閆曉慶

摘? ? 要：以乙醇為溶劑，采用醇系統(tǒng)提取法對黃花棘豆中的活性物質(zhì)進行提取，得到粗浸膏;以菜蚜為供試蟲，采用內(nèi)吸作用法進行室內(nèi)生物測定。通過黃花棘豆材料粗浸膏提取物對供試蚜蟲的殺蟲結(jié)果表明，黃花棘豆提取物對蚜蟲具有一定的抑制作用。處理后，在濃度為10 mg/mL、48 h時，粗浸膏的殺蟲活性可以達到0.558 mg/mL。

關(guān)鍵詞：黃花棘豆提取物;蚜蟲;活性研究

文章編號： 1005-2690（2021）02-0012-02? ? ? ?中國圖書分類號： S452? ? ? ?文獻標志碼： B

試驗以蚜蟲為試蟲，通過對黃花棘豆進行提取，得到粗浸膏，初步測定粗提取物的殺蟲活性。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗材料

1.1.1? ?供試黃花棘豆的采集及預處理

黃花棘豆（Oxytropis ochrocephala L.）采自甘肅省武威天祝縣。選用生長良好的開花期黃花棘豆全株，洗凈、朝涼處晾干，粉碎并過40目篼（孔徑0.37 mm）后密封，置于0～4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹1]。

1.1.2? ?供試蟲

蚜蟲（ Lipaphis erysimi）由植保站實驗室提供。

1.2? ?黃花棘豆活性成分提取及分離純化方法

1.2.1? ?黃花棘豆粗浸膏的制備及活性測定

1.2.1.1? ? 黃花棘豆粗浸膏的制備

采用醇系統(tǒng)提取法：將剪碎的植物樣品裝入直徑為50 cm的平底燒瓶中，然后加入乙醇至圓底燒瓶的2/3高度，把圓底燒瓶放入水浴鍋中加熱至60 ℃，將加熱揮發(fā)的溶劑進行冷凝回流。24 h后倒出圓底燒瓶中的溶劑，減壓濃縮得到浸膏，每次裝樣重復3～5次，重復上述過程直至樣品被提取完，收集浸膏，置于0～4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹2]。

1.2.1.2? ? 活性測定方法

采用內(nèi)吸作用法對供蟲進行生物活性測定，具體方法如下：

（1）藥劑配制：將供試藥劑分別稀釋為10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL，并做好標記備用。

（2）植物根際周圍土壤處理：取盆栽棘豆幼苗6盆，將配好的藥劑50 mL澆到幼苗根際深2 cm處，然后用土覆蓋，做好標記，以清水處理的植株為對照。

（3）施藥后5 d，每盆植株上接入蚜蟲50頭，每個濃度處理3個重復。在接入蚜蟲時動作一定要輕。接完試蟲后，一般要用玻璃鐘罩或隔蟲網(wǎng)將不同處理的植株進行隔離或封閉，避免不同處理植株上蚜蟲的相互轉(zhuǎn)移和外界蚜蟲遷飛到處理植株上，影響試驗結(jié)果。

（4）處理后24 h、48 h分別檢査蟲口消長情況，在處理后24 h之內(nèi)蚜蟲將會岀現(xiàn)中毒現(xiàn)象，如體壁皺縮、體色變深或由透明變?yōu)椴煌该鳌I吐等，這些現(xiàn)象可以借助于擴大鎊或顯微鏡進行觀察，按下式計算蟲口減退率和校正蟲口減退率，并填寫表格。

蟲口減退率（%）=

×100

校正蟲口減退率（%）=

×100

1.2.2? ?黃花棘豆粗浸膏溶劑萃取及萃取相的生物測定

1.2.2.1? ? 黃花棘豆粗浸膏溶劑萃取

分別用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇為萃取溶劑對粗浸膏進行萃取。將粗浸膏加水溶解，然后倒入500 mL的分液漏斗中，加入一定量的石油醚，塞緊分液漏斗旋塞，放平分液漏斗振蕩數(shù)次（注意邊振蕩邊排氣），豎直靜止20 min后，從上面倒出石油醚部分，減壓濃縮，重復5次，收集石油醚相浸膏。

其他溶劑萃取同石油醚萃取，注意二氯甲烷萃取時，由于二氯甲烷密度大于水的密度，所以二氯甲烷部分從下面放出，得到粗浸膏萃取后的4個萃取相[3]。

1.2.2.2? ? 殺蟲活性測定方法

同1.2.1.2。

1.2.3? ?二氯甲烷相和乙酸乙酯相合并后極性洗脫及不同極性段殺蟲活性測定

1.2.3.1? ? 合并二氯甲烷相和乙酸乙酯相的極性洗脫

由于二氯甲烷相和乙酸乙酯相抑菌活性相近，并且通過薄層析點樣，硫酸或者磷鉬酸顯色，樣點R值很相近，所以二者合并，對合并后的相進行繼續(xù)分離，用石油醚∶丙酮為洗脫體系，可按照60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1極性依次增大的順序進行洗脫，最后得到A（60∶1）、B（30∶1）、C（15∶1）、D（8∶1）、E（3∶1）、F（1∶1）6個極性段。對6個極性段進行殺蟲活性測定，方法同1.2.1.2。對殺蟲活性相同的極性段進行合并，然后采用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠、MC、反相等進行繼續(xù)分離，直至得到純化合物。

1.2.3.2? ? 殺蟲活性測定方法

同1.2.1.2。

1.2.4? ?正丁醇相極性洗脫及不同極性段殺蟲活性測定方法

正丁醇相極性洗脫由于正丁醇相的殺蟲活性很高，所以對正丁醇相也進行繼續(xù)分離，采用二氯甲烷∶甲醇為洗脫體系，按照60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1極性依次增大的順序進行洗脫，最后得到G（60∶1）、H（30∶1）、I（15∶1）、J（8∶1）、K（3∶1）、L（1∶1）6個極性段，對6個極性段進行殺蟲活性測定，方法同1.2.1.2。對殺蟲活性相同且樣點值相近的極性段進行合并，采用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠、MCI、反相等進行繼續(xù)分離，直至得到純化合物。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?黃花棘豆粗浸膏對菜蚜生測結(jié)果

粗浸膏提取物對菜蚜生測結(jié)果表明，粗浸膏提取物處理菜蚜后，死亡率與處理濃度呈明顯的線性關(guān)系，即隨著濃度的增大死亡率顯著增大。處理48 h后，10 mg/mL與2.5 mg/mL、1.25 mg/mL及0.625 mg/mL均存在顯著差異。

2.2? ? 四相提取物對菜蚜的毒力生測結(jié)果

生測結(jié)果表明，四相提取物處理菜蚜后，死亡率與處理濃度呈明顯的線性關(guān)系，即隨著濃度的增大死亡率顯著增大。4種萃取相對菜蚜毒力測定結(jié)果（48 h）顯示，黃花棘豆粗浸膏4個萃取相對蚜蟲的毒力隨著處理濃度的遞減死亡率下降;4種萃取相中，石油醚相LC50 為1.336 mg/mL，最大;二氯甲烷相次之;正丁醇相LC50最小，因4種萃取相中二氯甲烷相與乙酸乙酯相的Rf值相近具有相同的活性成分，應(yīng)將其合并。四相提取物對菜蚜生測結(jié)果顯示24 h后，正丁醇相與乙酸乙酯相死亡率相差不大，顯著高于石油醚相與二氯甲烷相，48 h后，各相間死亡率差異顯著，正丁醇相最大，為53.47%，乙酸乙酯相次之石油醚相最小，為41.20%。結(jié)果顯示，正丁醇相有利于提高提取物對菜蚜的毒力。4種萃取相對菜蚜毒力測定結(jié)果（24 h）顯示，各相回歸方程相關(guān)性均較好，結(jié)果也可靠。4種萃取相中，石油醚相LC50為1.144 mg/mL最大;二氯甲烷相次之;正丁醇相LC50最小，應(yīng)用前景較好[4]。

3? ?小結(jié)與討論

黃花棘豆提取物殺蟲物質(zhì)屬于天然植物活性成分，具有對其不易生耐藥性、藥物殘留少等優(yōu)點。試驗對黃花棘豆提取物抑菌物質(zhì)進行了初步分離。

黃花棘豆材料粗浸膏提取物對供試蚜蟲的殺蟲結(jié)果表明，黃花棘豆提取物對蚜蟲有一定抑制作用。處理后，在濃度為10 mg/mL、48 h時，粗浸膏的殺蟲活性最高位70%，后隨濃度的降低基本呈直線下降的趨勢。

萃取的4個相石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相，隨著濃度從10 mg/mL降到0.625 mg/mL殺蟲率基本呈遞減趨勢。正丁醇相殺蟲活性最高，石油醚相最低，二氯甲烷相和乙酸乙酯相的殺蟲活性基本相同。正丁醇相在濃度為10 mg/mL和5 mg/mL時殺蟲率均大于90%，但當濃度降為2.5 mg/mL時殺蟲率迅速降為68%，后隨濃度降低逐漸下降。二氯甲烷相在最高濃度時殺蟲率為84%，后隨濃度降低一次下降。乙酸乙酯相在濃度大于2.5 mg/mL時殺蟲率均大于70%，由于二氯甲烷相和乙酸乙酯相的活性基本相同，所以對兩相進行合并，對合并后的相石油醚∶丙酮體系的不同極性段進行極性洗脫，分為6個極性段，分別為60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、3∶1、1∶1。之后對不同的極性段在不同的濃度下做殺蟲活性試驗。結(jié)果顯示，整個活性變化隨濃度的降低呈現(xiàn)下降的趨勢，10∶1段和5∶1段活性基本相同，均高于其他3個濃度的活性。在濃度10 mg/mL和5 mg/mL， 60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、1∶1 5個極性段的殺蟲活性基本成直線上升趨勢，在3∶1段活性最高位分別為82%和80%，1∶1極性段又迅速減小。濃度為2.5 mg/mL時，在30∶1極性段活性最高為68%，結(jié)果顯示有很好的殺蟲效果[5]。

在正丁醇相的6個極性段中，殺蟲活性基本呈正態(tài)分布的趨勢，在二氯甲烷正丁醇為15∶1和8∶1時達到最大值。在濃度為10 mg/mL和5 mg/mL時，各個極性段的活性基本相同，但均高于其他濃度的活性。在濃度為10 mg/mL，15∶1和8∶1極性段活性相同均為84%，在5 mg/mL、8∶1極性段時殺蟲活性最高為86%。

參考文獻：

[ 1 ] 張錦.木本植物漂農(nóng)藥的開發(fā)應(yīng)用[J].中國野生植物資源，2003，22（3）：23-25.

[ 2 ] 操海群，岳永德，花日茂，等.植物源農(nóng)藥研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)大學學報，2000，27（1）：40-44.

[ 3 ] 王云峰，石偉勇.中國殺蟲植物資源的開發(fā)利用[J].資源科學，2001，23（2）：62-64.

[ 4 ] 姚安慶，梁德華.樟樹和黃花篙浸提物對萊粉蝶幼蟲的生物活性[J].農(nóng)藥，2004，3（2）：28，39.

[ 5 ] 李云壽，鄒華英，唐紹宗，等.14種菊科植物提取物對來青蟲的殺蟲活性[J].華東昆蟲學報，2000，9（2）：99.