●賀興江 任曉曉 周文才 萬 煒 韋小平※※ 王胤晨

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所 貴州 貴陽 550006；2.貴州省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)研究所 貴州 貴陽 550006；3.貴州省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所 貴州 貴陽 550006）

獼猴桃屬獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬（Actinidia）植物，多年生藤本果樹，果實風味獨特、營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟價值高。鮮果維生素C含量比普通水果高幾倍甚至幾十倍，還含有豐富的維生素B1、B2、E 及多種礦物質和氨基酸，因其具有豐富的營養(yǎng)和極高經(jīng)濟價值而廣受關注，推廣栽培面積日益增大[1-2]。貴長獼猴桃由原貴州省果樹研究所從紫云縣野生獼猴桃中選育，是目前貴州省獼猴桃的主栽品種[3-4]。

獼猴桃為雌雄異株植物，天然授粉坐果率極低，需要進行人工授粉以保證獼猴桃的產(chǎn)量和品質。前人對獼猴桃授粉開展了較多的工作，研究表明，在授粉過程中不同的花粉來源[4-5]、授粉時間[6]、授粉花柱數(shù)[7]對獼猴桃的產(chǎn)量和質量都有影響。研究還發(fā)現(xiàn)，不同來源獼猴桃雄株的花粉[8-10]在數(shù)量、形態(tài)、活力等方面都存在差異，前人在優(yōu)良雄株的選育方面也做了大量工作[11-13]，發(fā)現(xiàn)不同采粉時期和儲存條件[14]以及采集后花藥的處理方法[15]對花粉的質量都有影響。然而，有關獼猴桃整個單花期散粉規(guī)律以及花粉活力變化的研究罕有報道。鑒于此，本研究選擇貴州省獼猴桃主栽品種貴長獼猴桃作為實驗材料，研究其單花期散粉規(guī)律及花粉活力變化，并采集開花當天自然脫落的花粉，對比不同保存條件和時間對花粉活性的影響，以期為合理采集利用、保存花粉提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器生物顯微鏡（重慶奧特SMART）；冰箱（海爾BCD-510WDEM）；漩渦振蕩器（其林貝爾vortex-5）；移液槍（北京大龍）；恒溫干燥箱（恒辛XMA-600）。

1.1.2 試劑六偏磷酸鈉（贊璐桐；分析純）；蔗糖（天旭；分析純）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品采集試驗材料于2019 年采集自貴州省修文縣獼猴桃種植區(qū)。于盛花期選擇3 株雄株，自5 月12 日至15 日，連續(xù)4d 標記當天開放的花朵（30 朵/株），標記時間為每天上午9 時，5 月15 日上午9 至10 時采集被標記的處于不同花齡的花藥，從花齡相同的每朵花上用小剪刀剪取5 只花藥置于2mL 離心管中，其余花藥放入50mL 離心管中。每10 朵花為1 個樣，每株雄株取3 個樣。2mL 離心管裝的花藥用于測定花粉數(shù)量，計算散粉規(guī)律；50mL 離心管裝的花藥用于測定花粉活力。同日上午9 至10 時，隨機選取當日開放的花朵，每株取6 個樣，每個樣20 朵花，花粉收集在50mL 離心管內，用于研究不同保存條件、保存時間對花粉活性的影響。

1.2.2 不同花齡花粉數(shù)量和活力測定試驗材料為不同花齡的雄花花粉，設置5 個處理。-1D：開花前1d（大蕾，有1～3 片花瓣現(xiàn)展開跡象）；0D：開花當天；1D：開花后1d，2D：開花后2d；3D：開花后3d。每個處理重復3 次。分別測定每個處理的花粉數(shù)量和花粉活力。

1.2.3 不同保存條件對花粉活力的影響試驗材料為當天開花的雄花花粉，設置室溫保存和4℃保存兩個處理。 將花粉樣品等分為兩組，一組放置在實驗臺上室溫（溫度：20～24℃；相對濕度：13%～23.3%）保存；另一組放置于冰箱冷藏室（4℃）保存。自采集當天起，每天檢測一次花粉活性，連續(xù)檢測6d。

1.2.4 花粉數(shù)量測定參照王斯妤等[10]、辛董董等[16]方法，將2mL 裝的花藥樣品（每個樣50只花藥），放置于50℃恒溫干燥箱中，干燥4h?；ǚ廴可㈤_后加入一定體積的200g/L 六偏磷酸鈉溶液，在漩渦振蕩器上振蕩混勻成懸浮液，用移液槍吸取5μL 懸浮液滴在細胞計數(shù)板上，用生物顯微鏡（10×40 倍）進行觀測，統(tǒng)計花粉量，公式為：

1.2.5 散粉量與散粉比例計算

計算散粉比例時以開花前1d 的花粉數(shù)量為花粉總量。

1.2.6 花粉活力測定采用離體萌發(fā)法測定花粉萌發(fā)率，以萌發(fā)率代表花粉活力。培養(yǎng)基為15%的蔗糖溶液[17-19]，用膠頭滴管滴1～2 滴培養(yǎng)基置于載玻片中央，用棉簽蘸取一定量的花粉置于培養(yǎng)基正上方，輕輕抖動棉簽使花粉灑落在培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)條件為室溫，以20～24℃為宜。將播種后的載玻片置于墊有雙層濕濾紙的泡沫箱中進行黑暗培養(yǎng)，24h 后鏡檢，花粉管長度超過花粉粒直徑1倍的視為花粉萌發(fā)，計算萌發(fā)率。

萌發(fā)率=視野中萌發(fā)花粉數(shù)／總花粉數(shù)×100%。

1.3 數(shù)據(jù)分析

運用EXCEL 和SPSS17.0 對試驗數(shù)據(jù)進行描述統(tǒng)計、差異顯著性檢驗，對獼猴桃散粉規(guī)律和花粉活力進行分析。

2 結果與分析

2.1 不同花齡花粉數(shù)量比較

經(jīng)試驗測定發(fā)現(xiàn)，貴長獼猴桃花粉量隨開花時間的延長而減少，散粉量在開花前3d 逐日增加。如表1 所示，開花前1d 花粉量為15 222.22粒/花藥，開花后花粉量開始減少，開花1d 后花粉數(shù)量顯著減少（P＜0.01）。散粉量隨開花時間增加，但散粉比例較低，從開花到采集樣品期間散粉比例為5.96%，開花后1d 的散粉比例也僅有13.50%。至開花后的第3 天（花藥開始自然脫落），每個花藥的花粉量高達5 037.04 粒，接近總花粉量的30%。

表1 散粉規(guī)律

2.2 不同花齡花粉活力比較

由圖1 可以看出，獼猴桃開花前1d 與開花當天的花粉活力最高且沒有顯著差異，開花后, 花粉活力隨開花天數(shù)的增加而顯著降低（P＜0.01）。開花后第3 天，花藥開始自然脫落，花粉萌發(fā)率下降到3.75%。

2.3 不同保存時間及保存條件對花粉活力的影響

圖2 顯示，當天采集花粉的萌發(fā)率達到52%以上，離體花粉活力隨保存天數(shù)的增加而降低，但保存在不同條件下的花粉，萌發(fā)率降低的速率有所不同，4℃條件下保存有利于維持花粉活力。室溫保存1d 花粉萌發(fā)率降低為48.60%，與采集當天無顯著性差異，但是保存2d 及以上的花粉萌發(fā)率大幅度降低，保存5d 的萌發(fā)率僅為3.18%。4℃保存1d 的花粉萌發(fā)率為42.67%，較采集當天顯著降低，而保存2d、3d 的花粉萌發(fā)率分別為41.67%、38.14%，與保存1d 的花粉相比，萌發(fā)率有不同程度的降低，但未達到顯著水平，保存5d 的花粉萌發(fā)率為21.76%。

3 討論

試驗結果顯示，貴長獼猴桃每個花藥的花粉量為15 222.22 粒，與齊秀娟等[8]的研究結果相符，但與王斯妤等[10]的研究結果差異較大。開花后開始散粉，但單位時間散粉比例較低，從開花到采集樣品期間散粉比例為5.96%，開花后1d 的散粉比例也僅有13.50%，甚至到開花后的第3 天每個花藥的花粉量仍然高達5 037.04 粒，接近總花粉量的30%。這可能是因為獼猴桃訪花昆蟲少等原因造成的，這可能導致獼猴桃在自然條件下坐果率低的原因之一。花粉活力測定結果顯示，開花前1d 與開花當天的花粉萌發(fā)率接近52.00%，開花后隨時間的延長花粉活力逐漸降低，與陳永安等[14]的研究結果相似，但他們僅觀察了開花后24h 內的變化；開花后第3 天花粉萌發(fā)率急劇降低為3.76%，鏡檢過程中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上生長了菌絲，這可能是導致花粉活力急劇下降的原因。

花粉活力隨保存時間的增長而降低，但不同條件保存的花粉活力變化差異較大，相比室溫，4℃條件更有利于維持花粉活性，結果與陳永安等[14]的研究結果一致。

綜上，建議貴長獼猴桃采集開花當天的花朵分離花粉用于授粉，最好當天采集當天使用。若遇花粉不足時，也可以選擇采集開花后1d 的花朵分離花粉用于授粉，其單花藥花粉量為12 259.26 粒，萌發(fā)率為38.37%，可以滿足授粉需求。如當天花粉未使用完，適宜選擇4℃條件保存，保存時間越短越好，勿使用保存超過3d 的花粉，以免造成不必要的損失。