潘發(fā)明 ，常生華 ，王國(guó)棟 ，郝生燕 ，劉佳 ，張輝元 ，徐銀萍

（1. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所，甘肅蘭州730070；2. 蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，甘肅蘭州730020；3. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所，甘肅蘭州730070；4. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物與啤酒原料研究所，甘肅蘭州730070）

牦牛是以我國(guó)青藏高原為起源地的特有家畜，是世界屋脊上特有的景觀牛種，其也是唯一一種能在青藏高原高寒地區(qū)繁殖的牛亞科動(dòng)物［1］，在藏族人民的衣食住行和燒（牛糞）、耕中起到至關(guān)重要的作用，因此牦牛是藏族人民心目中的“全能家畜”。牦牛乳是藏族人民最為重要的經(jīng)濟(jì)收入支柱［2］，也是我國(guó)寶貴的畜產(chǎn)資源。

近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)食物中脂肪酸的種類(lèi)及組成比例直接影響人類(lèi)某些疾病的發(fā)生發(fā)展，而共軛亞油酸（conju?gated linoleic acid，CLA）作為一種新型功能型脂肪酸，其特殊的功效越來(lái)越受關(guān)注［3］。天然CLA 主要存在于反芻動(dòng)物牛、羊等的脂肪及乳中，其中CLA 的兩種異構(gòu)體cis9，trans11-CLA 與trans10，cis12-CLA 含量較高，并且具有重要的生理功能，如抗癌（結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌等）、疾病預(yù)防（脈粥樣硬化、糖尿病、高血壓等）、保健、機(jī)體調(diào)節(jié)、減脂降重等［4-5］。

研究表明，牛乳中共軛亞油酸含量受到諸多因素影響，如牛品種對(duì)其乳中共軛亞油酸的含量有較大影響，飼喂相同牧草或飼料時(shí)，不同牛品種間乳中CLA 含量有著較大差異，這與其不同的生理差異有著密不可分的關(guān)系，其原因可能和不同品種牛乳中“trans-11”十八碳烯酸、Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性有關(guān)［6-7］；自然放牧的反芻動(dòng)物乳脂中CLA 含量隨季節(jié)的變化有顯著的差異，表現(xiàn)為夏季最高，冬季最低，這可能與牧草中營(yíng)養(yǎng)成分的含量及種類(lèi)有關(guān)［8］；瘤胃內(nèi)環(huán)境、瘤胃pH 值、瘤胃氫化菌類(lèi)型等也是影響牛乳中CLA 含量的重要因素［9-10］；某些離子載體通過(guò)抑制某些脂肪酸氫化菌的生長(zhǎng)，抑制反式油酸的產(chǎn)量，使瘤胃中硬脂酸含量下降，單不飽和脂肪酸含量上升，由此CLA 含量提高；在動(dòng)物采食方面，進(jìn)食量、飼料中脂肪含量種類(lèi)、日糧中纖維素水平及類(lèi)型、飼糧中銅的含量、青綠牧草的比例以及飼喂方式都對(duì)乳中CLA 有一定的影響［11-12］；在分子遺傳和細(xì)胞學(xué)說(shuō)方面，主要研究有關(guān)脂肪酸合成的酶對(duì)反芻動(dòng)物體內(nèi)CLA 生成的影響，如：脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、乙酰輔酶A 羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）、硬脂?；o酶A 脫氫酶（stearyl CoA dehydrogenase，SCD）等，另外在基因的多態(tài)性及相關(guān)基因的表達(dá)量等方面有所研究［13］；單寧酸一直被認(rèn)為是抗?fàn)I養(yǎng)因子，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在飼料中加入一定量的單寧對(duì)反芻動(dòng)物的乳或肉里共軛亞油酸有一定的積極效應(yīng)［14］。

本研究通過(guò)對(duì)不同牧草物候期放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸及乳脂中CLA 組成的測(cè)定，以期發(fā)現(xiàn)牧草生育期對(duì)放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸及乳脂中CLA 組成的影響規(guī)律，并對(duì)應(yīng)測(cè)定不同生育期牧草養(yǎng)分、單寧酸、牧草脂肪酸含量，以及瘤胃pH 值、發(fā)酵參數(shù)、揮發(fā)性脂肪酸（volatile fatty acid，VFA）含量、反式11-油酸（trans-11-oleic acid，TVA）含量，通過(guò)與乳中CLA 含量變化進(jìn)行相關(guān)分析，探索影響放牧甘南牦牛乳中CLA 含量的營(yíng)養(yǎng)因素，以期發(fā)現(xiàn)提高牦牛乳中CLA 含量的方法從而生產(chǎn)更高品質(zhì)的功能性牦牛乳制品，為預(yù)防及治療某些現(xiàn)代常見(jiàn)疾病，提供綠色、有效的食療產(chǎn)品，牦牛乳產(chǎn)品開(kāi)發(fā)以及牦?？莶萜谘a(bǔ)飼提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

本試驗(yàn)以青藏高原高寒草甸作為研究對(duì)象，該草原屬于甘南州合作市（N 33°06′-35°32′，E 100°44′-104°45′）。位于甘南藏族自治州北部，氣候?qū)俑吆疂駶?rùn)類(lèi)型，冷季長(zhǎng)，暖季短，年均氣溫-0.5～3.5 ℃，極端最高氣溫28 ℃，極端最低氣溫-23 ℃。年均降水量545 mm，集中于7-9 月。地表徑流深200～350 mm，年蒸發(fā)量1222 mm。高寒草甸草地植物種類(lèi)豐富，以矮生嵩草（Kobresia humilis）、草地早熟禾（Poa pratensis）、垂穗披堿草（Ely?mus nutans）和珠芽蓼（Polygonum viviparum）為優(yōu)勢(shì)種牧草。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2018 年4 月開(kāi)始從甘南州合作市周邊確定牦牛養(yǎng)殖戶，選擇10 頭體格健康、年齡相近（6～8 歲）、產(chǎn)犢胎次相近（3～4 胎次）、產(chǎn)犢時(shí)間相近（4 月底/5 月初產(chǎn)犢）、自然放牧的產(chǎn)犢甘南牦牛，試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，分別選擇高寒草甸草原3 個(gè)不同的牧草生育時(shí)期，包括牧草返青期（5 月）、盛草期（9 月）、枯黃期（12 月），將所選10 頭帶犢牦牛隨機(jī)編號(hào)后自然放牧，放牧?xí)r間為4-12 月，分別跟蹤采集返青階段（5 月）、盛草階段（9 月）、枯草階段（12 月）3 個(gè)時(shí)期的牦牛乳、瘤胃液，同時(shí)在放牧區(qū)域內(nèi)采集相應(yīng)時(shí)期的天然牧草，分別測(cè)定3個(gè)牧草時(shí)期甘南牦牛乳中CLA 含量，并對(duì)應(yīng)測(cè)定不同時(shí)期牧草中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、多不飽和脂肪酸（polyunsaturat?ed fatty acid，PUFAs）、單寧酸含量、瘤胃液中揮發(fā)性脂肪酸（VFA）、反式11-油酸（TVA）含量及瘤胃液pH，分析物候期對(duì)甘南牦牛乳中共軛亞油酸含量的影響，并進(jìn)行相關(guān)分析探究影響甘南牦牛乳中CLA 含量的因素。

1.3 樣品采集

1.3.1 牧草樣品采集 分別在牧草返青期、盛草期、枯草期3 個(gè)時(shí)期，選取牦牛放牧植被均一的草地，在樣地對(duì)角線選取植被均一的地塊設(shè)置15 個(gè)1 m×1 m 的樣方，調(diào)查記錄每個(gè)樣方內(nèi)植物物種數(shù)目，然后齊地面刈割每個(gè)樣方內(nèi)所有植物種，分別分裝于已標(biāo)號(hào)的信封袋，帶回實(shí)驗(yàn)室并在65 ℃烘箱中烘干至恒重，將烘干至恒重的牧草用立體式粉碎機(jī)（FZ102，上海）粉碎，后過(guò)1 mm 網(wǎng)篩，用于牧草養(yǎng)分及單寧酸含量測(cè)定，3 個(gè)牧草生育時(shí)期牧草樣品分別設(shè)置15 個(gè)重復(fù)。

1.3.2 乳和瘤胃液樣品采集 將母牛與犢牛隔離一夜（防止哺乳），于次日早晨08：00，一并空腹采集牦牛乳和瘤胃液，乳樣使用50 mL 離心管進(jìn)行收集；瘤胃液采集時(shí)將牦牛放倒綁定，使用胃管式瘤胃液采樣器每頭抽取50 mL 瘤胃液，將收集好的牦牛乳及瘤胃液置于準(zhǔn)備好的冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室待測(cè)，3 個(gè)牧草生育時(shí)期分別采集乳和瘤胃液樣品各10 份。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 牧草養(yǎng)分及單寧酸含量測(cè)定 干物質(zhì)（dry matter，DM）含量采用干燥法測(cè)定、粗蛋白（crude protein，CP）含量采用全自動(dòng)凱氏定氮儀（美國(guó)，F(xiàn)oss Kheltec 8400）測(cè)定、粗脂肪（ether extract，EE）含量采用傳統(tǒng)索氏抽提法測(cè)定、粗纖維（crude fibre，CF）含量采用全自動(dòng)纖維分析儀（美國(guó)，ANKOM 2000 Fiber Analyzer）測(cè)定、粗灰分含量采用煅燒法測(cè)定、無(wú)氮浸出物含量=100%-（水分+粗蛋白+粗脂肪+粗纖維+粗灰分）、總鈣含量采用絡(luò)合滴定法測(cè)定、總磷含量采用國(guó)標(biāo)分光光度法測(cè)定，單寧酸含量采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定［14-15］。

1.4.2 牧草、乳和瘤胃中脂肪酸含量測(cè)定 牦牛乳中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量采用全自動(dòng)乳成分分析儀（日本島津，UV-2550）測(cè)定、牦牛乳中CLA 先提取、甲酯化后用氣相色譜分析，采用歸一化法，乙酰氯—甲醇甲酯化法測(cè)定，牧草和瘤胃液中脂肪酸提取、甲酯化參考乳脂分析的方法［16］，采用pH 211 型精密pH 計(jì)測(cè)定瘤胃pH 值，采用氣相色譜儀（日本島津，GC-2010 Plus）測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸（VFA）［17］。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010 進(jìn)行數(shù)據(jù)整理與作圖，采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)3 個(gè)牧草生育期牧草不同營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)指標(biāo)、脂肪酸組成、放牧牦牛乳品質(zhì)指標(biāo)和共軛亞油酸含量進(jìn)行單因素方差分析，采用LSD 法進(jìn)行多重比較（P＜0.05），數(shù)值采用“均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 物候期對(duì)牧草養(yǎng)分及單寧酸含量的影響

由表1 可知，物候期對(duì)牧草干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、無(wú)氮浸出物、總鈣、總磷含量、鈣磷比和單寧酸含量均有顯著影響（P＜0.05）。返青期牧草鈣磷比顯著高于盛草期和枯草期（P＜0.05），枯草期牧草粗灰分含量較返青期降低了30.2%，枯草期牧草鈣磷比較盛草期增加了16.5%。盛草期牧草粗蛋白、粗脂肪和總磷含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05），枯草期牧草粗蛋白、粗脂肪、總鈣、總磷和單寧酸含量較盛草期分別降低了66.5%、66.3%、42.9%、44.4%和60.8%?？莶萜谀敛莞晌镔|(zhì)、粗纖維、無(wú)氮浸出物含量顯著高于返青期和盛草期（P＜0.05），枯草期牧草干物質(zhì)和粗纖維含量較返青期分別增加了3.1%和30.8%，枯草期牧草無(wú)氮浸出物較盛草期增加了11.2%。

表1 物候期對(duì)牧草養(yǎng)分及單寧酸含量的影響Table 1 Effects of phenological period on forage nutritional value and tannic acid（Dry matter basis）

2.2 物候期對(duì)牧草多不飽和脂肪酸含量的影響

由表2 可知，物候期對(duì)牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸均有顯著影響（P＜0.05）。盛草期牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸均顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05）?？莶萜谀敛葜杏仓岷匡@著高于返青期和盛草期（P＜0.05）。與盛草期相比，枯草期牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸和多不飽和脂肪酸分別降低了100%、100%、14.1%、34.7%、49.3%、30.2%和34.5%。與枯草期相比，返青期牧草中硬脂酸含量降低了39.0%。與盛草期相比，返青期牧草中多不飽和脂肪酸/總脂肪酸降低了9.8%。

2.3 物候期對(duì)放牧牦牛乳成分的影響

由表3 可知，牧草物候期對(duì)放牧牦牛乳中乳蛋白、乳脂率、全乳固體、非脂乳固體、乳糖、絡(luò)蛋白、游離脂肪酸、檸檬酸、密度、酸度含量均有顯著影響（P＜0.05），對(duì)乳中尿素和冰點(diǎn)沒(méi)有顯著影響（P＞0.05）。與返青期相比，枯草期放牧牦牛乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖、絡(luò)蛋白、游離脂肪酸和密度分別降低了28.4%、17.3%、24.1%、19.0%、56.4%和0.6%。與盛草期相比，枯草期放牧牦牛乳中乳脂率、全乳固體和酸度分別降低了36.1%、20.4%和23.6%，乳中檸檬酸含量增加了77.3%。

表3 物候期對(duì)放牧牦牛乳成分的影響Table 3 Effects of forage phenological period on composition of grazing yak

2.4 物候期對(duì)放牧牦牛乳中CLA 含量的影響

由表4 可知，牧草物候期對(duì)放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構(gòu)體c9t11、共軛亞油酸異構(gòu)體t10c12 和共軛亞油酸總含量均有顯著影響（P＜0.05）。盛草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構(gòu)體c9t11、共軛亞油酸異構(gòu)體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05）。與盛草期相比，枯草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構(gòu)體c9t11、共軛亞油酸異構(gòu)體t10c12 和共軛亞油酸總含量分別下降了67.6%、64.7%和66.7%，且均在枯草期含量最低。

表4 物候期對(duì)放牧牦牛乳中CLA 含量的影響Table 4 Effects of forage phenological period on conjugated linoleic acid content of grazing yak（mg·mL-1）

2.5 物候期對(duì)放牧牦牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表5 可知，物候期顯著影響了牦牛瘤胃pH 值、乙酸、丙酸、乙酸/丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸和反式11-油酸（P＜0.05）。牧草返青期牦牛瘤胃pH 值、異丁酸和戊酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05），牧草盛草期牦牛瘤胃異丁酸和戊酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05），牧草盛草期牦牛瘤胃乙酸、丙酸、丁酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05），牧草返青期丁酸、戊酸和反式11-油酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05）；牧草枯草期乙酸/丙酸顯著高于返青期和盛草期（P＜0.05），牧草返青期顯著高于盛草期（P＜0.05）。

表5 物候期對(duì)放牧牦牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響Table 5 Effects of forage phenological period on rumen fermentation parameters of grazing yak

2.6 瘤胃液、牧草中脂肪酸與乳脂中共軛亞油酸組成的相關(guān)性分析

由表6 可知，牧草粗蛋白、粗脂肪、無(wú)氮浸出物、單寧酸、總脂肪酸和瘤胃液pH 值與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著正相關(guān)（P＜0.05），牧草粗纖維和粗灰分與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05），牧草中PUFAs和瘤胃TVFA 與放牧牦牛乳中CLA 含量無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。

3 討論

3.1 物候期對(duì)牧草養(yǎng)分和多不飽和脂肪酸含量的影響

牧草粗蛋白、粗纖維、粗灰分、粗脂肪、鈣、磷含量以及鈣磷含量比是影響牧草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的主要因素［18］。本研究表明，物候期對(duì)牧草養(yǎng)分含量有顯著影響，盛草期牧草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高于返青期和枯草期，枯草期牧草無(wú)氮浸出物含量顯著高于返青期和盛草期，粗纖維含量顯著高于返青期與盛草期。趙禹臣等［19］研究發(fā)現(xiàn)，青藏高原暖季牧草營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量遠(yuǎn)高于冷季，其中暖季粗蛋白與粗灰分含量顯著高于冷季，而冷季粗纖維含量顯著高于暖季；趙玉宇等［20］通過(guò)對(duì)青藏高原不同牧草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)測(cè)發(fā)現(xiàn)，粗蛋白與粗纖維呈極顯著負(fù)相關(guān)；趙禹臣等［19］通過(guò)對(duì)西藏那曲地區(qū)牧草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值研究發(fā)現(xiàn)，牧草營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量會(huì)隨季節(jié)變化而變化，夏季牧草營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)品質(zhì)最好，能滿足當(dāng)?shù)胤拍良倚蟮臓I(yíng)養(yǎng)需要，冬春季牧草品質(zhì)最低，粗蛋白等嚴(yán)重缺乏，本研究結(jié)果與此一致。研究表明，牧草中粗蛋白含量高低主要取決于氣候條件，空氣濕度系數(shù)下降，氣候干燥系數(shù)上升時(shí)，牧草中粗蛋白含量會(huì)顯著上升［21］，甘南地區(qū)夏季降水較多、光照足、氣溫較高，而冬季溫度低、日照量不足，這與牧草中粗蛋白含量低有密切關(guān)系。當(dāng)酸性洗滌纖維過(guò)高時(shí)（≥30%），會(huì)影響粗蛋白消化，冬季的粗纖維含量高嚴(yán)重影響了牧草的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及適口性［22］。研究表明，Ca、P 含量及鈣磷比對(duì)家畜等的生長(zhǎng)發(fā)育和代謝具有重要意義［23］，本研究發(fā)現(xiàn)鈣磷含量、粗蛋白等常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)隨牧草生育期的變化有一定的規(guī)律，盛草期牧草品質(zhì)優(yōu)于返青期與枯草期，返青期牧草品質(zhì)又高于枯草期。單寧含量隨季節(jié)變化的研究較少，單寧作為抗?fàn)I養(yǎng)因子，通過(guò)近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，適量的單寧對(duì)反芻動(dòng)物體內(nèi)CLA 的沉積具有積極作用。本研究結(jié)果表明，返青期和盛草期牧草中單寧含量顯著高于枯草期，返青期與盛草期單寧含量無(wú)顯著差異，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致，曹弦［24］對(duì)巴山木竹（Bashania fargesii）中單寧酸含量研究發(fā)現(xiàn)，海拔不同單寧酸含量不同，相同海拔山竹單寧酸含量表現(xiàn)出一定的季節(jié)性，從2 月返春到7、8 月盛夏其含量呈上升趨勢(shì)，且7、8 月最高，2 月最低；Zhang 等［25］對(duì)福建東山縣赤山林場(chǎng)的木麻黃（Cacuanna equisetifdia）單寧含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，夏季幼枝以及成熟小枝中單寧含量顯著高于冬季。

表6 牧草脂肪酸組成及放牧牦牛瘤胃中CLA 含量與乳中CLA 含量的相關(guān)性分析Table 6 Correlation analysis of fatty acid composition in for?age and CLA content in rumen and milk of grazing yaks

牧草中脂肪酸組成及含量受到季節(jié)、地域、天氣及降水多少的影響，其中多不飽和脂肪酸是反芻動(dòng)物合成CLA 最重要的前體物質(zhì)之一，牧草中PUFAs 含量越高，會(huì)促進(jìn)CLA 的合成，提高反芻動(dòng)物體內(nèi)CLA 的沉積，其中亞油酸是反芻動(dòng)物瘤胃合成CLA 的前體物之一。馮德慶等［26］對(duì)28 種牧草中所含脂肪酸分析結(jié)果表明，不同種類(lèi)牧草之間各脂肪酸含量具有一定差異，其中含量最高的為亞麻酸，其次為棕櫚酸和亞油酸，其他脂肪酸種類(lèi)含量較低，說(shuō)明不同地域由于氣候原因，牧草種類(lèi)及牧草的生長(zhǎng)情況具有一定差異，造成牧草中各脂肪酸含量有所不同。本試驗(yàn)結(jié)果為返青期（5 月）PUFAs 占總脂肪酸的55%左右，盛草期（9 月）為61.0%左右。伏映萍等［27］通過(guò)研究寧夏鹽池天然混合牧草脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)，5 月混合牧草中多不飽和脂肪酸占總脂肪酸含量的36%～57%，10 月PUFAs 占總脂肪酸含量的46%～61%。本試驗(yàn)研究結(jié)果與此一致，從牧草返青期到盛草期牧草中多不飽和脂肪酸占總脂肪酸含量呈上升趨勢(shì)。王玉鵬等［28］對(duì)天祝地區(qū)牧草脂肪酸測(cè)定發(fā)現(xiàn)，夏秋兩季PUFAs 普遍高于冬春兩季，且秋季高于夏季，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致，可能是甘肅天祝與甘南均地處青藏高原，具有相似的海拔和氣候環(huán)境，牧草種類(lèi)及生長(zhǎng)周期也較為相似。

3.2 物候期對(duì)放牧牦牛乳成分和乳中CLA 含量的影響

CLA 屬于功能性脂肪酸的一種，其特殊的功效已成為近年來(lái)熱門(mén)的研究對(duì)象［29］。反芻動(dòng)物體內(nèi)的CLA 來(lái)源主要有兩種，一種由瘤胃內(nèi)的亞油酸生物氫化生成，一種由食物中PUFAs 經(jīng)氫化形成中間產(chǎn)物（TVA）轉(zhuǎn)化而成［30］。研究表明［28］，CLA 表現(xiàn)出明顯的季節(jié)差異，有研究發(fā)現(xiàn)夏秋季放牧牦牛乳中CLA 的含量顯著高于冬春季節(jié)，本試驗(yàn)研究結(jié)果基本與此一致（盛草期CLA 含量顯著高于返青期與枯草期，返青期CLA 含量顯著高于枯草期），可能是因?yàn)橄那锸⒉萜谀敛轄I(yíng)養(yǎng)品質(zhì)好，并且牧草在這個(gè)生長(zhǎng)階段各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)最為豐富，牦牛在放牧采食過(guò)程中可以攝取更多營(yíng)養(yǎng)。研究表明［31］，脂肪酸中CLA 含量隨季節(jié)變化的波動(dòng)最大，盛草期最高，冬春枯草期含量最低，研究發(fā)現(xiàn)夏季盛草期時(shí)Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性較高，說(shuō)明盛草期牧草可以提高泌乳母牛乳腺中Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性，本試驗(yàn)研究結(jié)果與此一致。薛秀恒等［32］研究表明，造成牛乳中CLA 含量差異的根本原因在于采食青綠新鮮牧草的量及牧草品質(zhì)，大量研究也表明日糧對(duì)乳中CLA 含量起到本質(zhì)的作用，更進(jìn)一步支持了本研究盛草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構(gòu)體c9t11、共軛亞油酸異構(gòu)體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期的結(jié)論。

3.3 物候期對(duì)放牧牦牛瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸及CLA 含量的影響

已有研究表明［33］，影響瘤胃pH 值的因素很多，如采食日糧組成及日糧采食量都會(huì)影響其數(shù)值。本研究結(jié)果表明，返青期與盛草期牦牛瘤胃液pH 值顯著高于枯草期，這可能與牧草中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的變化以及采食量有關(guān)，其導(dǎo)致瘤胃中總揮發(fā)性脂肪酸的含量發(fā)生變化，從而使瘤胃pH 值發(fā)生改變。放牧牦牛瘤胃液中VFA 隨季節(jié)動(dòng)態(tài)變化的研究較少，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)返青期、盛草期及枯草期3 個(gè)牧草生育時(shí)期泌乳牦牛瘤胃液VFA 含量測(cè)定，結(jié)果表明，盛草期乙酸含量最高且顯著高于返青期和枯黃期；丙酸、丁酸、戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸和反式11-油酸含量具有相同的變化趨勢(shì)，盛草期含量最高，且顯著高于返青期和枯黃期。這可能是由于不同季節(jié)氣候環(huán)境不同導(dǎo)致的牧草中營(yíng)養(yǎng)物含量不同及牦牛采食量不同，使其瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，導(dǎo)致其含量發(fā)生顯著改變。已有研究表明，青綠飼草料發(fā)酵后乙酸含量比例可到70%以上［34］，本研究結(jié)果基本與此一致。張瑩等［35］利用氣相色譜法測(cè)定青藏高原牦牛、犏牛和黃牛在暖季與冷季的VFA 含量，發(fā)現(xiàn)牦牛、犏牛和黃牛瘤胃液中總VFA 含量在暖季與冷季之間均存在顯著差異，乙酸與丙酸比值介于3.9～5.0，均屬于乙酸型發(fā)酵，本研究結(jié)論甘南放牧牦牛瘤胃液中總VFA 含量暖季顯著高于冷季和牧草返青期與盛草期瘤胃發(fā)酵屬于乙酸型發(fā)酵與此一致。TVA 是反芻動(dòng)物乳脂中生物氫化的重要中間產(chǎn)物，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)乳脂中TVA 含量與反芻動(dòng)物體內(nèi)CLA 含量具有顯著相關(guān)性，TVA 在反芻動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)一定作用生成CLA。本研究結(jié)果表明，隨牧草生育時(shí)期的變化，返青期和盛草期牧草中亞油酸含量和TVA 含量均顯著高于枯草期。研究表明，提高飼料中亞油酸的含量會(huì)提高奶牛與肉牛瘤胃液中TVA 含量［36-37］，楊俊花［38］的研究也發(fā)現(xiàn)，大豆油中富含亞油酸，在飼料中加入2.0%的大豆油可以顯著提高瘤胃液中脂肪酸和TVA 含量，本試驗(yàn)結(jié)果與此相符。

3.4 放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸與乳脂中CLA 組成的相關(guān)關(guān)系

單寧一直被認(rèn)為是抗?fàn)I養(yǎng)因子，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在反芻動(dòng)物日糧中添加適量的單寧酸會(huì)提高其體內(nèi)CLA 含量。本研究結(jié)果表明，牧草中單寧含量與牦牛乳中CLA 含量的變化呈一定相關(guān)性，本研究結(jié)論與此一致。Kelly等［39］的研究表明，單寧對(duì)瘤胃脂肪酸氫化菌有較強(qiáng)的抑制作用，綿羊采食富含單寧的冠狀巖黃芪（Hedysarum coronarium）牧草，其肌內(nèi)脂肪中亞麻酸比對(duì)照組提高4 倍，長(zhǎng)鏈脂肪酸中二十二碳五烯酸含量也升高。Valentina等［40］對(duì)羔羊日糧添加45%亞麻籽粉（富含單寧），發(fā)現(xiàn)羔羊肌肉脂肪酸中CLA 與反11-十八碳酸烯比值顯著提高，其肌肉中Δ9-脂肪酸去飽和酶表達(dá)量也有隨之提高的趨勢(shì)。

據(jù)Wahle 等［41］研究報(bào)道，TVA 在反芻動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)Δ9-脂肪酸去飽和酶作用生成CLA，是瘤胃合成CLA 的前體物。本研究結(jié)果表明，隨牧草時(shí)期的變化，牦牛瘤胃液中TVA 與其乳中CLA 含量呈線性相關(guān)，且其具有相似的變化趨勢(shì)，均為盛草期顯著高于返青期與枯草期，返青期又顯著高于枯草期，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致。卜登攀［42］在奶牛的研究中也發(fā)現(xiàn)奶牛瘤胃中TVA 與其乳中CLA 含量呈線性相關(guān)。

據(jù)Valentina 等［40］研究報(bào)道，日糧纖維不足導(dǎo)致瘤胃pH 下降，會(huì)影響CLA 瘤胃前體物TVA 的形成，從而影響乳中CLA 的含量，本研究從牧草返青期到枯黃期，牧草粗纖維水平呈逐漸上升趨勢(shì)，與乳中CLA 的含量變化無(wú)相關(guān)性，可能是因?yàn)榭莶萜谀敛葜写掷w維含量太高，使牧草適口性下降，品質(zhì)降低等導(dǎo)致。本研究結(jié)果表明，枯草期瘤胃液pH 值低于6.0，顯著低于返青期與盛草期，盛草期與返青期無(wú)顯著差異，瘤胃液pH 與乳中CLA 含量具有一定的相關(guān)性，本研究結(jié)果與此一致。Lin 等［43］研究發(fā)現(xiàn)，pH 在5.5～8.5 時(shí)，亞油酸異構(gòu)酶具有轉(zhuǎn)化合成CLA 的活性，瘤胃pH 值降低會(huì)抑制纖維分解菌活性，從而降低PUFAs 的氫化作用，使瘤胃TVA 含量降低，導(dǎo)致乳中 CLA 含量下降。Martin［44］研究表明，當(dāng)瘤胃 pH 值低于 6.0 時(shí)，乳中 CLA 含量顯著降低，當(dāng) pH 升高時(shí)，CLA含量隨之升高。

4 結(jié)論

1）盛草期牧草粗蛋白、粗脂肪、總鈣、總磷、單寧酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸顯著高于返青期和枯草期。

2）盛草期放牧牦牛乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖、絡(luò)蛋白、游離脂肪酸、密度、乳中共軛亞油酸異構(gòu)體c9t11、共軛亞油酸異構(gòu)體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期。

3）盛草期牦牛瘤胃乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸和反式11-油酸含量顯著高于返青期和枯草期。

4）牧草粗蛋白、粗脂肪、無(wú)氮浸出物、單寧酸、總脂肪酸和瘤胃液pH 值與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著正相關(guān)，粗纖維和粗灰分與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著負(fù)相關(guān)，PUFAs 和瘤胃TVFA 與放牧牦牛乳中CLA 含量無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系。