葛 敏，張?zhí)K珍，賀 燕，陶 威

（連云港市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇 連云港 222001）

隨著飼料行業(yè)的快速發(fā)展，無論是植物性、動(dòng)物性飼料原料的需求量都在不斷增大，飼料產(chǎn)品種類繁多，價(jià)格上漲，粗蛋白含量檢測(cè)這個(gè)基本手段也就顯得尤為重要。為了確保粗蛋白含量測(cè)定結(jié)果接近真值，樣品的采集、制備、稱量、消煮、測(cè)定都必須準(zhǔn)確而規(guī)范。文章就飼料中粗蛋白含量測(cè)定的注意要點(diǎn)進(jìn)行探討與分析，以期為粗蛋白含量的測(cè)定提供幫助。

1 樣品的采集

在飼料企業(yè)生產(chǎn)中，飼料原料、成品檢測(cè)時(shí)一般都由化驗(yàn)員采集樣品，樣品采集方法是否規(guī)范直接影響到樣品檢測(cè)結(jié)果的最終評(píng)判。采樣是隨機(jī)的，依飼料原料的種類、狀態(tài)、數(shù)量以及分析目的不同，采樣方法也不盡相同。

散裝原料應(yīng)在貨堆的前面、中間和后面抽取樣品，按貨堆高度分層采樣，先上后下，各點(diǎn)采樣不低于200 g。飼料成品應(yīng)在出料口采樣，每10袋用取樣釬采樣1次，每次取樣不少于200 g。

2 樣品的制備

采集的樣品要基本代表全部樣本。由于飼料在生產(chǎn)過程中的工藝限制，飼料顆粒常常不均勻，所以在檢測(cè)前要通過粉碎來實(shí)現(xiàn)稱量樣品的均勻性，從而使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

將采集的樣品粉碎后按“四分法”混合，每個(gè)樣品平均分成二份，一份為檢驗(yàn)品，一份為復(fù)驗(yàn)品，貼標(biāo)簽并標(biāo)明樣品名稱、來源、規(guī)格、采樣人、采樣日期等內(nèi)容。樣品應(yīng)避光保存，容易腐敗的樣品需采用冷凍干燥法或低溫保存[1]。

不同的樣品因?yàn)椴馁|(zhì)不同，在粉碎時(shí)要注意不同事項(xiàng)，如棉粕，因?yàn)橛忻藿q，粉碎時(shí)就要注意粉碎時(shí)間適當(dāng)延長；魚粉在稱量前也要進(jìn)行粉碎，并防止骨肉分離；蝦殼粉也不是太好粉碎，特別是水分比較大的，若粉碎時(shí)間長容易燒壞粉碎機(jī)的電機(jī)，而且也會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，可以采用間歇式粉碎。

3 樣品的稱量

用分析天平稱取樣品0.5～1 g，準(zhǔn)確至0.0002 g，無損失地放入凱氏燒瓶底部，同時(shí)進(jìn)行平行樣檢測(cè)，以反映分析結(jié)果的精密度。

4 樣品的消煮

樣品消煮是蛋白質(zhì)測(cè)定過程中的重要環(huán)節(jié)，是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵[2-3]。在裝有樣品的凱氏燒瓶中加入混合催化劑6.4 g，硫酸12 mL和兩粒玻璃珠，置于可調(diào)電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化、泡沫消失后，再加大火力（360～410 ℃），直至呈透明的藍(lán)綠色，繼續(xù)加熱不得低于2 h，樣品的蛋白質(zhì)含量高時(shí)可適當(dāng)延長消煮時(shí)間，但過長的消煮時(shí)間對(duì)蛋白質(zhì)含量的提高并沒有顯著影響。中間過程若有黑點(diǎn)殘留瓶壁，可輕搖瓶身，將黑渣搖入瓶底硫酸中；對(duì)于頑固的黑渣可用少量硫酸沖洗到瓶底，再繼續(xù)消煮，避免樣品消化不完全。在這個(gè)過程中，一定要注意安全，小心被燙或被噴，瓶口不要對(duì)著他人或自己。

有的樣品，如劣質(zhì)魚粉、蝦殼粉、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等，在消煮過程會(huì)產(chǎn)生非常態(tài)的大量泡沫，要注意觀察，要小火加熱至泡沫完全消失，再加大火力?？尚』鸺訜嶂镣该鞯乃{(lán)綠色后再加大火力，繼續(xù)加熱不得低于2 h。

5 樣品的測(cè)定

5.1 系統(tǒng)密閉性檢查

整個(gè)蒸餾裝置所有接口應(yīng)該使用凡士林密封完全，接氣管不得漏氣，以保證蒸餾系統(tǒng)的密閉性，使用的試劑和操作的步驟不得有誤，從而保證測(cè)定效果的準(zhǔn)確性。

5.2 空白的測(cè)定

稱取蔗糖0.5 g，同樣品操作，進(jìn)行空白測(cè)定。

在整個(gè)操作過程中，空白測(cè)定是一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，好的空白值是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的前提，空白樣品滴定鹽酸消耗量以0.05～0.30 mL為宜。測(cè)定時(shí)若發(fā)現(xiàn)空白值過高，應(yīng)認(rèn)真查找原因并及時(shí)解決?？瞻字党瑯?biāo)一般是由于試驗(yàn)用水等級(jí)不夠、所用試劑不純、玻璃器皿不干凈等原因造成[4]。

5.3 自我校驗(yàn)

樣品測(cè)定之前，稱取0.2 g 硫酸銨，精確至0.0002 g，直接蒸餾，同樣品操作測(cè)定，測(cè)得硫酸銨含氮量為（21.19±0.20）%，否則應(yīng)檢查接氣管是否漏氣；加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。硫酸銨測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性可以證明系統(tǒng)氣密性完好和操作的準(zhǔn)確性。

5.4 樣品的蒸餾

氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法是將樣品分解消煮后全部用于測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度、精確度都很高，操作也比較簡(jiǎn)單，但是需要試劑量多，成本高、污染大，若測(cè)定操作失誤也沒辦法重新測(cè)定，需要重新消煮樣品。半微量法測(cè)定的結(jié)果精密度稍差一點(diǎn)，但就成本和環(huán)境來講，半微量法是可取的，而且還可以反復(fù)測(cè)定。

蒸餾時(shí)要注意兩點(diǎn)：一是反應(yīng)容器里的溶液總體積要控制，在沖洗加樣口時(shí)用水要適中，否則反應(yīng)室溶液太多，蒸餾時(shí)溶液溫度升高液面隨之升高，容易噴進(jìn)冷凝管內(nèi)，造成結(jié)果偏大。二是要控制蒸汽量和加熱溫度，蒸汽產(chǎn)生要均勻，防止暴沸；若蒸汽量太大會(huì)將反應(yīng)液噴進(jìn)冷凝管中，影響結(jié)果，可以從三通處稍微放點(diǎn)氣，使蒸汽量適中；蒸汽量太小，蒸餾速度慢，蒸餾不完全，并且容易發(fā)生倒流，導(dǎo)致本次試驗(yàn)操作失敗，要根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整加熱溫度。

5.5 樣品的滴定

滴定用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度應(yīng)根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的蛋白質(zhì)含量確定，濃度過大易造成結(jié)果誤差也大，要稀釋后再滴定，濃度必須準(zhǔn)確。標(biāo)準(zhǔn)溶液在使用前應(yīng)將溶劑瓶搖晃幾次，使凝結(jié)到瓶壁上的水珠完全溶入到溶液之中，確保溶液濃度均勻一致。滴定時(shí)要排掉滴定管底部的氣泡，滴定速度像斷了線的水珠，并確保滴定結(jié)果準(zhǔn)確。滴定后的灰紅色應(yīng)與未蒸餾前的灰紅色一致[5]。

日常工作中，應(yīng)嚴(yán)格遵守操作要求，在每一步操作中應(yīng)盡量避免氮的損失，消除由于反應(yīng)不完全對(duì)結(jié)果的影響，取得較為準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。

影響飼料中粗蛋白測(cè)定結(jié)果的因素很多，筆者根據(jù)實(shí)踐中對(duì)飼料中粗蛋白含量測(cè)定的工作經(jīng)驗(yàn)，討論分析了影響飼料中粗蛋白含量測(cè)定結(jié)果的幾個(gè)因素，主要闡述樣品采集、制備、稱量、消煮、測(cè)定過程中的注意事項(xiàng)及操作要點(diǎn)，希望為準(zhǔn)確測(cè)定飼料中粗蛋白含量提供參考。