郭珍妮 唐利華 黃穗萍

摘要 芒果炭疽病是芒果上最嚴重的病害之一。本文采用生長速率法測定了來自不同芒果產(chǎn)區(qū)的芒果炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性。結果表明，苯醚甲環(huán)唑對供試的136個菌株的平均EC50為（1.46±0.14）mg/L，其中，最小值為0.09 mg/L，最大值為9.74 mg/L，其敏感性頻率不符合正態(tài)分布。苯醚甲環(huán)唑對不同采集地區(qū)菌株的平均EC50無顯著差異，對貴州的菌株平均EC50最高，對海南的最低。供試的芒果炭疽病菌包含13個種，其中，苯醚甲環(huán)唑對Colletotrichum cordylinicola的平均EC50最低，對C.gloeosporioides 的平均EC50最高。

關鍵詞 芒果炭疽病; 苯醚甲環(huán)唑; 炭疽病菌; 敏感性

中圖分類號： S 436.67

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019462

Abstract Mango anthracnose is one of the most serious diseases on mango. In this study， the sensitivity of Colletotrichum spp. collected from different mango production areas to difenoconazole was determined with mycelium growth rate method. The result showed that the mean EC50 value of 136 isolates was （1.46±0.14） mg/L， and the minimum and maximum EC50 values were 0.09 mg/L and 9.74 mg/L， respectively. The sensitivity frequency was not normally distributed. There was no significant difference in mean EC50 values among Colletotrichum spp. from different regions. The mean EC50 value of strains isolated from Guizhou was the highest， while that from Hainan was the lowest. The tested isolates contained 13 species， of which C.cordylinicola had the lowest mean EC50 value， and C.gloeosporioides had the highest mean EC50 value.

Key words mango anthracnose; difenoconazole; Colletotrichum spp.; sensitivity

芒果Mangifera indica在我國主要分布于海南、廣東、廣西、云南及四川的部分地區(qū)。據(jù)統(tǒng)計，2014年我國芒果種植面積17.32萬hm2，總產(chǎn)量143.77萬t[1]。芒果炭疽病是芒果生長期和采后儲存期最嚴重的病害之一，在葉片、嫩梢、花序、果實上均可發(fā)生，嚴重時可導致葉片枯死、梢枯、花序脫落、果實脫落或腐爛等，造成嚴重的經(jīng)濟損失[2-3]。研究表明，膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和尖孢炭疽菌C.acutatum是引起芒果炭疽病的主要病原菌[4-5]。但隨著該屬真菌分子系統(tǒng)學研究的不斷深入，C.gloeosporioides與C.acutatum均被鑒定為復合種[6]。

目前針對炭疽病防治的主要手段是化學防治，但長期濫用單一的化學農(nóng)藥易導致病原菌產(chǎn)生抗藥性。芒果炭疽病菌對咪鮮胺和多菌靈的敏感性研究較多[5，7]，而對苯醚甲環(huán)唑的敏感性報道較少，張令宏[7]從供試的136株芒果炭疽病菌C.gloeosporioides中僅選8株測定了對苯醚甲環(huán)唑的敏感性。然而，不同種類或不同來源的芒果炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性是否存在差異卻鮮有報道。本文對從中國主要芒果產(chǎn)區(qū)（云南、貴州、四川、海南、福建和廣東）分離得到的136個炭疽病菌株進行苯醚甲環(huán)唑敏感性測定，以期為田間芒果炭疽病的后續(xù)防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：2016年-2017年從中國6個省（云南、貴州、四川、海南、福建和廣東）采集罹患炭疽病的芒果葉片和果實，在室內進行病原菌分離純化，共得到136個炭疽病菌菌株[8]，斜面4℃和濾紙-20℃保藏于廣西農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所。

供試藥劑及培養(yǎng)基：10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（WG），先正達南通作物保護有限公司;馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（potato dextrose agar， PDA）。

1.2 方法

采用菌絲生長速率法[9]。將在PDA平板上活化的136個炭疽病菌菌株用5 mm打孔器打孔，挑取菌絲塊分別置于苯醚甲環(huán)唑終濃度為100、10、1、01、0.01 mg/L的PDA平板上，無菌水作對照，每個處理設4個重復（培養(yǎng)皿），25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)到對照組菌落長滿平皿，用十字交叉法量取每個濃度的菌落直徑。

1.3 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)含藥濃度不同平板上的菌落直徑，采用Excel程序計算抑菌率[5]。采用DPS軟件計算苯醚甲環(huán)唑對各菌株的有效抑制中濃度（EC50）[10]。采用SPSS軟件的Shapiro-Wilk法對EC50進行正態(tài)分布檢驗[11]。采用DPS軟件Duncan氏新復級差法對不同地理來源或種類菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性進行單因素方差分析。

2 結果與分析

2.1 芒果炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑敏感性

通過菌絲生長速率法測定了136個炭疽病菌菌株對苯醚甲環(huán)唑敏感性，結果表明，苯醚甲環(huán)唑對炭疽菌的EC50范圍主要在0～2 mg/L，平均值為（146±0.14）mg/L，其中EC50最小值為0.09 mg/L，最大值為9.74 mg/L，兩者相差近110倍，不同菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性存在顯著差異。經(jīng)SPSS軟件Shapiro-Wilk方法測得W值為0.72 mg/L，P值為0.00 （<0.05），說明供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性頻率分布不符合正態(tài)分布（圖1）。

2.2 不同地理來源菌株對苯醚甲環(huán)唑敏感性

從中國6個省分離得到的芒果炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑敏感性的方差分析結果表明，苯醚甲環(huán)唑對不同地區(qū)的芒果炭疽菌群體的平均EC50無顯著差異（P=0.42），其中，苯醚甲環(huán)唑對采自貴州地區(qū)菌株的平均EC50最高，為1.91 mg/L，對采自海南地區(qū)的菌株平均EC50最低，為1.00 mg/L（表1）。

2.3 不同種類芒果炭疽菌對苯醚甲環(huán)唑敏感性

供試的芒果炭疽病菌包括C.asianum、C.siamense、C.fructicola、C.karstii、C.endophytica、C.scovillei、C.cliviicola、C.gigasporum、C.gloeosporioides、C.liaoningense、C.musae、C.tropicale和C.cordylinicola 13個種和8個未鑒定到種的菌株。苯醚甲環(huán)唑對13個種的平均EC50分別為099、1.57、1.92、1.57、0.87、0.48、1.45、2.70、489、195、3.36、2.67 mg/L和0.40 mg/L，其中對C.cordylinicola的平均EC50最低，對C.gloeosporioides 的平均EC50最高（表2）。

3 結論與討論

本文采用生長速率法測定了分離自我國6省芒果產(chǎn)區(qū)的136株芒果炭疽菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，結果表明不同菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性存在顯著差異，且部分菌株對苯醚甲環(huán)唑敏感性顯著降低，可能是由于田間長期使用單一藥劑從而使病原菌產(chǎn)生了耐藥性。苯醚甲環(huán)唑屬于甾醇14α脫甲基抑制類（demethylation inhibitors， DMI）三唑類殺菌劑，是世界上用量最大的手性殺菌劑品種，這類藥劑殺菌機理是通過破壞病原菌細胞膜功能從而導致細胞死亡[12]。Wong等[13]發(fā)現(xiàn)噴施DMI類殺菌劑能誘導炭疽菌屬真菌Colletotrichum spp.產(chǎn)生一定程度的耐藥性。

我國關于芒果炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性研究，主要集中在膠孢炭疽菌，如王萌等[14]測定了2株膠孢炭疽菌C.gloeosporioides對苯醚甲環(huán)唑敏感性，其EC50分別為0.43和3.92 mg/L。膠孢炭疽菌被認為是造成芒果炭疽病最主要的種，但膠孢炭疽菌是包含很多形態(tài)學上相似的炭疽菌種的復合種[15]。本研究供試的136個菌株除了8個未鑒定到種的菌株外，其他128個菌株被歸為6個炭疽復合種，其中C.asianum、C.siamense、C.fructicola、C.endophytica、C.gloeosporioides、C.musae、C.tropicale和C.cordylinicola屬于膠孢炭疽菌復合種（C.gloeosporioides species complex）;C.karstii屬于博寧炭疽菌復合種（C.boninease species complex）;C.scovillei屬于尖孢炭疽菌復合種（C.acutatum species complex）;C.gigasporum屬于長直孢炭疽菌復合種（C.gigasporum species complex）;C.liaoningense屬于C.magnum 復合種，C.cliviicola屬于C.orchidearum復合種[6，16]。本研究是國內首次報道不同芒果炭疽病菌復合種、不同地理來源芒果炭疽菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，結果可為我國芒果炭疽病的防治提供參考。

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（責任編輯：楊明麗）