薛運波│文 李志勇│圖

1.雄蜂捕捉

（1）標記雄蜂日齡：在種用父群里，當雄蜂羽化出房時，用帶有顏色丙酮膠在其胸部背板上點上標記（圖1），出房12 天后雄蜂達到性成熟，可以捕捉采精。使用不同顏色的丙酮膠標記雄蜂好處有：一是可以識別不同日齡的雄蜂；二是在培育近交系時，可以區(qū)分同一品種、不同蜂群的雄蜂，實現(xiàn)母×子交配、兄×妹交配等近交目的。用丙酮膠標記雄蜂的數(shù)量要大，因為雄蜂沒有明顯的群界，極易飛散到其他蜂群中。在點標記時，切勿把丙酮膠點到雄蜂頭部及翅膀上，以免影響正常生理功能和行為。

圖1 多種顏色標識不同來源雄蜂

（2）雄蜂的捕捉

蜂巢內(nèi)捕捉雄蜂：進行非近親繁育時，在一個蜂場飼養(yǎng)的只有一個品種條件下，一般不需要給雄蜂點標記來區(qū)分某些事項，這樣進行選擇性成熟雄蜂前要了解雄蜂性成熟的一些特征表現(xiàn)。性成熟的雄蜂一般是聚集在邊脾、隔板、箱壁及隔王板上（圖2）；雄蜂腹部環(huán)節(jié)收縮的比較緊，腹部顯得堅硬，翅與腹部的比值略大于未成熟的雄蜂，行動比較靈敏。因此，在箱內(nèi)捕捉雄蜂時選擇具有上述特征表現(xiàn)，性成熟的比較多。捕捉時間在8～11 時，13～17 時。

圖2 巢內(nèi)捕捉雄蜂

巢門口捕捉雄蜂：在晴朗的日子里，雄蜂出巢飛翔一般在每天10～17 時，大量出巢飛翔的時間在12～16 時。巢門口捕捉雄蜂最好選擇在下午，捕捉者蹲在蜂箱側面，選擇歸巢、行動比較敏捷、腹部堅實的雄蜂進行捕捉，這樣的雄蜂基本上是性成熟的雄蜂（圖3）。

圖3 巢門口準備婚飛的雄蜂

（3）幽閉飼養(yǎng)雄蜂：為了減少捕捉性成熟雄蜂所消耗時間，可以把剛出房不久的雄蜂幽閉在雄蜂飼養(yǎng)籠里，不讓其出巢飛翔，待出房12 天以后性成熟時，從蜂群中取出雄蜂飼養(yǎng)籠，將雄蜂放到飛翔籠內(nèi)，在60～100 瓦的燈光照射下充分飛翔排泄15～20 分鐘，然后進行采精。雄蜂飼養(yǎng)籠的長×寬×高為10cm×8cm×3cm，兩面是隔王柵，工蜂可以自由通過隔王柵飼喂雄蜂，每個籠內(nèi)飼養(yǎng)雄蜂25 只左右，每10 個飼養(yǎng)籠裝在一個特制的巢框內(nèi)，放在12 框以上的蜂群中飼養(yǎng)，這樣飼養(yǎng)雄蜂群內(nèi)要有充足的蜜粉飼料和大量青幼齡飼喂蜂，確保雄蜂的正常發(fā)育。

2.強迫排精

左手在雄蜂飛翔籠中捉取飛翔有力、腹部堅實的雄蜂，拇指、食指、中指輕輕的對其胸部向后施加壓力，并使尾部朝上，性成熟的雄蜂此時腹部收縮變得更加堅硬；右手的拇指或食指按在雄蜂腹部背面1～3 節(jié)，與左手的拇指、食指同時向腹部尾端施加壓力，使腹腔的血淋巴擠壓內(nèi)陽莖，迫使陽莖漸次外翻，首先翻出的是陽莖基板，然后是一對角囊和羽狀突，最后是陽莖球，射精管開口于陽莖球，當陽莖球末端冒出淡黃褐色精液時，停止擠壓。加壓時用力要穩(wěn)，勿操之過急，如果用力太大，容易導致精液飛濺或陽莖球破裂，使精液混入體液。在雄蜂陽莖外翻過程中，切勿使外翻的陽莖球及精液接觸到雄蜂體表面及操作者的手指，以免造成污染（圖4～6）。

圖4 性成熟雄蜂陽莖外翻，示精液

圖5 雄蜂陽莖外翻，無精液

圖6 雄蜂陽莖外翻，示精液污染

3.雄蜂精液采集

采集精液前，先將已滅菌的注射器安裝好，然后用精子生理液沖洗注射器及采精針頭3 次，最后注射器及授精針頭內(nèi)注滿加有抗菌素的生理液。把注射器固定到授精儀上，針尖移到體視顯微鏡的視野內(nèi)，調整顯微鏡焦距至針尖清晰，接著進行采集精液。采集精液時，授精針頭先吸入一小段空氣，約1.0～1.5μl 的空間，使生理液與精液有氣泡相隔，以免精液混入大量生理液。吸入的空氣量不能太大，如果吸入空氣量較大，在采集精液或以后授精過程中受到阻力時，空氣會膨脹和壓縮變型，給采集精液或授精帶來不便（圖7）。

圖7 針頭內(nèi)采集的精液和氣泡

采集精液時，針尖要貼緊精液的表面，以免吸入空氣。但是針尖又不能深入精液深層，由于每只雄蜂只有1.5～1.7μl 的精液附在粘液表面，實際上只能采集1.0μl 左右，很容易吸入粘液。因此，在采集下一只雄蜂精液時，將采集的前一只雄蜂精液推出針尖外一部分，使其與準備采集的精液面相接觸后再吸入，這樣既可以防止采精時吸入空氣，又可以減少吸入粘液的機會。一旦發(fā)現(xiàn)吸入粘液時要盡快排出，哪怕是稀粘液也不可以混進精液吸入授精針頭。因為粘液不僅會堵塞授精針頭，如果注射到蜂王側輸卵管后會凝固而堵塞輸卵管，這樣不僅影響精子進入受精囊，而且會造成蜂王死亡。采集精液結束時，授精針頭內(nèi)仍然要吸入一段空氣，然后用生理液封口，以免授精針頭因精液凝固而堵塞（圖8）。

圖8 雄蜂精液采集

4.精子活力的檢測

采精當時授精，污染機會少，精子在體外滯留時間短，活力較強，一般不需要檢查精子活力情況。如果利用貯存的精液進行授精時，在授精前有必要對精子活力進行檢查。檢查方法是：置于27℃～30℃的室溫下，取精液1μl 置于凹玻片上，用稀釋液進行20 倍以上的稀釋，放上蓋玻片。將顯微鏡調至400 倍觀察，在視野中精子呈圓周運動或原地擺動，說明活力較強，可以利用此精液進行授精。如果精子運動較慢，活率在60%以下，應放棄使用該精液進行授精。