潘 婧， 梁 蕓， 梁翠娟， 趙東蘭， 馮 蘇， 萬玲玲， 宋國威， 李立新

（石家莊市人民醫(yī)院檢驗科，河北 石家莊 050000）

新型冠狀病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）是由嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）感染引起的新發(fā)傳染病。《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》將血清SARS-CoV-2特異性IgM和IgG抗體陽性作為確診依據(jù)之一[1]。目前，已有多種方法的商品化SARS-CoV-2抗體檢測試劑。本研究擬采用膠體金法和化學(xué)發(fā)光法對發(fā)熱患者血清SARS-CoV-2抗體進(jìn)行檢測，并對2種方法檢測不一致的結(jié)果進(jìn)行分析。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2020年2—3月石家莊市人民醫(yī)院住院及隔離觀察病區(qū)168例發(fā)熱患者，其中4例確診為COVID-19。本研究經(jīng)石家莊市人民醫(yī)院倫理審查委員會審核通過（倫理號：2020046），并批準(zhǔn)予以豁免患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 采用無抗凝劑的真空采血管采集所有對象空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，離心分離血清，備用。

1.2.2 化學(xué)發(fā)光法檢測SARS-CoV-2抗體 采用MAGLUMI 4000 Plus全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（深圳新產(chǎn)業(yè)公司）及配套SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）進(jìn)行檢測，IgM抗體采用捕獲法{以抗人IgM單克隆抗體包被磁性微球，N-（4-氨丁基）-N-乙基異魯米諾[N-（4-Aminobutyl）-N-ethyl isoluminol，ABEI]標(biāo)記 SARS-CoV-2重組抗原}，IgG抗體采用間接法（SARS-CoV-2重組抗原包被磁性微球，ABEI標(biāo)記抗人IgG單克隆抗體），結(jié)果以相對光強(qiáng)度（relative light unit，RLU）表示，樣本中SARS-CoV-2 IgM或IgG抗體的量與RLU呈正相關(guān)，根據(jù)RLU及內(nèi)置校準(zhǔn)曲線自動計算出抗體濃度（AU/mL），以≥1.10 AU/mL為陽性。

1.2.3 膠體金法檢測SARS-CoV-2抗體 膠體金法采用免疫層析技術(shù)，以捕獲法為原理。膠體金法1檢測血清SARS-CoV-2總抗體，試劑盒購自廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司。膠體金法2分別檢測血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體，試劑盒購自英諾特（唐山）生物技術(shù)有限公司。2種方法的結(jié)果均以T線和C線位置出現(xiàn)紫紅色條帶判為陽性。

2 結(jié)果

采用化學(xué)發(fā)光法和2種膠體金法檢測164例發(fā)熱患者的血清SARS-CoV-2抗體，結(jié)果均為陰性。4例COVID-19患者的檢測結(jié)果3種方法之間存在差異，膠體金法1的檢測結(jié)果均為陽性；膠體金法2 IgM抗體均為陰性，2例IgG抗體為陽性；化學(xué)發(fā)光法1例IgM抗體陽性，IgG抗體均為陽性。檢測結(jié)果差異來源于患者A和患者B的原倍血清樣本，見表1。

表1 3種方法檢測結(jié)果不一致的2例COVID-19患者血清SARS-CoV-2抗體的分析

對4例COVID-19患者的原倍血清進(jìn)行稀釋。當(dāng)稀釋倍數(shù)為8倍、16倍時，膠體金法2檢測患者A的結(jié)果為IgM（-）/ IgG（+），患者B的結(jié)果為IgM（+）/ IgG（+），均與膠體金法1和化學(xué)發(fā)光法的檢測結(jié)果一致。見表2。

表2 膠體金法2檢測不同稀釋倍數(shù)血清SARS-CoV-2抗體的比較

3 討論

SARS-CoV-2核酸檢測是COVID-19的主要診斷方法，但其結(jié)果受樣本質(zhì)量、實驗條件及人員操作等因素影響較大，不能滿足篩查診斷要求[2]。為此，《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》[1]中引入了血清SARS-CoV-2抗體檢測。本研究對不同方法學(xué)的SARS-CoV-2抗體檢測試劑的測定結(jié)果進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法和2種膠體金法檢測168例發(fā)熱患者血清SARS-CoV-2抗體的結(jié)果均為陰性，4例COVID-19患者中有2例檢測結(jié)果存在差異。膠體金法1檢測患者A和B的原倍血清SARSCoV-2總抗體，結(jié)果均為陽性；采用膠體金法2檢測血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體，結(jié)果均為陰性。對患者血清進(jìn)行稀釋，當(dāng)稀釋倍數(shù)為8倍、16倍時，膠體金法2的檢測結(jié)果與膠體金法1、化學(xué)發(fā)光法的檢測結(jié)果一致。人體感染SARS-CoV-2后，一般會在5～7 d檢出IgM抗體，10～15 d可檢出IgG抗體，抗體滴度在急性期后期或恢復(fù)期早期（約第3周）達(dá)到峰值，隨后IgM抗體滴度快速下降，而IgG抗體滴度迅速升高[3]。患者A和B在石家莊市人民醫(yī)院采集樣本時，患者A為發(fā)病后第25天，患者B為發(fā)病后第18天，分別處于恢復(fù)期早期和急性期后期，抗體滴度可能會超過試劑檢測的閾值，出現(xiàn)由于抗體滴度過高、抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象，即鉤狀效應(yīng)。當(dāng)血清抗體濃度極高時，無法正常與膠體金標(biāo)記的SARS-CoV-2抗原形成復(fù)合物，不能在包被的鼠抗人IgM/IgG抗體處被捕獲，此時的抗原抗體反應(yīng)會產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)，容易造成臨床誤診。因此，針對不同病程、不同病情患者的臨床樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋，使抗原抗體比例達(dá)到平衡或減少干擾物質(zhì)含量，可避免假陰性或假陽性反應(yīng)。此外，血清中類風(fēng)濕因子及其他非特異IgM抗體的存在也會影響檢測的靈敏度。

由于重組抗原的選擇、制備等方面的差異可能會影響重組抗原的抗原性，因此即使是同一種方法，不同品牌的SARS-CoV-2抗體試劑的檢測結(jié)果也會出現(xiàn)一定的差異。此外，不同方法學(xué)（雙抗原夾心法、間接法、捕獲法等）也會對試劑盒的敏感性、特異性產(chǎn)生影響[4]。有研究結(jié)果顯示，采用化學(xué)發(fā)光法檢測SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體具有較高的敏感性（70.24%、96.20%）和特異性（96.10%、92.41%）[5]。本研究采用化學(xué)發(fā)光法（捕獲法原理和間接法原理）檢測血清SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體，檢測系統(tǒng)自動化程度較高，可自動稀釋高濃度樣本，在一定程度上能減少鉤狀效應(yīng)的發(fā)生。

總之，SARS-CoV-2抗體檢測試劑與其他血清學(xué)檢測試劑一樣，存在一定的假陽性或假陰性可能，會影響COVID-19的診斷和防控。雖然抗體檢測可以有效彌補(bǔ)核酸檢測漏檢的風(fēng)險，但在高度疑似病例中，若抗體檢測結(jié)果為陰性，建議結(jié)合患者發(fā)病時間，進(jìn)行不同稀釋度樣本的檢測。除此之外，各臨床實驗室應(yīng)在試劑啟用前進(jìn)行性能驗證，避免假陰性或假陽性結(jié)果對臨床診斷的誤導(dǎo)。