劉剛，譚蔚，李世榮，鄺愛玲

湘南學(xué)院附屬醫(yī)院，湖南郴州423000

新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)屬一類獲得性疾病，主要是由于多種原因所致的腸黏膜損傷，造成缺血缺氧、小腸出現(xiàn)彌漫性或局部壞死，可出現(xiàn)腹脹、便血、腸黏膜甚至腸深層壞死等癥狀體征。但該病的臨床特征缺乏特異性，誤診、漏診率偏高，較多患兒在確診時(shí)已出現(xiàn)較嚴(yán)重的腸道壞死，預(yù)后不佳[1]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，該病在我國(guó)新生兒重癥監(jiān)護(hù)并發(fā)癥的發(fā)病率為1%～5%、病死率為16%～20%，是導(dǎo)致新生兒死亡的重要危險(xiǎn)因素[2]。因此，尋找診斷NEC的有效生物標(biāo)志物極為重要。沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(SIRT1)是一種重要的抗炎、抗氧化應(yīng)激蛋白，與機(jī)體的炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)等密切關(guān)聯(lián)。目前已有較多報(bào)道指出，炎癥性腸病患者血清SIRT1明顯較低，在該病的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用[3，4]。有研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道黏膜活檢組織中SIRT1 mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低[5]。但上述研究多集中于成人，對(duì)其在新生兒炎癥性腸病中的相關(guān)研究較少。因此，本研究檢測(cè)了NEC患兒血清SIRT1水平變化，并分析其診斷價(jià)值，旨在為NEC的診斷提供新的檢測(cè)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇湘南學(xué)院附屬醫(yī)院2017年1月～2018年7月收治的60例NEC患兒(觀察組)，男34例、女26例，胎齡(38.25±1.82)周，出生體質(zhì)量(2 985.45±371.23)g，發(fā)病時(shí)間為出生后(7.44±2.30)d，疾病臨床分期Ⅰ期22例、Ⅱ期28例、Ⅲ期10例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合NEC診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②NEC臨床分期Ⅰ～Ⅲ期；③發(fā)病時(shí)間為出生后2 h～36 d。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并先天性消化道畸形；②合并腹瀉、中毒性巨結(jié)腸等消化系統(tǒng)疾??；③合并其他感染性、傳染性疾病。選擇同期于本院分娩的50例健康新生兒(對(duì)照組)，男27例、女23例，胎齡(38.69±1.88)周，出生體質(zhì)量(3 013.39±331.71)g，排除合并休克、遺傳性代謝疾病、全身炎癥反應(yīng)綜合征、敗血癥、消化系統(tǒng)疾病、感染性疾病等。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組性別、胎齡、體質(zhì)量具有可比性。受試對(duì)象均為足月兒，患兒監(jiān)護(hù)人均簽署研究知情同意書。

1.2 血清SIRT1檢測(cè)方法 入組后空腹?fàn)顟B(tài)下取頭皮或上肢靜脈血2 mL，置于血培養(yǎng)瓶中；靜置于室溫下2 h后，置入離心管中；以2 000 r/min離心10 min，提取上層血清液并移入EP管，-90 ℃冰箱中儲(chǔ)存待檢。采用ELISA法檢測(cè)血清SIRT1，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清SIRT1水平比較 觀察組血清SIRT1水平為(6.58±1.37)ng/mL，低于對(duì)照組的(11.06±1.82)ng/mL(P<0.05)。

2.2 觀察組不同分期患兒血清SIRT1水平比較 觀察組Ⅰ～Ⅲ期患兒血清SIRT1分別為(9.48±1.52)、(7.25±1.49)、(4.05±1.17)ng/mL，各期間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.3 血清SIRT1對(duì)NEC的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清SIRT1診斷NEC的曲線下面積(AUC)為0.965，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.007，95%CI為0.945～0.991，P<0.05。其對(duì)NEC的最佳診斷截?cái)嘀禐?.84 ng/mL，對(duì)應(yīng)的敏感度、特異度分別為94.70%、89.50%。

3 討論

NEC是新生兒科中較為常見的一種消化系統(tǒng)疾病，研究認(rèn)為其發(fā)病與新生兒缺氧、感染或喂養(yǎng)不當(dāng)?shù)扔嘘P(guān)。該病好發(fā)于早產(chǎn)兒，多數(shù)在出生后2周內(nèi)發(fā)病，足月兒可在1周內(nèi)發(fā)病。疾病初期可有胃潴留增加、腹脹、嘔吐等消化系統(tǒng)癥狀，或出現(xiàn)呼吸暫停、呼吸窘迫、體溫不穩(wěn)定、嗜睡等全身癥狀；隨著疾病進(jìn)展可出現(xiàn)大便性狀改變、血便等，嚴(yán)重者可導(dǎo)致呼吸衰竭、休克，甚至死亡。臨床上對(duì)NEC的診斷主要依靠臨床癥狀體征、腹部X線片以及醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)，但該病無典型臨床癥狀，易與急性腸炎、腸疊套等疾病混淆，有一定的誤診、漏診率[7，8]。因此，如何早期診斷、評(píng)估病情并給予積極治療，對(duì)于改善NEC患兒的預(yù)后極為重要。

炎癥因子的大量分泌以及氧化應(yīng)激反應(yīng)是腸道炎癥疾病發(fā)生的關(guān)鍵因素。SIRT是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的去乙酰化酶，具有維持穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞生存的作用；其中，SIRT1是第3類組蛋白去乙?；窼irtuin蛋白家族的成員，是細(xì)胞核中研究最多的一種乙?；?。有研究認(rèn)為，其對(duì)損傷反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子和p53具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用，能促使細(xì)胞在壓力中得以生存，具有重要的抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗衰老等特征[9，10]。有大量研究表明，SIRT1在慢性炎癥損傷過程中具有保護(hù)作用[11，12]。Tang等[13]報(bào)道，在機(jī)體缺血、缺氧等應(yīng)激狀態(tài)下，給予SIRT1激動(dòng)劑預(yù)處理，可緩解腦、心臟、腎臟等組織器官的損傷；并且，增加SIRT1表達(dá)可抑制Caspase-3表達(dá)，減少心肌細(xì)胞凋亡，對(duì)心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。Hansen等[14]研究顯示，SIRT1可降低小鼠結(jié)腸炎模型血清白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-1β等炎癥因子的表達(dá)，以緩解炎癥刺激對(duì)腸道黏膜的損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1的抗炎、抗氧化機(jī)制主要是通過去乙酰化在核因子(NF)-κB亞單位RelA/p65中發(fā)揮作用，進(jìn)而抑制NF-κB與核內(nèi)炎癥基因的相互結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的[15]。

本研究結(jié)果顯示，NEC患兒血清SIRT1水平降低，且隨疾病的進(jìn)展持續(xù)降低。這是由于隨著疾病的加重，腸上皮黏膜屏障不斷被破壞，造成機(jī)體產(chǎn)生大量炎癥因子、氧化反應(yīng)等，進(jìn)一步破壞上皮屏障穩(wěn)定性，刺激NF-κB活化，減少SIRT1的表達(dá)；此外，我們進(jìn)一步研究分析發(fā)現(xiàn)，血清SIRT1診斷NEC患兒的AUC為0.965，敏感度、特異度分別為94.70%、89.50%，顯示出血清SIRT1在診斷NEC患兒中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。但是，本研究未納入合并消化系統(tǒng)疾病、感染性疾病的患兒，對(duì)于血清SIRT1是否有助于炎癥性腸病的鑒別診斷等仍需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，NEC患兒血清SIRT1處于低水平，且隨著疾病的進(jìn)展而持續(xù)降低；血清SIRT1在早期診斷NEC中具有較高的敏感度和特異度，具有一定的臨床診斷和病情判斷價(jià)值。