陳忠新，茍鑫宇，李 強(qiáng)，解 穎，田 明

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040; 2.哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

清心蓮子飲出自《太平惠民和劑局方》。此方在歷代醫(yī)籍中多有記載，臨床應(yīng)用廣泛，功效顯著[1]。全方由蓮子、車前子、黃芩、地骨皮、人參、茯苓、麥冬、炙黃芪、炙甘草9 味中藥組成，方中黃芩為臣藥，奏清肺而退虛熱之效，炙甘草補(bǔ)脾和胃并調(diào)合諸藥為使藥。全方共奏清心火，益氣陰，止淋濁之功[2-5]。黃芩苷和甘草酸銨分別為黃芩和炙甘草的有效成分[6,7]，本研究采用高效液相色譜法對兩種成分進(jìn)行測定，為清心蓮子飲的質(zhì)量評(píng)價(jià)以及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器及試藥

ThermoU3000 型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）; KQ-500D 超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）; XJ220A 電子分析天平（上海天美天平儀器有限公司）；GLZY-0.5B 真空冷凍干燥機(jī)（上海浦東冷凍干燥設(shè)備有限公司）。

色譜甲醇、乙腈（迪馬科技有限公司）；其他分析純試劑為天津天大試劑有限公司生產(chǎn)。黃芩及炙甘草均為內(nèi)蒙古赤峰市道地藥材；標(biāo)準(zhǔn)品均采購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為黃芩苷（110715-201720）、甘草酸銨（110731-200615）。

2 黃芩苷含量測定

2.1 色譜條件

選用大連Elite ODS 色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），將檢測波長定為280nm，柱溫設(shè)置為25℃，將流速設(shè)置為1.0mL·min-1。

2.2 供試品溶液的制備

稱取處方量藥材飲片，煎取濾液，制備成凍干粉，精密稱取0.07g，于具塞錐形瓶中加入20mL 甲醇，超聲提取20min，濾過，蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?0mL，即得。

2.3 對照品溶液的制備

黃芩苷對照品12.25mg，精密稱取，甲醇溶解并定容至25mL，所制得標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為0.49mg·mL-1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性及相關(guān)系數(shù) 用ThermoU3000 型高效液相色譜儀，自動(dòng)進(jìn)樣量分別為2、4、6、8、10μL，按上述色譜條件測定?；貧w方程為Y=53.946X－0.191，R2=1。結(jié)果表明在0.196～0.98μg 范圍內(nèi)黃芩苷線性關(guān)系良好，見圖1。

圖1 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.1 Standard curve of Baicalin

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取2.2 項(xiàng)下供試品溶液，每次進(jìn)樣量10μL，于高效液相色譜儀中連續(xù)重復(fù)測定6 次，得黃芩苷峰面積的RSD 值為0.76%（RSD＜3%），表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.2 項(xiàng)下方法平行制備6 份清心蓮子飲供試品溶液，各進(jìn)樣10μL，測得黃芩苷平均含量為33.7934mg·劑-1，RSD 值為4.56%（RSD＜5%），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取配制好的同一供試品溶液，連續(xù)12h 每隔1h 進(jìn)樣10μL，得黃芩苷峰面積RSD值為1.12%，表明樣品12h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取上述6 份凍干粉各0.035g，分別加入0.49mg·mL-1的黃芩苷對照品溶液各1mL，制備成供試品溶液，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果6 批供試品回收率均在95%～105%之間，符合加樣回收率要求。

2.5 樣品含量測定

分別精密稱取3 批次清心蓮子飲凍干粉各0.07g，按確定的方法制備供試品溶液。每批進(jìn)樣10μL，計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

3 甘草酸銨含量測定

3.1 色譜條件

同上色譜柱，以乙腈- 0.05%磷酸（體積比19→50∶81→50）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為237nm，流速1.0mL·min-1。

3.2 供試品溶液的制備

精密量取上述水煎液50mL，用水飽和正丁醇每次50mL 萃取3 次，蒸干，定容至5mL 即得。

3.3 對照品溶液的制備

精取甘草酸銨對照品4.2mg，甲醇定容至10mL容量瓶中，制成濃度為0.42mg·mL-1的甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 線性及相關(guān)系數(shù) 甘草酸銨對照品溶液進(jìn)行高效液相色譜測定，進(jìn)樣量分別為2、4、6、8、10μL，得回歸方程為∶Y=8.605X-0.0224，R2=0.9992。結(jié)果表明甘草酸銨含量在0.84～4.2μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，見圖2。

圖2 甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of ammonium glycyrrhizinate

3.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 同2.4.3 方法測定，得甘草酸銨平均含量為4.5484mg·劑-1，RSD 值為4.05%，表明方法重復(fù)性良好。

3.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同2.4.4 方法測定，得甘草酸銨峰面積RSD 值為2.32%，表明在12h 內(nèi)測定該供試品溶液均是穩(wěn)定可行的。

3.4.4 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取上述6 份凍干粉各0.38g，分別加入0.42mg 2mL-1的甘草酸銨對照品溶液各1mL，制備成供試品溶液，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果6 批供試品加樣回收率均在95%～105%之間，且RSD 值均小于3%，符合要求。

3.5 樣品含量測定

同2.5，結(jié)果見表1。

表1 含量測定結(jié)果Tab.1 Content determination results

4 結(jié)論

通過建立高效液相色譜法，對清心蓮子飲中黃芩苷以及甘草酸銨兩種成分的含量進(jìn)行測定，結(jié)果兩種有效成分標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率RSD 值均小于5，表明該實(shí)驗(yàn)方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，可以用于檢測兩種成分的含量，且樣品12h 內(nèi)穩(wěn)定可靠。本研究推動(dòng)了該制劑的質(zhì)量控制，可以更加科學(xué)合理的指導(dǎo)清心蓮子飲的臨床合理應(yīng)用。