王靜珠

（鄭州市第七人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

食管鱗癌為臨床常見的一種食管癌類型，其發(fā)病原因可能與遺傳、環(huán)境、飲食等存在一定關(guān)聯(lián)，發(fā)病后患者常伴有吞咽困難、胸骨后疼痛癥狀［1］。目前，手術(shù)是臨床治療食管鱗癌的主要手段，但大部分患者需采用化療輔助治療，以延長生存期。但臨床發(fā)現(xiàn)，大部分腫瘤化療效果仍不理想，尤其是實(shí)體腫瘤，其原因主要為腫瘤內(nèi)存在多種耐藥基因，使化療藥物敏感性降低，降低化療效果。故對化療藥物敏感性的研究逐漸受到臨床關(guān)注。白介素33（IL-33）為近年來臨床新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，屬于促炎癥細(xì)胞因子，能夠與白介素1（IL-1）受體蛋白結(jié)合激活核轉(zhuǎn)錄因子以及促分裂元活化蛋白激酶，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等多種生理過程［2］。相關(guān)研究顯示，IL-33還可能與腫瘤化療藥物的敏感性存在一定關(guān)聯(lián)［3］。鑒于此，本研究旨在分析食管鱗癌細(xì)胞IL-33 表達(dá)與化療藥物敏感性的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017 年3 月至2019 年12 月在鄭州市第七人民醫(yī)院接受手術(shù)治療的食管鱗癌患者80 例作為研究對象，其中男43 例，女37 例；年齡42～64歲，平均（50.12±6.41）歲；TNM 分期：Ⅱ期31例，Ⅲ期25 例，Ⅳ期24 例；化療方案：30 例接受氟尿嘧啶+順鉑（5FU+DDP）治療，26 例接受紫杉醇+順鉑治療，24 例接受多西他賽+5FU 治療。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①無其他惡性腫瘤者；②預(yù)計(jì)生存時(shí)間＞6 個(gè)月；③臨床資料與影像學(xué)資料完整者；④配合度理想者；⑤自愿簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期女性；②凝血功能障礙者；③過敏體質(zhì)者；④合并肝、腎等器官功能衰竭者；⑤伴有精神疾病或智力障礙者。

1.3 方法

檢測化療藥物敏感性：使用湖州海創(chuàng)生物科技有限公司生產(chǎn)的ATP 腫瘤化療敏感性檢測試劑盒檢測食管鱗癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性。主要操作方法：將手術(shù)切除所有患者的新鮮腫瘤組織作為標(biāo)本置入帶有Hanks 液的無菌凍存管內(nèi)，使用滅菌PBS 沖洗標(biāo)本，隨后將標(biāo)本剪成糊狀，使用200 目銅網(wǎng)進(jìn)行研磨過濾，結(jié)束后以300 r/min速度，離心10 min，去除上層清液使用Hanks 液進(jìn)行二次漂洗，采用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。把化療藥物加入96 孔培養(yǎng)板，所用藥物與100%藥物測試濃度（TDC）設(shè)定參照藥物在體內(nèi)的 血 漿 濃 度： 5FU 為 25.0 μg/mL、DDP 為3.8 μg/mL、多 西 他 賽 為3.7 μg/mL、紫 杉 醇 為3.6 μg/mL，聯(lián)合使用藥物治療的各藥物濃度與單藥濃度一樣。各藥物均設(shè)5 個(gè)TDC，分別為200.0%、100.0%、50.0%、25.0%、12.5%，每個(gè)TDC 有2 個(gè)平行孔，同時(shí)設(shè)2 排（8 個(gè)孔）作為對照，其中一排不加藥物作為對照，另一排為空白對照，僅添加200 μL 培養(yǎng)液，無培養(yǎng)細(xì)胞；放在溫度為37oC、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)5 d，加入50 μL熒光素在每個(gè)孔中，并依據(jù)試劑盒說明書測量熒光值。

化療藥物敏感性檢測結(jié)果均依據(jù)測定的熒光值計(jì)算，指標(biāo)為化療敏感指數(shù)（CSI）、IC90、IC50。CSI 為500 減去每個(gè)TDC 的抑制率相加之和，CSI 數(shù)值越小，表示此化療藥物對腫瘤細(xì)胞抑制率越高；IL90：抑制90%腫瘤細(xì)胞生長的TDC；IC50：抑制50%腫瘤細(xì)胞生長的TDC。敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)化療藥物TDC、CSI、IC90、IC50 進(jìn)行判斷，敏感：IC50≤25%TDC，耐藥：IC90＞100%TDC，IC50＞25%TDC，CSI＞300。

以手術(shù)方式獲取所有患者的腫瘤組織，采用石蠟標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，采用Axio Scan.Z1 全自動(dòng)數(shù)字玻片掃描系統(tǒng)對切片進(jìn)行掃描，結(jié)果則以細(xì)胞核內(nèi)棕褐色染色作為IL-33 的陽性表達(dá)。于400 倍顯微鏡視野下，選擇5 個(gè)隨機(jī)區(qū)域在確保每個(gè)視野內(nèi)有＞200 細(xì)胞時(shí)對切片進(jìn)行分析，對切片進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并計(jì)算得分。采用200倍顯微鏡進(jìn)行觀察，對切片進(jìn)行評分。①將染色顏色不顯色記0 分，淡黃色記1 分，棕黃色記2 分；②對陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行計(jì)算，數(shù)量＜5% 記0 分，數(shù)量為5%～25%記1 分；數(shù)量25%～50%記2 分，數(shù)量為50%～75% 記3 分，數(shù)量＞75% 則記4 分。將兩項(xiàng)結(jié)果得分相乘，結(jié)果分?jǐn)?shù)0 或1 的為陰性，分?jǐn)?shù)≥4 分則為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件。全部計(jì)量資料均經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；采用多因素Logistic 回歸分析IL-33 表達(dá)對化療藥物敏感性的影響；繪制受試者工作曲線（ROC），得到曲線下面積（AUC），分析IL-33 表達(dá)在化療藥物敏感性中預(yù)測價(jià)值：AUC＜0.5 無價(jià)值，0.5～0.7診斷價(jià)值較低，0.7～0.9 診斷價(jià)值中等，＞0.9 診斷價(jià)值高。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 敏感性檢測結(jié)果

本研究80 例患者對化療藥物敏感28 例，占比為35.00% （28/80）；耐藥52 例，占比為65.00%（52/80）。

2.2 敏感組與耐藥組IL-33 陽性檢出率比較

敏感組IL-33 陽性檢出率低于耐藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.479,P=0.000）。見表1。

表1 敏感組與耐藥組IL-33 陽性檢出率比較

2.3 食管鱗癌細(xì)胞IL-33 表達(dá)對化療藥物敏感性影響的回歸分析

經(jīng)Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，IL-33 陽性檢出率可能是影響化療藥物敏感性的影響因素。見表2。

表2 食管鱗癌細(xì)胞IL-33 表達(dá)對化療藥物敏感性影響的回歸分析

2.4 食管鱗癌細(xì)胞IL-33 陽性表達(dá)在化療藥物敏感性中的預(yù)測價(jià)值

將化療藥物是否敏感作為狀態(tài)變量（0=敏感，1=耐藥），將IL-33 陽性表達(dá)作為檢驗(yàn)變量，繪制ROC 曲線（見圖1），結(jié)果顯示，IL-33 陽性表達(dá)與化療藥物敏感性為耐藥的AUC 為0.765，具有一定預(yù)測價(jià)值，具體參數(shù)見表3。

圖1 IL-33 陽性表達(dá)的ROC 曲線

表3 食管鱗癌細(xì)胞IL-33 陽性表達(dá)在化療藥物敏感性中的預(yù)測價(jià)值

3 討論

食管鱗癌在臨床中具有較高的發(fā)病率，屬于消化道惡性腫瘤，約占食管癌發(fā)病率的90%。由于該疾病發(fā)病初期多無明顯臨床癥狀，導(dǎo)致大部分患者在確診時(shí)病情已發(fā)展至中晚期，錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)［4-5］。化療是臨床治療食管鱗癌常用輔助手段，可有效延長患者生存期［6］。但采用化療治療的臨床效果與患者對化療藥物的敏感性具有一定關(guān)聯(lián)。

IL-33 作為一種細(xì)胞因子，在正常人體內(nèi)呈低表達(dá)，但當(dāng)機(jī)體在疾病狀態(tài)下會(huì)快速釋放，增加機(jī)體炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重病情［7］。相關(guān)研究指出，IL-33 在惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展中起到重要作用，如胃癌、乳腺癌、肝癌等，且認(rèn)為IL-33 表達(dá)對化療藥物敏感性可能具有一定影響［8］。免疫、細(xì)胞因子以及炎性細(xì)胞等均為適合腫瘤生存的微環(huán)境，而IL-33 屬于其中的細(xì)胞因子，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應(yīng)，故當(dāng)食管鱗癌細(xì)胞中IL-33呈陽性呈高表達(dá)時(shí)，不僅擾亂機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能，且加重機(jī)體炎癥反應(yīng)，為腫瘤生長提供良好的環(huán)境，導(dǎo)致腫瘤對化療藥物產(chǎn)生耐藥性，降低臨床抗腫瘤效果［9-10］。本研究結(jié)果顯示，敏感組IL-33陽性檢出率低于耐藥組，提示食管鱗癌細(xì)胞IL-33在敏感性患者中呈高表達(dá)。進(jìn)一步經(jīng)Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，IL-33 陽性高表達(dá)可能是影響化療藥物敏感性的影響因素。提示IL-33 高表達(dá)可能參與化療藥物敏感性降低過程。且進(jìn)一步經(jīng)ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，IL-33 陽性表達(dá)預(yù)測化療藥物敏感性為耐藥的AUC 為0.765，提示IL-33 陽性表達(dá)在臨床食管癌患者化療敏感性的預(yù)測中具有較高應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，IL-33 在食管鱗癌化療藥物耐藥患者中呈高表達(dá)，可能是誘發(fā)化療藥物敏感性降低的影響因素，臨床可考慮通過檢測IL-33 表達(dá)情況，以評估化療藥物敏感性。