鄒彎彎 羅慶豐 曾 平 李金高

鼻咽癌是腫瘤科常見的惡性腫瘤之一[1]，臨床表現(xiàn)為鼻塞、涕中帶血、耳悶堵感、聽力下降、復(fù)視及頭痛[2]。鼻咽癌患者腫瘤是由腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及其他細(xì)胞外基質(zhì)等構(gòu)成[3]。腫瘤微環(huán)境浸潤的巨噬細(xì)胞被稱作腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞[4]，能夠促進(jìn)分泌多種細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展進(jìn)程[5]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可分為M1和M2兩種亞型，M2型主要作用是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和免疫抑制。IL-10是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的重要指標(biāo)。非編碼的腫瘤抑制分子分為3p和5p兩個亞型，在鼻咽癌等多種腫瘤中表達(dá)均下調(diào)，是重要的抑癌分子。目前，針對miR-34c-3p與鼻咽癌中M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的研究尚缺乏。本研究探討miR-34c-3p與M2型TAM在鼻咽癌患者中的表達(dá)及意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年12月至2020年12月我院收治的50例鼻咽癌患者作為觀察組，50例鼻炎患者為對照組。觀察組男性29例，女性21例，平均年齡(53.04±3.69)歲；對照組男性27例，女性23例，平均年齡(52.85±3.50)歲。兩組患者一般資料具有可比性(P<0.05)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理檢查確診為鼻咽癌；(2)自愿接受并配合本研究者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他心腦血管疾患；(2)合并腫瘤轉(zhuǎn)移者；(3)非首次確診及診治的患者。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 觀察組采集術(shù)后新鮮腫瘤組織標(biāo)本，對照組采取鼻咽部正常腺體組織。將采集好的組織分成兩份，一份經(jīng)液氮迅速冷凍保存；另一份用于流式細(xì)胞檢測。采集兩組患者外周血標(biāo)本， 檢測ELISA。

1.3.2 miR-34c-3p表達(dá)的檢測 采用PCR法檢測。預(yù)變性95℃、10 min，變性95℃、15 s，退火60℃、1 min，進(jìn)行40個循環(huán)。

1.3.3 M2型TAM表達(dá)的檢測 將組織標(biāo)本研磨成勻漿后加入生理鹽水混勻過濾制作單細(xì)胞懸液，1500 r/min離心5 min，去除上清，然后加1ml PBS緩沖液，然后進(jìn)行第二次離心，重復(fù)3次后將重懸細(xì)胞用錫箔紙包住在流式細(xì)胞儀上分析。

1.3.4 血清IL-10檢測 采用ELISA法進(jìn)行檢測，將分離好的血清標(biāo)本800 r/min，5 min離心后覆蓋鋁箔紙，置于37℃環(huán)境中孵育2 h，然后移出上清液，加100 μl檢測試劑A，覆蓋鋁箔紙置于37℃環(huán)境中孵育1 h，再次移出上清液，重復(fù)該步驟，逐次縮短孵育時間(每次縮短為前一次的1/2 h)直至終止溶液反應(yīng)，應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測。

1.3.5 兩組患者5年后生存率比較 通過為期5年的隨訪，比較兩組患者生存情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組鼻咽組織中miR-34c-3p的表達(dá)

兩組鼻咽組織標(biāo)本中均有miR-34c-3p的表達(dá)，觀察組miR-34c-3p的平均相對表達(dá)量為(110.15±10.64)、對照組miR-34c-3p的平均相對表達(dá)量為(99.83±10.06)，觀察組高于對照組(P<0.05)，見表1。

2.2 兩組患者血清中IL-10水平

兩組患者血清中IL-10均有表達(dá)，觀察組血清IL-10平均水平為(19.30±4.85)pg/ml，對照組血清IL-10平均水平為(16.48±3.42)pg/ml，兩組比較P<0.05，見表1。

表1 兩組患者miR-34c-3p、M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、IL-10水平比較

2.3 兩組患者5年后生存情況比較(表2)

表2 兩組患者5年后生存情況比較(例，%)

3 討論

關(guān)于鼻咽癌的研究已經(jīng)較多了，但是其發(fā)病機(jī)制還尚未闡明，鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制也一直是腫瘤科的研究熱點。既往關(guān)于腫瘤的研究顯示miR-34c-3p在消化道腫瘤、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中均呈下調(diào)表達(dá)[6]，miR-34c-3p是人體十分重要的癌癥抑制因子[7]，能夠有效Hep-2細(xì)胞的生長與浸潤，具有明顯的抑制腫瘤增長和延緩細(xì)胞衰亡的作用[8]?，F(xiàn)有的研究顯示miR-34c-3p抑制腫瘤的發(fā)生于進(jìn)展可能與Notch2通路有關(guān)，而且已有的研究顯示miR-34c-3p在鼻咽癌中的表達(dá)均降低，對鼻咽癌腫瘤因子抑制作用明顯[9]。本研究結(jié)果顯示miR-34c-3p的在鼻咽癌的表達(dá)降低，表明miR-34c-3p確實能夠抑制鼻咽癌細(xì)胞分化。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞相比起腫瘤細(xì)胞，基因表達(dá)更穩(wěn)定。M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞細(xì)胞表面具有CD68及CD206等特征性蛋白分子，能高分泌白細(xì)胞介素-10 (IL-10)，加快免疫抑制，M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在鼻咽癌中扮演著加快腫瘤增殖、促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用[10]，本究結(jié)果顯示，與正常對照組相比較，觀察組患者的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞比例高于對照組(P<0.05)，也證實了M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在鼻咽癌中的作用。通過分析miR-34c-3p與M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞及IL-10水平的關(guān)系發(fā)現(xiàn)miR-34c-3p與M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、miR-34c-3p與IL-10水平均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，表明miR-34c-3p在鼻咽癌的發(fā)病與進(jìn)展中起著抑制作用。兩組患者5年后的生存率比較差異明顯(P<0.05)，表明隨著M2型的細(xì)胞數(shù)目的增多，患者的生存年限下降。

綜上，miR-34c-3p能夠抑制鼻咽癌的進(jìn)展，是治療的新靶點，但是其具體作用方式與作用機(jī)制還有待研究。