陳瑾,馮秉福

(青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學院,西寧 812100)

隨著畜牧業(yè)和寵物行業(yè)的發(fā)展，動物疾病臨床發(fā)生率的報道也在逐年上升，然而對有關(guān)犬口腔增生物的診斷、治療方面的基礎性研究仍然較少。犬產(chǎn)生口腔增生物的原因有很多，主要有物理性因素[1]、化學性因素和生物因素。還有一些增生物的產(chǎn)生是由病毒引起的接觸性傳染病，患犬多于數(shù)周乃至數(shù)月內(nèi)自然康復，但由于在口腔粘膜形成的大量增生物，可直接影響動物的采食，而增生物表面的破損，可繼發(fā)細菌感染，導致口腔炎癥、異臭等不良后果[2]。

犬口腔增生物在臨床上時有發(fā)生，它不僅影響寵物的美觀，個別嚴重者則引起進食困難。單純的外科手術(shù)切除很難根治，復發(fā)率很高。犬口腔增生物主要有炎性增生物、口腔粘膜息肉、口腔腫瘤等。其中口腔腫瘤有惡性和良性之分。最常見的犬口腔惡性腫瘤為磷狀上皮細胞瘤、黑色素瘤、纖維肉瘤。黑色素瘤和磷狀上皮細胞瘤是最常見的惡性腫瘤，為犬的兩大多發(fā)口腔腫瘤[3]。

犬口腔增生物通常會導致局部口腔黏膜上皮增厚隆起，隨著病程發(fā)展，會逐漸轉(zhuǎn)變成瘤體狀。在這過程中，病變上皮組織細胞出現(xiàn)一系列形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化。大多數(shù)病例隨著其機體免疫系統(tǒng)的完善，抵抗力的增強，而使增生物退化轉(zhuǎn)歸，少數(shù)出現(xiàn)癌化[4]?？谇辉錾锏脑\斷方法包括觸診、X線、技術(shù)機斷層掃描、磁共振、細針抽吸、切開活檢[5]。

口腔增生物常用的治療方法是手術(shù)切除，放射療法，化學療法，或者聯(lián)合應用。單純的放射療法和化學療法不能對口腔增生物起到根治的作用，通常需要進行手術(shù)切除[6]。

口腔增生物是很普遍的一種犬類疾病，對犬只的健康有很大的潛在危害。隨著對犬口腔增生物研究的深入，人們越來越重視它對犬類的影響[7]。因此，需要對犬口腔增生物的病理變化作更加深入的研究[8]。為提高臨床診斷的準確率，本實驗以病理學的切片實驗為基礎，對犬的口腔增生物的病理形態(tài)學進行觀察，旨在為獸醫(yī)臨床治療提供理論的依據(jù)，提高診斷效果[9]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1材料來源

患有犬口腔增生物的病犬，由湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)院提供。

1.1.2儀器與試劑

乙醇、二甲苯、蘇木素、伊紅染色素、切片石蠟、中性樹膠、福爾馬林、碳酸鋰飽和液等。Motic奧林巴斯顯微攝影系統(tǒng)、石蠟切片機、計算機等。

1.2 方法

1.2.1臨床癥狀觀察

觀察患犬的臨床癥狀，主要觀察患犬其發(fā)育情況、精神狀態(tài)、飲食狀況、排便狀況、體溫，以及可視粘膜的檢查等。

1.2.2增生物的眼觀病理變化觀察

觀察口腔內(nèi)部及增生物的眼觀病理變化，主要觀察增生物的大小、顏色、部位以及其表面破損狀況等。

1.2.3病理組織學觀察

1.2.3.1取病變組織

1.2.3.2固定：將所取病料置10%的福爾馬林固定液中固定 48h，在固定6h后，對組織塊進行修塊。將修好的組織塊放于白色的小包埋盒中，按設定好的程序進行脫水、透明、浸蠟，其具體的程序步驟為水洗→80%酒精1h→90%酒精 1.5h→95%酒精 2h→95%酒精 2h→100%酒精1h→100%酒精1.5h→100%酒精1.5h→二甲苯0.5 h→二甲苯1h→石蠟2h→石蠟2h。

1.2.3.3包埋：將小包埋盒的蓋子去掉，將組織塊從包埋盒中用小鑷子輕輕取出，取出時注意仍將要切的面朝下，平放在已滴滿石蠟的不銹鋼包埋盒的中央位置，這一點非常重要，否則會將要切的面切不完整，放好組織塊后，將白色的小包盒底部鑲嵌在不銹鋼包埋的上方，再在其上滴滿石蠟。隨后將已包埋好的不銹鋼小包埋盒冷卻使其凝固。當組織塊已完全與石蠟凝固結(jié)合在一起時，將不銹鋼包埋盒輕輕從要切的組織塊底部輕輕去掉，將留有組織塊的白色小包埋盒側(cè)面的石蠟輕輕刮去。

1.2.3.4切片：將保留在白色小包埋盒的組織塊固定在石蠟切片機上，先行修片，當修到完整的組織時，將切片的厚度調(diào)到 5-7μm，再行切片，切片時注意用力均勻，進行連續(xù)切片。

1.2.3.5展片、攤片與烘片：將切好的組織薄片用毛筆刷輕輕挑起，同時用小鑷子輕輕將切好的組織薄片的起始部夾起，放入水浴鍋展片，溫度為45～50℃。溫度過高可將切片熔化，過低則切片不宜伸展。切片放入展片槽中時，立即用小鑷子輕輕在其上面將其有皺縮的地方展平，此時將已準備好的載玻片垂直伸入液面下在載玻片的1/3處將薄層切片緩緩澇起，切片可自動貼附于載玻片上，將載玻片放在切片架上，再將其放在攤片架上。最后再將切片架移到烘片箱中烘干(烘片箱中的溫度為76℃)，一般持續(xù)時間為 40min。

1.2.3.6脫蠟、染色與封藏：將放有載玻片的染色架放入二甲苯 Ⅰ 中浸泡10min →二甲苯 Ⅱ 中浸泡10min(以充分脫蠟)→100%酒精5min→100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→80%酒精 5min→蘇木素染液染色5min→水洗(將切片架放入事先準備好的清水中沖洗5min)→1鹽酸酒精分化(這一步驟相當關(guān)鍵，它的主要目的是脫去胞漿的著色，時間過長可使胞核的著色脫去。)放進去后要迅速取出，時間一般掌握在4-6s→自來水緩緩沖洗15～30min→伊紅染液染色1～3min→95%酒精3s→100%酒精3s→100%酒精3s→二甲苯Ⅰ3s→二甲苯 Ⅱ3s。至此HE染色過程全部結(jié)束，將染色架上的載玻片取出，用干凈的紗布將二甲苯液體蘸去，并在上面滴上中性樹膠，將蓋玻片封好，貼上標簽作好標記后放入切片盒中，觀察增生物的病理變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

患犬發(fā)育完全，體格偏瘦，精神沉郁，面容出現(xiàn)輕微畸形；食欲、飲欲旺盛，二便正常；聽診心音，呼吸音和腸音未見異常，體溫正常；天然孔(口、鼻、肛門)黏膜顏色粉紅色?？谇桓杏X過敏，拒絕檢查口腔，呼出的氣體常帶有難聞的惡臭，流涎并吞咽困難。口腔增生物嚴重影響動物的正常采食，采食量減少。觸診增生物質(zhì)地較硬，粉紅色，表面有破損、觸碰容易出血。增生物大小為1.6cm×1.5cm×1.5cm，根部與左下犬齒處的牙齦相連。增生物周圍牙齒狀態(tài)良好。觸診附近淋巴結(jié)(下頜，咽后，頸淺)狀態(tài)未見異常。X-ray檢查，胸部X-ray檢查未發(fā)現(xiàn)異常病灶。頭部的背腹位、右側(cè)位及斜位均可見增生物的軟組織陰影，牙齒及牙槽骨未見異常。

2.2 眼觀病理變化

由圖1和圖2可看出該增生物大小為1.6cm×1.5cm×1.5cm，粉紅色，表面有破損出血，增生物根部與左下犬齒處的牙齦相連，與周圍組織分界明顯，增生物周圍牙齒狀態(tài)良好。

圖1 犬口腔增生物圖2 犬口腔增生物

2.3 病理組織學變化

由增生物病理組織切片顯微圖像3、4、5、6可看出：增生組織侵潤性增長，細胞聚集成團。主要為棘細胞層高度或顯著不規(guī)則增生，中間夾雜結(jié)締組織和血管的增生，可見增生物間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細胞浸潤，主要為淋巴細胞和巨噬細胞。棘細胞向上增生形成明顯的肥厚層，內(nèi)部填充以間質(zhì)以及大量炎性細胞，且接近正常組織處炎性細胞呈團存在。這表明該增生物主要屬于一種假瘤樣增生，常見于慢性感染灶周邊，并且會反復發(fā)生，切除后易復發(fā)，時間長也可能有導致腫瘤的發(fā)生。

圖3 犬口腔增生物顯微圖像(×40)圖4 犬口腔增生物顯微圖像(×100)

圖5 犬口腔增生物顯微圖像(×100)圖6 犬口腔增生物顯微圖像(×400)

3 討論與小結(jié)

該患病犬的口腔增生物顯微圖像中可見到有許多形狀不等、密度很高的顆粒[10]。增生物中可見到嗜堿性顆粒存在，而在正常上皮的相同部位并未見此結(jié)果，說明它是增生組織異常代謝的產(chǎn)物。主要為棘細胞層高度或顯著不規(guī)則增生，中間夾雜結(jié)締組織和血管的增生，可見增生物間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細胞浸潤，主要為淋巴細胞和巨噬細胞。棘細胞向上增生形成明顯的肥厚層，內(nèi)部填充以間質(zhì)以及大量炎性細胞，且接近正常組織處炎性細胞呈團存在。所以該增生物屬于一種假瘤樣增生。

腫瘤是在各種因素的作用下，機體局部組織的細胞的基因發(fā)生改變，導致異常增生而形成的新生物[11]，這種新生物多表現(xiàn)為局部腫塊。腫瘤的發(fā)生非常廣泛，根據(jù)生物學特征及其對機體的危害性不同，一般將其分為良性和惡性兩大類[12]。良性腫瘤對機體的影響一般較小，可對周圍組織器官產(chǎn)生壓迫和阻塞作用。但生長在顱內(nèi)或椎管內(nèi)的良性腫瘤可因壓迫神經(jīng)組織而產(chǎn)生嚴重后果，發(fā)生在內(nèi)分泌腺的良性腫瘤可因引起某種激素分泌過多而產(chǎn)生全身性影響[13]。而惡性腫瘤對機體的影響極大。不論生長在任何部位，如不及時治療可引起嚴重后果。惡性腫瘤除可以產(chǎn)生壓迫和阻塞作用外，還可以破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起出血，并發(fā)感染。犬口腔腫瘤為犬類常見病癥，引起疼痛，造成惡病質(zhì)，引起副腫瘤綜合征等影響[14]。而惡性腫瘤在HE染色時可見到腫瘤細胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)如下異型性：組織結(jié)構(gòu)的異型性，表現(xiàn)為瘤細胞排列紊亂，失去正常的層次和結(jié)構(gòu)；細胞形態(tài)的異型性，表現(xiàn)為瘤細胞及其核的多形性和病理性核分裂象，細胞核體積增大，出現(xiàn)巨核、多核或奇異核，多見不對稱性、多極性等病理性核分裂象[15]。

因為該患犬診斷為口腔增生物并未出現(xiàn)癌化所以沒有發(fā)現(xiàn)核分裂現(xiàn)象，但長時間發(fā)展下去可以轉(zhuǎn)變。在這種情況下，如果患犬免疫能力不足或存在缺陷，不能使增生物正?；貧w，那么這些過度增生的異常結(jié)構(gòu)就很可能成為口腔腫瘤的誘因。

關(guān)于該患犬口腔增生物的治療，為防止增生物的復發(fā)不應采取放射療法和化學療法，應采取手術(shù)切除的方法將其根治。其中手術(shù)治療應首先進行術(shù)前準備，對患犬皮下注射 0.5mL 的硫酸阿托品，以肌肉注射鹿眠靈做常規(guī)麻醉，將其麻醉后徒手打開患犬口腔，以0.01%高錳酸鉀水溶液清洗消毒[16]，然后進行手術(shù)切除。用有齒鑷將增生物夾住，以暴露增生物根部，再用手術(shù)刀從增生物的根部將其切除。手術(shù)用明膠海綿填充止血，止血后應立即用少量高錳酸鉀粉放于創(chuàng)面，氧化處理3min左后，然后用生理鹽水徹底沖洗創(chuàng)面[17]。沖洗時用棉簽擋住，以免倒流入食道發(fā)生燒傷。術(shù)后 12h 給予飲水，未發(fā)現(xiàn)飲水過程中有出血，術(shù)后 24h 給予流質(zhì)食物。為防止感染每天皮下注射氨芐西林鈉一次，連續(xù)注射一周即可。

綜上所述，該增生物屬于一種假瘤樣增生，常見于慢性感染灶周邊，并且會反復發(fā)生，切除后易復發(fā)，時間長也可能有導致腫瘤的發(fā)生。