周莉媛 ，陳斌，裴超信，邵靚，王強，車從成，丁夢蝶

（1.四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041；2.四川省綿陽市動物疫病預防控制中心，四川 綿陽 621000；3.四川省三臺縣動物疫病預防控制中心，四川 三臺 621100）

牛結(jié)節(jié)性皮膚病又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛結(jié)節(jié)性皮炎，是由痘病毒科、脊椎動物痘病毒亞科、山羊痘病毒屬的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（LSDV）引起的一種急性、亞急性傳染病。牛是LSDV的天然宿主，各年齡和品種的牛均易感，發(fā)病率在2%～45%，死亡率一般在10%以下。節(jié)肢動物的機械性間接傳播被認為是LSDV傳播的主要途徑。病牛臨床特征是發(fā)熱、消瘦，淋巴結(jié)腫大，皮膚水腫，局部形成堅硬的結(jié)節(jié)或潰瘍，其皮張鞣制后具有凹陷或孔洞，利用價值大大降低。

1 臨床癥狀

患牛頭、頸、軀干、四肢皮膚有散在的直徑約1～2 cm的硬結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)處皮溫較高，觸之牛痛感明顯。病牛精神、食欲無明顯變化。

2 實驗室診斷

2.1 實驗材料 采集病牛血樣及口、鼻拭子和結(jié)節(jié)創(chuàng)口拭子。

檢測試劑：牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒實時熒光PCR檢測試劑盒。

2.2 病毒DNA提取 樣品處理后使用核酸提取試劑盒（磁珠法）和核酸自動提取儀進行核酸提取。

2.3 實時熒光PCR反應(yīng) 嚴格按照檢測試劑說明書操作。反應(yīng)體系：無菌無核酸酶水5.9 μL，PCR 反應(yīng)液10 μL，熒光探針2.1 μL，模板DNA 2 μL，總反應(yīng)體積20 μL。反應(yīng)條件：95 ℃2 min，循環(huán)95 ℃5 s，60 ℃35 s，共40次，每次循環(huán)的第二步（60 ℃ 35 s）收集熒光信號（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。

2.4 結(jié)果判定 陽性對照Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線，陰性對照無Ct值并且無特定擴增曲線，實驗結(jié)果成立。被檢樣品Ct值≤36并出現(xiàn)特定的擴增曲線，為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒陽性。被檢樣品均呈陽性。

3 小結(jié)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒與山羊痘病毒、綿羊痘病毒同屬山羊痘病毒屬，三者基因組的同源性高，羊痘病毒屬的病毒可產(chǎn)生共同的中和抗體，故依賴血清學方法較難鑒別該屬病毒，常規(guī)檢測方法不能對早期發(fā)病動物進行快速準確的診斷。采用實時熒光PCR 方法檢測牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒是既快速又準確的檢測方法。

為防止該病擴散，應(yīng)嚴格按照《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》的要求撲殺病牛并做好無害化處理，同群牛進行隔離，限制牛只、牛產(chǎn)品和飼料及相關(guān)用具的移動，圈舍和隔離環(huán)境徹底消毒，做好蚊蟲的消殺工作，同時對周邊養(yǎng)牛場（戶）開展排查，限制周邊牛只移動交易。必要時，?？刹捎蒙窖蚨灰呙纾ò凑丈窖虻? 倍劑量）緊急免疫。