張麗寶，王 芳，蔡相濤，許方燕，譚明福

(山東新華制藥股份有限公司，山東 淄博 255000 )

克林霉素磷酸酯為化學半合成的克林霉素衍生物，它在體外無抗菌活性，進入體內(nèi)后迅速水解為克林霉素而顯示其藥理活性。故其抗菌譜、抗菌活性及治療效果與克林霉素相同，但它的脂溶性及滲透性比克林霉素好，可肌肉注射和靜脈注射，因此克林霉素磷酸酯注射液有廣泛的臨床應(yīng)用。

目前國家藥監(jiān)局發(fā)布《關(guān)于開展化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價工作的公告》，明確已上市的化學藥品注射劑仿制藥，未按照與原研藥品質(zhì)量和療效一致原則審批的品種，均需開展一致性評價。

本文將以克林霉素磷酸酯注射液質(zhì)量和療效一致性評價研究為例，對《化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術(shù)要求》 (以下簡稱技術(shù)要求)進行解讀。

1 參比制劑研究

針對仿制藥一致性評價中的參比制劑，CFDA先后出臺了《普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定指導(dǎo)原則》(2016年第61號通告) 、《關(guān)于發(fā)布仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價參比制劑備案與推薦程序的公告》(2016年第99號) 等文件，明確了參比制劑的遴選原則，備案、推薦和申報程序。一般遴選原則如下：

(1)參比制劑首選國內(nèi)上市的原研藥品。作為參比制劑的進口原研藥品應(yīng)與其原產(chǎn)國上市藥品一致。若原研企業(yè)能證明其地產(chǎn)化藥品與原研藥品一致，地產(chǎn)化藥品也可作為參比制劑使用。

(2)若原研藥品未在國內(nèi)上市或有證據(jù)證明原研藥品不符合參比制劑的條件，也可以選用在國內(nèi)上市國際公認的同種藥物作為參比制劑，其產(chǎn)品應(yīng)與被列為參比制劑國家的上市藥品一致。

(3)若原研藥品和國際公認的同種藥物均未在國內(nèi)上市，可選擇在歐盟、美國、日本上市并被列為參比制劑的藥品。

根據(jù)上述參比制劑遴選指導(dǎo)原則，選定美國橙皮書中公布的參比制劑為Pharmacia And Upjohn Co的Clindamycin Injection，規(guī)格為EQ 150 MG BASE/ML。

2 處方工藝研究

技術(shù)要求中明確規(guī)定：注射劑中輔料種類和用量通常應(yīng)與參比制劑(RLD)相同。輔料的用量相同是指仿制藥輔料用量為參比制劑相應(yīng)輔料用量的95%～105%。如附帶專用溶劑，應(yīng)與參比制劑的專用溶劑處方一致。

參比制劑的說明書中會明確處方組成，要做到輔料的用量相同，需要建立合理的分析方法對輔料的含量進行準確的測定，對參比制劑的處方組成進行全面的解析。

克林霉素磷酸酯注射液的參比制劑說明書明確了處方組成，包括克林霉素磷酸酯、苯甲醇、依地酸二鈉、氫氧化鈉或鹽酸。

下面簡要介紹各輔料用量的解析過程。

2.1 苯甲醇的研究

苯甲醇作為抑菌劑廣泛應(yīng)用于化妝品、食品以及制藥[1]，苯甲醇具有中等抗菌活性，用于抑制革蘭氏陽性菌、霉菌、真菌和酵母菌。對不同的微生物具體不同的抑菌效果，需要不同的最低抑菌濃度，同時過量的苯甲醇存在安全性的副作用。所以需對參比制劑中苯甲醇的含量進行充分研究，才能保證仿制藥與參比制劑具有相同的抑菌能力和安全性。

苯甲醇含量的檢測方法有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)，這三種方法對苯甲醇含量的測定結(jié)果一致[2]。因此選定HPLC法對參比制劑中苯甲醇的含量進行檢測，確定了處方中苯甲醇的含量。

2.2 依地酸二鈉的研究

依地酸二鈉在藥物制劑、化妝品和食品中被用作絡(luò)合劑。它能夠與重金屬離子形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物。依地酸二鈉能夠絡(luò)合藥液中的金屬元素雜質(zhì)如Fe、Cu和Mn等，作為抗氧劑的增效劑，促進注射液的穩(wěn)定。

依地酸二鈉的檢測方法主要有兩種，HILIC-ELSD法和HPLC法。這種檢測均具有專屬性良好、精密度高、重現(xiàn)性好等特點[3-4]。因此選定HPLC方法對參比制劑中依地酸二鈉的含量進行檢測，確定了處方中依地酸二鈉的含量。

2.3 pH調(diào)節(jié)劑

圖1 鹽酸或氫氧化鈉用量解析

注射液中pH調(diào)節(jié)劑主要有酸堿兩類，酸性pH調(diào)節(jié)劑包括：鹽酸、磷酸、硫酸等，堿類pH調(diào)節(jié)劑包括：氫氧化鈉、碳酸鈉，碳酸氫鈉等。不同的pH條件以及使用不同種類的pH調(diào)節(jié)劑都會影響注射液的穩(wěn)定性，因此需要對參比制劑中所用的pH調(diào)節(jié)劑進行分析，才能保證自制品與參比制劑具有相同的穩(wěn)定性。

克林霉素磷酸酯注射液參比制劑說明書介紹藥液的pH值采用鹽酸或氫氧化鈉進行調(diào)節(jié)，但未明確具體哪種注射液的pH調(diào)節(jié)劑，因此需要設(shè)計試驗解析pH值調(diào)節(jié)劑的解析(圖1)。

本文通過氯離子的定性試驗，檢測到參比制劑藥液中不含有氯離子，因此確定了注射液的pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉。采用氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)至與參比制劑一致的范圍內(nèi)，對比自制品與參比制劑的滲透壓，結(jié)果顯示兩個產(chǎn)品的滲透壓相同，因此最終確定了氫氧化鈉的用量。

3 生產(chǎn)工藝研究

注射液是直接注入人體內(nèi)部的一種劑型，常用劑量較大，注射液的無菌保證是注射液的最重要指標，按其生產(chǎn)工藝的不同可分為最終滅菌工藝和非最終滅菌工藝也即無菌生產(chǎn)工藝兩種，無菌生產(chǎn)工藝的無菌保證水平(SAL)僅是滅菌工藝的1/103-/109[5]。因此生產(chǎn)工藝過程的關(guān)鍵是確定該品種使用無菌生產(chǎn)工藝還是最終滅菌工藝。

克林霉素磷酸酯注射液的參比制劑的說明書中，并未說明注射液的生產(chǎn)工藝，因此需要對參比制劑的包裝形式經(jīng)分析，對克林霉素磷酸酯的熱穩(wěn)定進行研究，綜合各個研究結(jié)果，確定生產(chǎn)工藝(表1)。

表1 生產(chǎn)工藝解析

以上研究確定克林霉素磷酸酯注射液應(yīng)采用無菌生產(chǎn)工藝。

4 原輔料的研究

4.1 原料藥的研究

原料藥是制劑中的活性成分(API)，是制劑發(fā)揮治療作用的主要因素，因而也顯著影響著制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)[6]。通過仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價研究工作，提升API的質(zhì)量要求，從而提升注射液的質(zhì)量。

根據(jù)技術(shù)要求，在克林霉素磷酸酯原料的質(zhì)量標準中，收緊了細菌內(nèi)毒素、微生物限度的標準，以滿足注射液無菌生產(chǎn)的需要。根據(jù)克林霉素磷酸酯各國的標準，包括USP、EP、JP和中國藥典標準，對克林霉素磷酸酯有關(guān)物質(zhì)檢查方法進行修訂。同時對原料供應(yīng)商進行全面審計，根據(jù)克林霉素磷酸酯的生產(chǎn)工藝，對元素雜質(zhì)和致突變雜質(zhì)的研究和評估，從而制定了相應(yīng)的控制策略。

4.2 輔料的研究

根據(jù)技術(shù)要求，輔料應(yīng)符合注射用要求。根據(jù)克林霉素磷酸酯各國的標準，包括USP、EP、JP和中國藥典標準，對輔料的質(zhì)量標準進行了提升。同時收緊了細菌內(nèi)毒素、微生物限度的標準，以滿足注射液無菌生產(chǎn)的需要。對輔料的元素雜質(zhì)進行了研究，并制定了相應(yīng)的控制策略。

5 討論

隨著相關(guān)注射相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則的發(fā)布，注射劑的一致性正式拉開序幕。以克林霉素磷酸酯注射液的一致性評價研究工作為例，介紹了參比制劑如何選擇、參比制劑的處方如何解析、生產(chǎn)工藝如何確認以及原輔料的研究如何開展。以本文思路為指導(dǎo)，根據(jù)具體的品種制定具體的研究方案，更好的開展化學藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價工作，推動我國注射劑的產(chǎn)業(yè)升級。