南蘋(píng)瑤，王立琦，鮑光明，郭小權(quán)，王小鶯*

（1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)獸藥研究所，江西南昌 330045；2.陜西省渭南市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西渭南 714000）

【研究意義】在畜牧生產(chǎn)中，畜禽腹瀉是養(yǎng)殖生產(chǎn)的一類常見(jiàn)疾病，嚴(yán)重阻礙養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[1?2]。為防治疾病及促進(jìn)生產(chǎn)，大量抗菌藥物應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)從而導(dǎo)致抗菌藥物的濫用，引起藥物殘留，細(xì)菌耐藥譜不斷擴(kuò)大。因此，尋找一種安全有效的治療腹瀉的高產(chǎn)天然藥物至關(guān)重要。中藥鳳尾草歷史悠久、資源豐厚，具有廣譜抗菌、抗腫瘤及保肝作用[3]。其能治痢疾、腸炎、肝炎等[4]。鳳尾草在獸醫(yī)臨床上對(duì)豬、禽、牛、兔的痢疾能起治療作用。研究鳳尾草提取物抗腹瀉的藥理試驗(yàn)，為開(kāi)發(fā)鳳尾草資源提供理論依據(jù)。【前人研究進(jìn)展】鳳尾草的藥用價(jià)值高，臨床治療效果優(yōu)良。陳明仁[5]研究表明，鳳尾草合番石榴葉對(duì)急性濕熱型腹瀉具有良好的治療作用；胡荷斌等[6]以復(fù)方鳳尾草膠囊治療小腸濕熱和小兒消化不良，發(fā)現(xiàn)其對(duì)急性腸炎、慢性局限性腸炎及小兒腹瀉的顯效率分別為94%、97.4%及93.3%；【本研究切入點(diǎn)】鳳尾草作為一種歷史悠久的中藥，國(guó)內(nèi)外對(duì)鳳尾草提取物抗腹瀉的藥理研究尚未見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本文通過(guò)研究鳳尾草提取物對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)和胃排空的影響，醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的抑制作用、蓖麻油致小鼠腹瀉的對(duì)抗作用，在抗炎、止瀉等方面探究鳳尾草提取物抗腹瀉的藥理學(xué)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 受試藥與試劑 鳳尾草，全草采摘于江西省南昌市梅嶺風(fēng)景區(qū)內(nèi)。

0.7%醋酸生理鹽水溶液的配制：移液槍準(zhǔn)確吸取0.35 mL純冰醋酸，溶于50 mL的生理鹽水中。

0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液的配制：精確稱取伊文思藍(lán)0.5 g，充分溶解于100 mL的生理鹽水中。

多潘立酮混懸液的制備：多潘立酮片10 mg/片，將多潘立酮片用研缽充分研磨至粉末，多潘立酮以15 mg/kg的劑量，用蒸餾水按5 g/L的濃度加羧甲基纖維素鈉配成1.5 mg/mL的混懸液。

阿司匹林混懸液：阿司匹林腸溶片100 mg/片，腸溶片用研缽充分研磨至粉末，將阿司匹林腸溶片以5 g/L的濃度加羧甲基纖維素鈉制成20 mg/mL的水懸液，以0.2 g/kg劑量進(jìn)行灌胃，按0.1 mL/10 g灌胃給藥。

LB肉湯培養(yǎng)基、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基按常規(guī)方法來(lái)配制，121 ℃高壓滅菌處理，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

半固體營(yíng)養(yǎng)糊的制備：分別準(zhǔn)確稱取8 g奶粉、4 g糖、1 g活性炭末和4 g淀粉溶于125 mL蒸餾水中，加入5 g羧甲基纖維素（CMC），一邊以電爐加熱一邊攪拌，使羧甲基纖維素盡量溶解。配制成100 mL約100 g的黑色半固體糊狀物。冰箱4 ℃冷藏備用，用時(shí)水浴鍋預(yù)熱至37 ℃。

炭末懸液的制備：準(zhǔn)確稱取5 g活性炭末、1 g羧甲基纖維素（CMC）溶于100 mL雙蒸水中，邊加熱邊攪拌均勻制備成炭末懸液，冰箱4℃冷藏備用，使用時(shí)水浴鍋預(yù)熱至37℃。

1.1.2 主要儀器 50 g高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（DFT?50A，溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；循環(huán)水式真空泵（SHZ?D（Ⅲ），鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（ValueDightal G3，上海亞榮生化儀器廠）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH?4，國(guó)華電器有限公司）；

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 鳳尾草乙醇提取物的制備 將采摘的鳳尾草全草洗凈、曬干或放置在烘箱內(nèi)烘干，中藥粉碎機(jī)粉碎成粉末，密封保存隨時(shí)干燥。準(zhǔn)確稱取100 g鳳尾草粉末，粉末用濾紙包成長(zhǎng)條形，按照料液比為1∶30，用70%乙醇溶液將濾紙浸泡在圓底燒瓶?jī)?nèi)，提取溫度為50 ℃，乙醇回流提取3次，每次30 min，合并3次提取液。所得提取液即為鳳尾草的乙醇粗提液，溫度控制在60 ℃，提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，回收乙醇，將醇提物濃縮至少量液體后，倒入25 mL干燥的小燒杯內(nèi)，40 ℃干燥至膏狀物，至質(zhì)量不變。膏狀物于?20 ℃冷凍保存。臨用前用10%的DMSO溶液溶解制成所需藥液，4 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 鳳尾草對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)和胃排空的影響 取健康小鼠36只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、鳳尾草乙醇提取物高、低劑量組3組，每組各12只，雌雄各6只，雌雄分籠飼養(yǎng)，做好標(biāo)記。正常對(duì)照組小鼠按0.1 mL/20 g灌胃生理鹽水，鳳尾草乙醇提取物高劑量組、低劑量組分別以5 g/kg、2.5 g/kg劑量，按0.1 mL/20 g灌胃稀釋好的鳳尾草提取液，連續(xù)給藥4 d，末次給藥前禁食24 h，禁水2 h，給藥后1 h每只小鼠以0.6 mL/只灌胃半固體炭末混懸液，給完20 min后脫頸椎處死所有小鼠，開(kāi)腹，結(jié)扎胃賁門(mén)和幽門(mén)，小心取下胃，用濾紙拭干后稱胃全質(zhì)量，然后沿胃大彎剪開(kāi)胃體，洗去胃內(nèi)容物后濾紙拭干，稱胃凈質(zhì)量[7]。胃內(nèi)殘留物質(zhì)量為胃全質(zhì)量和胃凈質(zhì)量的差值，胃內(nèi)殘留率為胃內(nèi)殘留物占所灌半固體糊狀物質(zhì)量的百分比。同時(shí)迅速取出小腸全腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸拉成直線，測(cè)量幽門(mén)至回盲部的小腸全長(zhǎng)[8]，及炭墨推進(jìn)長(zhǎng)度為幽門(mén)至黑色半固體糊前沿的距離。以炭墨推進(jìn)長(zhǎng)度占幽門(mén)至回盲腸部全長(zhǎng)的百分率為小腸推進(jìn)率。試驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0做數(shù)據(jù)處理，進(jìn)行組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以表示。

1.2.3 鳳尾草對(duì)多潘立酮負(fù)荷下的小鼠小腸推進(jìn)作用 取健康小鼠30只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、單純多潘立酮組、單藥鳳尾草乙醇提取物組3組，每組小鼠各10只，雌雄各5只，雌雄分籠飼養(yǎng)，做好標(biāo)記（以左上/右上/左下/右下/不標(biāo)記區(qū)分）。正常對(duì)照組和單純多潘立酮組組小鼠按0.1 mL/10 g灌胃生理鹽水，鳳尾草乙醇提取物組以5 g/kg、0.1 mL/10 g劑量灌胃稀釋好的中藥提取液，連續(xù)給藥4 d，末次給藥前禁食12 h，禁水2 h，除正常對(duì)照組外，其他組均以0.1 mL/10 g先灌胃多潘立酮混懸液，灌胃完后30 min，正常對(duì)照組和單純多潘立酮組灌胃等體積生理鹽水，鳳尾草乙醇提取物組灌胃中藥提取液，灌胃給藥30 min后，按0.25 mL/10 g給予炭末灌胃，20 min后采用頸椎脫臼法處死所有小鼠，開(kāi)腹，結(jié)扎胃幽門(mén)，迅速取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸拉成直線，測(cè)量幽門(mén)至回盲部的長(zhǎng)度為小腸全長(zhǎng)，幽門(mén)至炭墨前沿的距離為炭墨推進(jìn)長(zhǎng)度[9]。以炭墨推進(jìn)長(zhǎng)度占幽門(mén)至回盲腸部全長(zhǎng)的百分率為小腸推進(jìn)率。試驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0做數(shù)據(jù)處理，進(jìn)行組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以表示。

1.2.4 鳳尾草對(duì)小鼠腹腔通透性試驗(yàn) 取健康小鼠32只，均為雄性，體質(zhì)量為（25±2.5）g，隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和鳳尾草高、低劑量組四組，每組8只小鼠，分兩籠飼養(yǎng)，每籠各4只，分別做好標(biāo)記（分別按左上/右上/尾/不標(biāo)記進(jìn)行區(qū)分），灌胃前記下每組每只小鼠的體質(zhì)量。其中鳳尾草高、低劑量組分別以5 g/kg、2.5 g/kg劑量，按0.1 mL/10 g灌胃稀釋好的藥液，陽(yáng)性對(duì)照組以0.2 g/kg劑量灌胃阿司匹林混懸液，模型組小鼠按0.1 mL/10 g灌胃生理鹽水。連續(xù)給藥5 d。每只小鼠給藥1 h后按0.2 mL/只尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液，尾靜脈注射不成功者宜舍棄。尾靜脈注射完立即按0.1 mL/10 g腹腔注射0.7%醋酸生理鹽水溶液，20 min后脫頸椎處死小鼠，處死小鼠腹腔注射3 mL生理鹽水，并輕輕按揉腹部，對(duì)腹腔進(jìn)行充分洗滌，后小心將腹部皮膚肌肉剪開(kāi)一個(gè)小口，用鑷子小心夾緊提起腹壁肌肉，以1 mL注射器小心多次吸取洗滌液，合并后3 000 r/min進(jìn)行離心15 min，取上清液（必要時(shí)生理鹽水進(jìn)行稀釋后）用雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于590 nm處測(cè)每只小鼠腹腔洗滌液的OD值。得到各組小鼠腹腔洗滌液的OD值后，SPSS17.0進(jìn)行分析，組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析差異性，以表示。

1.3 鳳尾草對(duì)蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響

1.3.1 隨機(jī)分組與給藥 取健康小鼠60只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、鳳尾草高、低劑量組4組，每組各10只，雌雄各5只，雌雄分籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)過(guò)程中做好標(biāo)記（分別以左上/右上/左下/右下/尾/不標(biāo)記進(jìn)行區(qū)分）。正常對(duì)照組和模型組小鼠按0.1 mL/10 g灌胃生理鹽水，鳳尾草乙醇提取物高劑量組以5 g/kg、低劑量組以2.5 g/kg按0.1 mL/10 g灌胃稀釋好的藥，連續(xù)給藥3 d，每次給藥前、后均各禁食禁水2 h，末次給藥后30 min，除正常對(duì)照組給予同體積生理鹽水外，各組均以0.2 mL/只灌胃蓖麻油，試驗(yàn)中給予藥液與給予蓖麻油的灌胃針完全區(qū)分開(kāi)，給予蓖麻油的灌胃針每次用完用紙拭干，并多次沸水浸泡。而后將小鼠反罩在燒杯下，燒杯下鋪濾紙片，觀察5 h，每隔30 min更換濾紙一次。觀察各組小鼠體態(tài)皮毛、精神狀態(tài)、行為變化、大便等的變化。試驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0做數(shù)據(jù)處理，進(jìn)行組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以表示。

1.3.2 觀察指標(biāo) （1）每小時(shí)腹瀉發(fā)生率和總腹瀉率。每小時(shí)腹瀉發(fā)生率：每組小鼠每小時(shí)內(nèi)的腹瀉只數(shù)與該組小鼠總只數(shù)之比?？偢篂a率：每組小鼠在觀察時(shí)間內(nèi)腹瀉只數(shù)與該組小鼠總只數(shù)之比。

（2）稀便次數(shù)、干便次數(shù)、總便次數(shù)[10]：以濾紙上每?；蛎慷眩ㄖ覆荒芊智辶?shù)者）糞便為排便一次；干便不黏連成顆粒狀；稀便多不成形，含水量大，內(nèi)有黏性液體；總便次數(shù)為干便次與稀便次數(shù)之和數(shù)。

（3）稀便率與稀便級(jí)、平均稀便級(jí)與腹瀉指數(shù)。平均稀便率：每只小鼠在觀察時(shí)間內(nèi)排總稀便次數(shù)與總排便次數(shù)之比，并求出該組小鼠的平均稀便率。稀便級(jí)：表示每只小鼠排稀便的程度，以稀便污染濾紙形成的污跡的直徑（cm）大小定級(jí)，分為四級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。污跡為圓形較規(guī)則的測(cè)其直徑；不規(guī)則形狀則測(cè)量其最長(zhǎng)和近似圓的直徑，兩數(shù)相加除以2[11]。

表1 稀便級(jí)數(shù)與污跡直徑對(duì)照表Tab.1 Comparison table of loose stool grade and diameter of stain

平均稀便級(jí)：統(tǒng)計(jì)時(shí)先逐個(gè)測(cè)量每只小鼠每一堆稀便的級(jí)數(shù)，然后將該只小鼠在觀察時(shí)間內(nèi)所有的稀便級(jí)數(shù)相加，除以排稀便次數(shù)得每只小鼠稀便的平均級(jí)數(shù)，最后求出該組小鼠的平均稀便級(jí)。

腹瀉指數(shù)：為稀便級(jí)與稀便率的乘積。

（4）稀便抑制率：（模型組每小時(shí)的平均稀便數(shù)－其余組每小時(shí)的平均稀便數(shù)）/模型組每小時(shí)的平均稀便數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 鳳尾草對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)和胃排空的影響

正常小鼠的小腸推進(jìn)作用試驗(yàn)是研究中藥抗腹瀉機(jī)理常用的方法之一。表2的數(shù)據(jù)顯示，鳳尾草提取物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響，雌雄小鼠之間有一定的差異。對(duì)于雌性小鼠，與正常小鼠相比，鳳尾草提取物高、低劑量組均能提高半固體糊胃內(nèi)殘留率及抑制小腸蠕動(dòng)，5 g/kg的鳳尾草乙醇提取物連續(xù)給藥3 d能顯著（P<0.05）提高胃內(nèi)殘留率，表明其有抑制正常雌性小鼠胃排空的作用，并且能極顯著（P<0.01）抑制小腸蠕動(dòng)；對(duì)于雄性小鼠，與正常小鼠相比，鳳尾草提取物高、低劑量組均能降低半固體糊胃內(nèi)殘留率及促進(jìn)小腸蠕動(dòng)，5 g/kg的鳳尾草提取物連續(xù)給藥3 d能顯著（P<0.05）降低胃內(nèi)殘留率，表明其有促進(jìn)正常雄性小鼠胃排空作用，并且能顯著（P<0.05）抑制小腸推進(jìn)。

表2 鳳尾草對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)及胃排空的影響（n=12，）Tab.2 Effect of Pteris multifda Poir.on small intestine propulsion and gastric emptying in normal mice

表2 鳳尾草對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)及胃排空的影響（n=12，）Tab.2 Effect of Pteris multifda Poir.on small intestine propulsion and gastric emptying in normal mice

“a”表示與模型組相比差異顯著（P<0.05），“A”表示差異極顯著（P<0.01）Compared with the model group，“a”means significant difference（P<0.05），“A”means extremely significant difference（P<0.01）

2.2 鳳尾草對(duì)多潘立酮負(fù)荷下的小鼠小腸推進(jìn)作用

與正常對(duì)照組相比，雄性單純多潘立酮組小腸推進(jìn)率顯著（P<0.05）升高，雌性小腸推進(jìn)率有所增加，說(shuō)明雄性胃腸亢進(jìn)模型建立成功。對(duì)于雌性小鼠而言，與正常對(duì)照組、單純多潘立酮組相比，鳳尾草乙醇提取物小腸推進(jìn)率均有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；對(duì)于雄性小鼠而言，與單純多潘立酮組相比，鳳尾草乙醇提取物小腸推進(jìn)率均減小，鳳尾草能顯著（P<0.05）減緩小腸蠕動(dòng)，表明鳳尾草乙醇提取物有拮抗多潘立酮，抑制雄性小鼠小腸蠕動(dòng)的作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 鳳尾草對(duì)多潘立酮負(fù)荷下的小鼠腸推進(jìn)的影響（n=10，）Tab.3 Effect of ethanol extract of Pteris multifda Poir.on intestinal propulsion of mice under the loading of domperidone

表3 鳳尾草對(duì)多潘立酮負(fù)荷下的小鼠腸推進(jìn)的影響（n=10，）Tab.3 Effect of ethanol extract of Pteris multifda Poir.on intestinal propulsion of mice under the loading of domperidone

與正常對(duì)照組相比，“a”表示差異顯著（P<0.05）；與單純多潘立酮組相比，“b”表示差異顯著Compared with the normal control group，“a”means significant difference（P<0.05）；Compared with the simple domperidone group，“b”means significant difference

多潘立酮是目前臨床上應(yīng)用較廣泛的促進(jìn)胃腸動(dòng)力藥，該藥進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)，不通過(guò)血腦屏障，直接作用于消化系統(tǒng)，促使胃腸道的平滑肌出現(xiàn)緊張性收縮，從而促進(jìn)胃排空和小腸的蠕動(dòng)。本試驗(yàn)通過(guò)給予小鼠多潘立酮的前提下研究鳳尾草對(duì)小腸推進(jìn)作用的影響，5 g/kg鳳尾草乙醇提取物能明顯降低雄性小鼠小腸推進(jìn)率，雌性小鼠作用不顯著，表明鳳尾草具有拮抗胃腸平滑肌緊張性收縮的興奮功能，具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用，使得腸道恢復(fù)節(jié)律性的運(yùn)動(dòng)，為探究鳳尾草的抗腹瀉機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。

2.3 鳳尾草對(duì)小鼠腹腔通透性的影響

與模型組相比，鳳尾草高、低劑量組與阿司匹林組均能降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性，鳳尾草提取物高劑量組作用更強(qiáng)。5 g/kg鳳尾草乙醇提取物與模型組差異極顯著（P<0.01），抑制率達(dá)37.327%。由此可見(jiàn)，5 g/kg的鳳尾草乙醇提取物的抗炎活性較好。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 鳳尾草對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（n=8，）Tab.4 The effect of Pteris multifda Poir.on the permeability of capillaries in the abdominal cavity of mice

表4 鳳尾草對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（n=8，）Tab.4 The effect of Pteris multifda Poir.on the permeability of capillaries in the abdominal cavity of mice

與正常對(duì)照組相比，“A”表示差異極顯著（P<0.01）Compared with the normal control group，“A”means extremely significant difference（P<0.01）

醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管的增高試驗(yàn)是常用的抗炎性滲出典型的模型之一。本研究顯示，5 g/kg、2.5 g/kg鳳尾草乙醇提取物均能抑制冰醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管的增高，5 g/kg作用極顯著，說(shuō)明鳳尾草乙醇提取物在一定濃度下極顯著抑制小鼠腹腔的急性炎性滲出。而選用的阿司匹林腸溶片作為陽(yáng)性對(duì)照藥，抑制率為30.415%。近年來(lái)，黃酮類化合物作為多數(shù)中藥的主要成分，其體內(nèi)抗炎作用已有研究。崔偉等[12]發(fā)現(xiàn)甘青虎耳草總黃酮能明顯抑制冰醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，并且能有效抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹；天山堇菜總黃酮在0.08 g/kg、0.16 g/kg、0.32 g/kg可顯著抑制冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管炎性滲出，在0.16 g/kg、0.32 g/kg可顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹[13]；說(shuō)明可能是鳳尾草中的黃酮類化合物發(fā)揮了抗炎作用。另外，吳立夫等[14]研究了苦參和風(fēng)輪萊對(duì)醋酸所致的兔腸黏膜毛細(xì)血管通透性增加的影響極顯著，來(lái)推測(cè)其對(duì)急性腸炎的作用。

2.4 鳳尾草對(duì)蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響

除正常對(duì)照組外，各組灌胃蓖麻油一段時(shí)間后，均表現(xiàn)出一定程度的腹瀉狀況，腹瀉小鼠表現(xiàn)為精神沉郁，倦怠乏力，毛發(fā)粗糙，眼周圍有分泌物，不易睜開(kāi)，排稀便次數(shù)有所增加，糞便較正常小鼠糞便偏黃褐色，無(wú)固定形狀，糞便含水量增加，內(nèi)有粘稠性液體，固體內(nèi)容物較少，表明模型建立成功。

對(duì)于0～5 h內(nèi)每小時(shí)的稀便數(shù)，除正常對(duì)照組外，各組灌胃蓖麻油均出現(xiàn)拉稀便，模型組在0～3 h內(nèi)拉稀程度隨著時(shí)間而加重，鳳尾草高、低劑量組在0～1 h稀便數(shù)量與模型組相當(dāng)，在1～2 h比模型組嚴(yán)重，但在2～5 h稀便數(shù)遠(yuǎn)低于模型組，說(shuō)明鳳尾草的止瀉起效時(shí)間在2 h。對(duì)于每小時(shí)的腹瀉發(fā)生率，與模型組相比，鳳尾草高、低劑量組0～5 h內(nèi)的腹瀉發(fā)生率均降低，高劑量組差異顯著（P<0.05），說(shuō)明鳳尾草發(fā)揮止瀉療效的時(shí)間主要在2～5 h。對(duì)于稀便抑制率，鳳尾草高劑量組在0～4 h達(dá)到最大值26.415%，說(shuō)明5 g/kg鳳尾草在4 h時(shí)抑制小鼠腹瀉作用最強(qiáng)。對(duì)于0～5 h的總腹瀉率，除正常組外，鳳尾草高劑量組在0～1 h、0～2 h、0～3 h、0～4 h的總腹瀉率遠(yuǎn)低于模型組，說(shuō)明5 g/kg鳳尾草發(fā)揮止瀉療效有較好的效果且持續(xù)時(shí)間久。與模型組相比，鳳尾草高劑量組在0～2 h的平均稀便級(jí)顯著降低（P<0.05），0～3 h、0～4 h極顯著降低（P<0.01），平均稀便率和平均腹瀉指數(shù)相對(duì)降低，說(shuō)明5 g/kg鳳尾草在2～4 h的止瀉療效最顯著。表明對(duì)于蓖麻油致小鼠腹瀉模型試驗(yàn)中，鳳尾草乙醇提取物有較好的止瀉作用，鳳尾草提取物高劑量組療效比低劑量組好。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 鳳尾草乙醇提取物對(duì)蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響（n=10，）Tab.5 Effect of ethanol extract of Pteris multifda Poir. on diarrhea induced by castor oil in mice

表5 鳳尾草乙醇提取物對(duì)蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響（n=10，）Tab.5 Effect of ethanol extract of Pteris multifda Poir. on diarrhea induced by castor oil in mice

“a”表示差異顯著（P<0.05），“A”表示差異極顯著（P<0.01）Compared with the model group，“a”means significant difference（P<0.05），“a”means extremely significant difference（P<0.01）

蓖麻油與番瀉葉、硫酸鎂、大黃等是致小鼠腹瀉模型的常用藥物，是研究中藥抗腹瀉機(jī)理常見(jiàn)的方法。蓖麻油屬于刺激性瀉藥，是能夠刺激小腸黏膜的致瀉劑。蓖麻油于小腸上部被脂肪水解酶水解成蓖麻醇酸，腸道平滑肌被水解產(chǎn)生的蓖麻醇酸刺激，而損害腸粘膜細(xì)胞并引起炎癥，使得腸蠕動(dòng)加快，抑制了水和電解質(zhì)的吸收，進(jìn)而出現(xiàn)滲出性的腹瀉[15]。選用蓖麻油做誘導(dǎo)小鼠小腸腹瀉，是通過(guò)促進(jìn)炎性因子的合成和釋放，刺激膜整合蛋白，引起細(xì)胞進(jìn)行信號(hào)應(yīng)答，增大腸液的分泌量以至于超過(guò)腸道的重吸收能力來(lái)造成的。

鳳尾草具有抗?jié)B出性腹瀉的作用，其主要成分黃酮類化合物具有抗炎、抗菌、抗氧化作用，作為鳳尾草的物質(zhì)基礎(chǔ)，可能是通過(guò)抗炎作用對(duì)抗炎癥介質(zhì)的致瀉作用而發(fā)揮著抗腹瀉效果。

3 討論

隨著全球新冠肺炎的爆發(fā)，中藥在全世界范圍內(nèi)受到廣泛認(rèn)可。中藥發(fā)揮作用的整體性、成分的可變性及之間相互作用的難以預(yù)測(cè)性、作用靶點(diǎn)的復(fù)雜性等，已成為研究中藥抗腹瀉機(jī)制的難點(diǎn)。目前許多研究者對(duì)中藥抗腹瀉作用機(jī)制進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)中藥的抗菌、抗腹瀉密切相關(guān)，多方位發(fā)揮作用。

采用醋酸致小鼠腹腔膜毛細(xì)血管通透性增大的模型考察中藥抗炎作用，由腹腔滲透液中生物染料伊文思藍(lán)的含量差異反應(yīng)中藥作用后毛細(xì)血管通透性的不同。炎癥介質(zhì)是一類致瀉性自體活性物質(zhì)，臨床所見(jiàn)的大多數(shù)瀉藥和腹瀉性疾病均是致病因子使腸道發(fā)生炎癥，從而釋放各種炎性介質(zhì)如花生四烯酸、前列腺素和組胺等，導(dǎo)致動(dòng)、靜脈擴(kuò)張，增加血管滲透壓，引起體液和血漿蛋白的滲出。因此，藥物可以通過(guò)抗炎過(guò)程來(lái)達(dá)到止瀉效果。本文中鳳尾草提取物能抑制急性炎性滲出作用，可能是抑制液體從腸壁向腸腔的滲出而抑制急性腸炎的滲出。

蓖麻油致小鼠腹瀉模型及小鼠小腸推進(jìn)試驗(yàn)是探究中藥抗腹瀉機(jī)理常用的方法。寄生于腸道內(nèi)的致病性大腸桿菌是引起畜禽腹瀉的一大原因。大腸桿菌在小腸內(nèi)定殖，其黏附作用借助于菌毛黏附素和靶細(xì)胞表面相應(yīng)的受體，產(chǎn)生腸毒素，破壞小腸內(nèi)水和電解質(zhì)的正常吸收和排泄的動(dòng)態(tài)平衡，而引起劇烈腹瀉。患大腸桿菌病的畜禽常伴發(fā)急性腸炎，主要病變?cè)谛∧c，與蓖麻油作用部位一致，蓖麻油通過(guò)促進(jìn)炎性介質(zhì)的釋放致炎、致腹瀉。鳳尾草抗蓖麻油引起的腹瀉有很好的止瀉效果，為研究其對(duì)實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌腹瀉的藥效試驗(yàn)提供了理論基礎(chǔ)。