薛運波│文

1.設備器材

必需有的設備器材包括蜂王人工授精儀、電子天平、體視顯微鏡、生物顯微鏡、蒸餾水器、血球計數(shù)板、酸度計、離心機、紫外線滅菌燈、高壓滅菌鍋、CO2鋼瓶、氣體洗瓶、常用玻璃器皿、注射器、醫(yī)用方盤、手術(shù)剪刀、鑷子、雄蜂飛翔籠、混精設備等。

圖1 授精儀和體式顯微鏡

2.人工授精儀附件

蜜蜂人工授精需要制備的器材有背鉤、腹鉤、探針、微量進樣器、授精針頭、誘入管、麻醉管、通氣活塞、CO2鋼瓶、氣體洗瓶、雄蜂飛翔籠等。

（1）背鉤、腹鉤和探針：背鉤、腹鉤、探針是打開蜂王背腹板及陰道的附件，均是用直徑1～2mm不銹鋼絲手工制作而成，首先把不銹鋼絲用什錦銼加工成毛坯，然后用油石磨去銼痕，再用天然油石進行加工，直至加工到合適的尺寸為止，最后用直尖鑷子及鉗子加工成需要的形狀。

（2）精液注射器：有麥肯森設計膜片式、微調(diào)螺旋式、水壓式和柱塞式微量進樣器。目前國外使用較多的是麥肯森注射器，國內(nèi)使用較多的是l00μl微量進樣器。

（3）授精針頭：一般情況下，采集雄蜂精液和給蜂王人工授精均使用同一型號的授精針頭，習慣上人們均稱之為授精針頭。授精針頭有麥肯森式有機玻璃針頭、不銹鋼針頭、玻璃針頭、聚乙烯針頭，無論何種材料的授精針頭其針尖尖端外徑不大于0.3mm，內(nèi)徑不小于0.17mm。

麥肯森式授精針頭是用有機玻璃材料經(jīng)機器加工而成，其優(yōu)點是透明，能夠看到采集精液情況；針尖圓錐形，授精時不易使精液外溢，授精成功率較高，缺點是授精針頭容納精液量較少，安裝、拆卸、清洗比較麻煩，成本較高。

不銹鋼授精針頭是選擇外徑0.27mm、內(nèi)徑0.20mm 的4 號頭皮針為材料手工制作而成。加工方法是將4 號頭皮針用什錦挫從中部截斷，然后在天然油石上把針尖磨成半球狀，在磨制授精針頭之前在針頭管芯內(nèi)插入一根鐵絲，以防在磨制過程中堵塞針芯。磨制好的授精針頭后部用膠管與微量進樣器相接，再用玻璃管或不銹鋼絲加固使授精針頭與微量進樣器的中心線在同一條直線上。不銹鋼授精針頭的優(yōu)點是堅固耐用，針頭上能夠加工上進針刻度，便于掌握進針深度，該授精針頭易于加工，針尖容易磨制成半球狀，不易損傷蜂王。缺點是不透明，采精時容易吸入氣泡，安裝到注射器上需要再次加固。

玻璃授精針頭是以外徑8～10mm 的玻璃管為材料手工拉制而成的。首先將玻璃管在酒精燈上加熱拉制成所需的針頭狀，然后將針頭的后端在酒精燈上封閉，封閉的后端繼續(xù)加熱，直至加熱到在玻璃管的另一端吹氣時能將其吹成氣泡，并使氣泡破裂呈毛邊的喇叭狀，用什錦挫將毛邊除掉，再加熱到喇叭口圓滑為止。授精針頭后端的喇叭口制成后，在酒精燈上加熱拉制針尖部分，使針尖尖端外徑不大于0.27mm，內(nèi)徑不小于0.17mm。玻璃針頭的優(yōu)點是透明，采精時能夠及時發(fā)現(xiàn)吸入的氣泡或粘液，可根據(jù)需要拉制成不同規(guī)格的針頭。缺點是容易破碎，初學者不易拉制成功。

聚乙烯授精針頭是以外徑2mm 的聚乙烯管為材料手工拉制而成的。首先在酒精燈上將聚乙烯管拉制成針頭狀，然后在粗端把多余部分切割掉，再將粗端加熱至圓滑的喇叭狀。后端喇叭口制成后再拉制針尖部分，使針尖的尖端達到所需的標準。

（4）二氧化碳麻醉系統(tǒng)：由CO2鋼瓶、膠管、氣體洗瓶、蜂王固定器構(gòu)成。麻醉蜂王使用的是CO2氣體，實驗室一般使用是飲料廠常用CO2鋼瓶，體積較大，貯存CO2較多，可以安裝氣壓表及減壓閥控制流量。蜂場使用鋼瓶受其流動放蜂條件制約，一般選擇體積較小為宜。消防器材修配廠有內(nèi)裝200g CO2氣體鋼瓶，可以隨身攜帶。另外內(nèi)裝5kg CO2鋼瓶，也比較適用于轉(zhuǎn)地蜂場。CO2氣體在蜜蜂人工授精方面有兩種作用，一是麻醉蜂王，短時間內(nèi)使蜂王處于靜止狀態(tài)；二是通過CO2麻醉的蜂王，能夠降低發(fā)情反應，促進授精蜂王早日產(chǎn)卵，沒有毒副作用。氣體洗瓶是清洗CO2中雜質(zhì)及其他有害離子之用。

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蜂王固定器由誘入管、通氣活塞、麻醉管和固定底座構(gòu)成。麻醉蜂王時先讓蜂王爬入誘入管，然后將麻醉管與誘入管對接，待蜂王退入麻醉管后，立即將通氣活塞推入麻醉管。當通氣活塞接近蜂王頭部時，需小心慢慢推進，以免損傷蜂王的觸角和頭部其他器官，一直推至蜂王腹部露出3～4 節(jié)為止。通氣活塞的后端用膠管與氣體洗瓶、鋼瓶相通。

（5）雄蜂飛翔籠：用來從蜂場捕捉雄蜂在籠內(nèi)進行飛翔排泄及采集精液時使用的木制鐵紗籠。用木方做成長×寬×高為330mm×280mm×250mm 的框架，兩側(cè)及后壁釘上鐵紗，上蓋安裝隔王柵，前壁釘上纖維板，纖維板上開個直徑100mm的圓洞，供捉取雄蜂用，圓洞處用布簾遮嚴，防止雄蜂從圓洞飛出籠外（圖2）。

圖2 雄蜂飛翔籠和鐵紗籠

3.人工授精藥品及試劑

（1）常用藥品及試劑：0.9%氯化鈉溶液、來蘇兒、75%酒精、滅菌蒸餾水、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、果糖、葡萄糖、水合檸檬酸三鈉、磺胺、碳酸氫鈉等。

（2）精子生理液配方：蜜蜂精子生理液的配方有多種，常用的幾種保護液配方如下：

A 碳酸氫鈉0.21g，氯化鉀0.04g，水合檸檬酸三鈉2.43g，磺胺0.3g，D-葡萄糖0.3g，蒸餾水定容至1000ml。加熱滅菌時，溫度不超過90℃。

C 氯化鈉1.6g，氯化鉀0.2g，葡萄糖0.6g，用蒸餾水定容至200ml，pH 調(diào)至7.5，裝瓶后高壓滅菌15 分鐘。

4.實驗室及器械的消毒滅菌

實驗室內(nèi)要求潔凈無菌。采精和授精前后地面要求用5%的煤酚皂溶液（來蘇兒）噴灑消毒，操作臺面用75%的酒精擦拭，空間用紫外線燈照射滅菌15 分鐘，金屬及耐高溫的器械和附件用消毒鍋煮沸滅菌15～20 分鐘，不耐高溫的器械用75%酒精擦拭或灌洗滅菌。塑料注射器及授精針頭等用酒精消毒滅菌后，再用無菌蒸餾水加壓沖洗4～5 次

授精儀、體視顯微鏡、生物顯微鏡、光源、CO2鋼瓶等一切器具應事先安裝調(diào)試好。所有與授精操作接觸的器具，經(jīng)消毒后均應放入無菌醫(yī)用托盤內(nèi)，加蓋備用。用作消毒的酒精和消毒劑等，不得和雄蜂、蜂王及精液直接接觸。