，故0～<28天組HCMV IgG抗體陽性率可間接地反映本地區(qū)孕婦HCMV血清學(xué)陽性率水平。此外，因HCMV IgG抗體具有一定保護(hù)作用，故在0～<28天年齡組感染率較低，但隨著年齡增長、母源性IgG抗體消失、母乳喂養(yǎng)等使感染風(fēng)險(xiǎn)增加，HCMV IgM抗體陽性率呈上升趨勢，在1～<3歲組最高，而武漢地區(qū)在1～<6月齡組最高[7]，提示HCMV感染可能存在地區(qū)差異。

先天性感染是指新生兒(母親HCMV血清學(xué)陽性)在出生后14天內(nèi)(含14天)證實(shí)有HCMV感染[1]，其全球總體感染率為0.20%～2.00%[10]，其中發(fā)達(dá)國家感染率為0.20%～1.00%[11]，我國為0.46%～1.12%[1]。本研究先天性感染為0.30%，低于國內(nèi)水平[1]，均為無癥狀感染。對(duì)5例患兒母親進(jìn)行HCMV IgG抗體、乳汁HCMV DNA檢測，結(jié)果均陽性，但因母親均未規(guī)律孕檢，故不能明確感染類型，上述結(jié)果間接提示HCMV IgG不能完全預(yù)防HCMV感染，但所感染患兒均無相關(guān)的臨床癥狀或體征，說明母源性HCMV IgG抗體對(duì)HCMV感染引起的疾病具有一定程度的保護(hù)作用，遠(yuǎn)期需要對(duì)患兒進(jìn)一步隨訪，了解有無聽力損傷等靶器官損傷。鑒于目前針對(duì)HCMV的疫苗研究仍未進(jìn)入臨床試驗(yàn)，且重組gB/MF59疫苗僅減少50%的初次感染率，且不能誘導(dǎo)產(chǎn)生足夠的中和抗體[12]，因此，應(yīng)加強(qiáng)宣教，告知孕婦HCMV感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素及對(duì)新生兒造成的影響，并采取相應(yīng)的預(yù)防措施。普及孕婦及新生兒HCMV感染的篩查、產(chǎn)前診斷、定期產(chǎn)檢，做好孕期HCMV感染的管理具有重要的臨床意義[13]。

3.3 不同季節(jié)間HCMV感染分析

在季節(jié)分布中，秋季HCMV IgM陽性率最高(8.29%)，但與其他季節(jié)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；HCMV IgG陽性率在冬季最低，而部分文獻(xiàn)報(bào)道為冬季最高，秋季最低[7,14]。說明氣候的變化、地域的差異在一定程度上可能會(huì)影響HCMV感染，下一步將繼續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

3.4 合并HCMV IgM抗體陽性兒童的相關(guān)疾病分析

HCMV主要侵犯小兒的肝臟和肺臟，引起肝炎、肺炎，還可以侵及神經(jīng)、血液和泌尿系統(tǒng)，嚴(yán)重感染者可出現(xiàn)聽力、視力等多臟器、多系統(tǒng)的不可逆損害[1]，臨床研究發(fā)現(xiàn)巨細(xì)胞病毒肺炎占肺炎住院患兒的30%，且在小于1歲患兒中高達(dá)71.10%，發(fā)病率逐年升高[15]。本結(jié)果顯示HCMV感染相關(guān)疾病主要為呼吸系統(tǒng)疾病(42.43%)，其中肺炎占21.21%，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[6]。此外，本研究結(jié)果顯示傳染性單核細(xì)胞增多癥發(fā)生率較高(7.58%)，僅次于肺炎(21.21%)和巨細(xì)胞病毒性肝炎(11.61%)，EB病毒和HCMV均屬于人類皰疹病毒，存在混合感染，對(duì)于這種情形，是否先存在HCMV感染潛伏，EB病毒感染后激活HCMV復(fù)制引起致病，還是其他方式，目前尚不清楚，HCMV與其他病原體的伴發(fā)感染對(duì)機(jī)體的影響也有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)棗莊地區(qū)0～12歲兒童HCMV感染普遍，其HCMV IgM及HCMV IgG陽性率均低于我國平均水平，這可能與近5年加強(qiáng)HCMV感染宣教等措施有關(guān)。本地區(qū)仍存在先天性HCMV感染，盡管無臨床癥狀，但仍需加強(qiáng)隨訪，以早期干預(yù)、防治感音性耳聾等不可逆臟器損傷。