周長文　王芹春

【摘要】 目的：研究咀嚼對PS子代大鼠抑郁樣行為的作用機制。方法：利用束縛應(yīng)激建立產(chǎn)前應(yīng)激大鼠（prenatal stress，PS）模型，首先采用行為學(xué)實驗觀察咀嚼對PS子代大鼠抑郁樣以及焦慮樣行為的影響，最后利用RT-PCR和Western Blot觀察子代大鼠海馬GluA1 mRNA和蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果：雌雄PS子代大鼠的糖水偏好度均低于CON組（P<0.01），強迫游泳的不動時間均高于CON組（P<0.01）;而咀嚼可明顯提高PS子代大鼠的糖水偏好度，縮短不動時間（P<0.01），在高架十字迷宮實驗中，雌雄PS子代大鼠在中央?yún)^(qū)的時間明顯少于CON組，咀嚼可提高PS子代大鼠中央?yún)^(qū)的時間（P<0.05）。通過RT-PCR實驗發(fā)現(xiàn)，PS可抑制雌雄子代大鼠海馬區(qū)GluA1 mRNA的表達(dá)（P<0.05），咀嚼則可逆轉(zhuǎn)PS所致對GluA1 mRNA的抑制作用。結(jié)論：咀嚼可有效逆轉(zhuǎn)PS導(dǎo)致的子代抑郁樣行為，并部分改善焦慮樣行為。抑郁樣行為的發(fā)生與PS抑制海馬區(qū)GluA1的表達(dá)有關(guān)，咀嚼可通過提高GluA1的表達(dá)有效改善PS子代的抑郁樣行為。

【關(guān)鍵詞】 咀嚼 產(chǎn)前應(yīng)激 抑郁樣行為 谷氨酸受體

Mechanism of Chewing to Improve Depression-like Behavior in PS Offspring Rats/ZHOU Changwen， WANG Qinchun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（15）： 00-007

[Abstract] Objective： To study the mechanism of chewing on depression-like behavior in PS offspring rats. Method： The model of prenatal stress （PS） was established by restraint stress. First， the effects of chewing on depression-like and anxiety-like behaviors of PS offspring rats were observed by behavioral experiments. Finally， the expression of GluA1 mRNA and protein in hippocampus of offspring rats were observed by RT-PCR and Western Blot. Result： Both male and female PS offsprings sugar water preference were lower than those of CON group （P<0.01）， and the immobility time of forced swimming was higher than that of CON group （P<0.01）. However， chewing could significantly improve the sugar preference of PS offspring and shorten immobility time （P<0.01）. In the elevated plus maze experiment， male and female PS progeny rats spent significantly less time in the central area than that of CON group， chewing can improve the time of the central area of PS progeny rats （P<0.05）. Through RT-PCR experiments， it was found that PS can inhibit the expression of GluA1 mRNA in the hippocampus of male and female offspring rats （P<0.05）， and chewing can reverse the inhibitory effect of PS on GluA1 mRNA. Conclusion： Chewing can effectively reverse the depression-like behaviors of the offspring caused by PS and partially improve the anxiety-like behaviors. The occurrence of depression-like behavior is related to PS inhibiting the expression of GluA1 in the hippocampus. Chewing can effectively improve the depressive-like behavior of PS offspring by increasing the expression of GluA1.

[Key words] Chewing Prenatal stress Depressive behavior Glutamate receptor

First-authors address： Heze Medical College， Heze 274000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.15.001

越來越多的證據(jù)表明，產(chǎn)前時期是神經(jīng)發(fā)育的關(guān)鍵時期，對大腦的發(fā)育產(chǎn)生長期的影響，從而引起學(xué)習(xí)記憶能力下降和抑郁焦慮等情緒障礙。這嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量和健康水平，尤其目前孕期的不良心理狀態(tài)已經(jīng)成為導(dǎo)致疾病發(fā)生的重要誘因之一。產(chǎn)前應(yīng)激（prenatal stress，PS）是指母體在懷孕期間受到外界某些不良的非特異性應(yīng)激反應(yīng)，可造成子代行為及精神方面如抑郁、焦慮等的異常表現(xiàn)。臨床研究表明孕婦在應(yīng)激影響下，如慢性和普通生活壓力等，可增加其后代有行為和情感問題的發(fā)生率[1]，發(fā)生潛在心理精神疾病的風(fēng)險大大增加[2]。

眾所周知，海馬是Papez情感環(huán)路的重要組成部分之一，同時也是介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)重要的腦區(qū)。海馬通過整合應(yīng)激過程所產(chǎn)生的信息，調(diào)控神經(jīng)內(nèi)分泌及行為作用，從而影響負(fù)性情緒調(diào)節(jié)和學(xué)習(xí)認(rèn)知等[3]。有報道在易復(fù)發(fā)的抑郁癥患者中發(fā)現(xiàn)，其海馬體積小于正常人[4]。但經(jīng)過治療后，比未經(jīng)過治療的患者海馬體積有所增加[5]。還有研究發(fā)現(xiàn)PS可導(dǎo)致海馬DG區(qū)（齒狀回）的神經(jīng)發(fā)生[6]。

這表明海馬的形態(tài)與功能與調(diào)節(jié)情緒緊密相關(guān)。谷氨酸（glutamate，Glu）是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中非常重要的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，其受體廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其其中的α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid receptors（AMPARs）80%聚集在CA1區(qū)的椎體神經(jīng)元[7]。AMPARs是一種離子型谷氨酸受體，主要由GluA1-4四個亞基組成[8]。前期多項研究證實AMPARs誘導(dǎo)海馬突觸可塑性重要基礎(chǔ)的長時程增強（long-term potentiation，LTP）和長時程抑制（long-term depression，LTD）的產(chǎn)生[9-10]。AMPARs調(diào)節(jié)LTP和LTD的作用尤其在生物發(fā)育早期發(fā)揮關(guān)鍵作用[11]。

咀嚼（chewing）是一種有效應(yīng)對應(yīng)激的行為[12]。在人類中，嚼口香糖可緩解壓力并改善工作表現(xiàn)，在嚙齒動物中也發(fā)現(xiàn)，咀嚼可改善約束或應(yīng)激導(dǎo)致的疾病，如胃潰瘍和骨質(zhì)疏松癥，并減輕應(yīng)激誘發(fā)的認(rèn)知和情感障礙[13-14]。還有研究發(fā)現(xiàn)咀嚼可抑制應(yīng)激所增加的血漿皮質(zhì)酮水平，提高空間學(xué)習(xí)能力水平以及海馬DG中的神經(jīng)增殖[15-16]。由此，咀嚼是否可改善產(chǎn)前應(yīng)激所導(dǎo)致的抑郁樣行為，其作用是否與海馬中的GluA1受體相關(guān)，成為本文的研究重點。

1 材料與方法

1.1 動物 本實驗在2019年9月-2020年12月進行，期間所有大鼠均飼養(yǎng)在溫度24 ℃、濕度60%、12 h︰12 h（早8：00到晚20：00）光-暗循環(huán)的動物房中，自由飲水飲食。實驗所有措施均符合動物倫理學(xué)規(guī)范。將雌性大鼠（200～220 g）和雄性大鼠（230～250 g）按照3︰1比例于晚20：30進行合籠，次日上午8：30前對雌性大鼠陰道進行涂片檢查。若精子陽性定為妊娠第0天，然后將受孕大鼠單籠飼養(yǎng)。

1.2 產(chǎn)前應(yīng)激及分組 按照以前研究建立產(chǎn)前應(yīng)激大鼠模型[17-18]。束縛應(yīng)激3次/d進行，即在其孕14～20 d的8：00-11：00、12：00-15：00、16：00-

19：00三個時間段各進行一次，45 min/次，每次應(yīng)激的間隔時間均不少于2 h。進行過程隨機選取部分束縛孕鼠在束縛瓶內(nèi)放入一根長約3 cm，直徑約5 mm木棍，進行咀嚼干預(yù)。在子鼠出生21 d斷奶后，每窩隨機拿出子代大鼠1～2只進行后續(xù)實驗。所有子鼠均單籠正常飼養(yǎng)。根據(jù)孕鼠應(yīng)激以及干預(yù)情況，將其雌雄子代各分為三組：CON組（正常孕鼠子代，n=12，雌雄各6只）、PS組（PS孕鼠子代，n=12，雌雄各6只）、PS+chew組（PS/咀嚼孕鼠子代，n=12，雌雄各6只）。

1.3 行為學(xué)實驗

1.3.1 糖水偏好實驗（sucrose preference test，

SFT） 快感缺失癥狀是抑郁樣行為的核心癥狀。本項目將采用公認(rèn)的SFT來反映大鼠的抑郁樣行為。實驗前所有大鼠同時給予2%（w/v）的蔗糖溶液和飲用水，適應(yīng)24 h。次日在行為學(xué)實驗前禁水3 h，然后稱重兩個相同的飲水瓶，盡量使飲用水水量和蔗糖溶液相近。為防止大鼠對飲水瓶位置產(chǎn)生習(xí)慣性，每天交替放置蔗糖和飲用水。記錄1 h內(nèi)各組大鼠糖水消耗量和飲用水消耗量。按此過程，每只大鼠進行三次糖水偏好測試。用糖水偏好度作為抑郁樣行為的衡量標(biāo)準(zhǔn)。糖水偏好度=蔗糖溶液消耗量/（飲用水消耗量+蔗糖溶液消耗量）×100%。比較各實驗組間的差異。

1.3.2 強迫游泳（forced swim test，F(xiàn)ST） 將受試大鼠放入一個高50 cm，內(nèi)徑30 cm的圓柱形玻璃缸中，該玻璃缸盛有30 cm深的水，水溫（25±1）℃。保持安靜，實驗時通過SMART3攝像系統(tǒng)（RWD，China）觀察5 min內(nèi)大鼠游泳狀態(tài)，記錄累計不動時間。其行為分為四類：（1）游泳（水中隨意游動）;（2）攀爬（前爪劃動水面或碰觸桶壁）;（3）潛水（身體整個潛入水下）;（4）不動（浮于水面或四肢無明顯活動）。大鼠剛開始時往往為努力游泳，試圖逃脫，但在一段時間過后，便為不動狀態(tài)漂浮，表現(xiàn)為絕望狀態(tài)。不動時間越長，抑郁作用便越強。當(dāng)大鼠不再掙扎漂浮于水中姿勢保持不動，或僅有某些輕微動作保持頭部浮在水面上，此種狀態(tài)所處時間視為不動時間（immobility time）。用不動時間作為抑郁樣行為的衡量標(biāo)準(zhǔn)，比較各組間的差異。

1.3.3 高架十字迷宮實驗（elevated plus maze） 高架十字迷宮由兩個開放臂和兩個閉合臂（每臂為

50 cm×10 cm），中間為10 cm×10 cm的中央部，高度約50 cm。實驗開始將大鼠放在中央部，觀察

5 min內(nèi)大鼠停留開放臂和閉合臂的時間，測試指標(biāo)：開臂停留時時間百分比=開臂停留時時間/開臂停留時間+閉臂停留時間+中央部停留時間。

1.4 RT-PCR 出生的各組子鼠，行為學(xué)實驗完成后，用20%烏拉坦（1～2 mL/100 g）腹腔麻醉后，迅速斷頭，并分離出雙側(cè)海馬。按照FAST 200提取RNA試劑盒（Fastagen，上海飛捷生物技術(shù)有限公司）說明書步驟提取海馬總RNA，然后利用超微量紫外分光光度計測量RNA濃度（Bio-Teke，ND5000，北京百泰克生物技術(shù)有限公司）并記錄260/A280比值判別RNA純度。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)按照Rever Tra Ace?qPCR RT Master Mix試劑盒操作步驟進行（Toyobo，日本Toyobo公司）：65 ℃反應(yīng)

5 min，37 ℃ 15 min，50 ℃ 5 min，98 ℃ 5 min。最后使用SYBR? Green realtime PCR Master mix實時定量PCR試劑盒（Toyobo，日本Toyobo公司）上機（Bio-Rad，CFX Connect，美國Bio-Bad公司）觀察RNA實時定量：預(yù)變性95 ℃ 3 min，變性95 ℃ 15 s，退火60 ℃ 30 s，延伸72 ℃30 s，38個循環(huán)。GAPDH（Sangon Biotech，B662204，生工生物工程上海股份有限公司）作為內(nèi)參，GluA1（表1）相對含量以2^-ΔΔCT計算。

1.5 Western Blot 各組子代大鼠海馬組織使用RIPA緩沖液（Solarbio，北京索萊寶公司，在使用前加入1 mmol蛋白酶抑制劑PMSF）從海馬中分離出總蛋白。測定蛋白質(zhì)濃度后，蛋白質(zhì)樣品用10%SDS-PAGE分離，然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜（Millipore，美國Millipore公司）。在室溫下用5%脫脂奶封閉2 h后，Glu A1（1︰3 300，ab31232，Abcam，美國Abcam公司）和β-actin（1︰1 000，Cell signal，美國Cell Signaling Technology公司）并在4 ℃下孵育過夜。洗滌后，加入山羊抗兔二抗（1︰5 000，Proteintech，HRP-60008，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），并在室溫下孵育1 h。然后，將膜用ECL化學(xué)發(fā)光（Millipore，美國Millipore公司）。目標(biāo)蛋白條帶的灰度值由Quantity One軟件掃描。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 10.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示，進行單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 咀嚼對PS子代大鼠抑郁樣行為及焦慮樣行為的影響

2.1.1 咀嚼對PS子代大鼠糖水偏好度的影響 為了解咀嚼在PS子代大鼠抑郁樣行為的作用，首先觀察咀嚼對子代大鼠的飲水總量和糖水偏好度的影響。PS組雄性子代大鼠的糖水偏好度較CON組明顯下降[（40.72±3.72）% vs （69.67±8.73）%，P<0.05]，與PS組相比，而咀嚼可明顯改善PS子代大鼠糖水偏好度的減少[（58.62±3.05）% vs（40.72±3.72）%，P<0.05]，在雌性子代中，發(fā)現(xiàn)了相同的結(jié)果，見圖1A。在飲水總量中，雌雄各組均無明顯差異（圖1B）。

2.1.2 咀嚼對PS子代大鼠不動時間的影響 通過觀察子代大鼠在強迫游泳中的不動時間做進一步驗證，結(jié)果顯示，PS雄性子代大鼠不動時間較CON組明顯增加[（266.01±23.59）s vs （172.5±13.57）s，

P<0.05]，而咀嚼明顯減少PS雄性子代大鼠的不動時間[（181.27±15.61）s vs （266.01±23.59）s，P<0.05]，雌性PS子代大鼠的不動時間表現(xiàn)出與雄性相同的變化。見圖2。

2.1.3 咀嚼對PS子代大鼠焦慮行為的影響 通過高架十字迷宮實驗，觀察咀嚼對PS子代焦慮樣行為的影響，PS組雄性子代大鼠在開放臂停留時間百分比明顯短于CON組[（5.99±1.59）% vs （15.27±2.44）%，P<0.01]，咀嚼則可抑制PS所致時間的減少[（10.18±1.31）% vs （5.99±1.59）%，P<0.01]，見圖3A。然而，PS+chew組與CON相比，到達(dá)開放臂時間百分比減少，存在顯著差異[（10.18±1.31）% vs （15.27±2.44）%，P<0.05]，在雌性子代大鼠中發(fā)現(xiàn)了相同變化的結(jié)果（圖3B）。

2.2 咀嚼對PS子代大鼠海馬GluA1 mRNA表達(dá)的影響 PS組雄性子代大鼠海馬中GluA1 mRNA的相對表達(dá)量較CON組明顯減少[（0.35±0.01） vs 1，P<0.01];與PS組相比，PS+chew組大鼠海馬中的GluA1 mRNA的相對表達(dá)量顯著提高[（0.97±0.20） vs （0.35±0.01），P<0.01]，與CON組相比GluA1 mRNA的相對表達(dá)量無顯著差異（P=0.793）。雌性大鼠影響與雄性大鼠相同。見圖4。

2.3 咀嚼對PS子代大鼠海馬GluA1蛋白表達(dá)的影響 PS組雄性子代大鼠中GluA1蛋白的相對表達(dá)量與CON組相比顯著減少[（0.43±0.07） vs （0.77±0.08），P<0.05]，同樣咀嚼可抑制PS導(dǎo)致大鼠海馬中的GluA1蛋白的減少作用[（0.66±0.09） vs （0.43±0.07），P<0.05]。同樣，雌性大鼠海馬GluA1蛋白的表達(dá)表現(xiàn)出與雄性相同的變化。見圖5。

3 討論

多項研究表明，在懷孕期間，如果母親出現(xiàn)應(yīng)激等不良的情緒變化，導(dǎo)致子代更容易出現(xiàn)情感、行為和認(rèn)知等方面能力的下降[19-21]。Brown等[22]調(diào)查了168例孕婦，其丈夫于孕期身亡，其子女患精神分裂癥、抑郁癥等各種神經(jīng)功能障礙的比例明顯增高。因此PS是導(dǎo)致子代發(fā)生抑郁癥的高危因素之一，具體的發(fā)生機制有待進一步探討。束縛應(yīng)激屬于一種心理應(yīng)激，是廣泛應(yīng)用并得到公認(rèn)的應(yīng)激原之一[23]。因此本項研究首先采用產(chǎn)前束縛應(yīng)激建立PS動物模型，然后檢測PS子代的抑郁樣行為。在SFT中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PS可顯著降低雌雄子代大鼠的糖水偏好度，出現(xiàn)明顯的抑郁樣行為，但各組飲水總量并沒有明顯差異，說明糖水飲用的減少并不是因為總量減少而導(dǎo)致。在強迫游泳中同樣發(fā)現(xiàn)，PS組子代大鼠的不動時間明顯延長，進一步證實PS可導(dǎo)致子代出現(xiàn)抑郁樣行為。這和此前研究結(jié)果相同。咀嚼作為日常應(yīng)對壓力的一種實用行為，在維持身心健康方面具有重要的功能[24-25]。在嚙齒動物中研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激期間的咀嚼可減輕焦慮樣行為以及所引起的認(rèn)知障礙[26-27]。

咀嚼是否也能改善PS所致子代的抑郁樣行為，實驗又觀察咀嚼在SFT和強迫游泳實驗的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)咀嚼可顯著增加PS子代的糖水偏好度，減少不動時間，證實咀嚼也可改善PS子代的抑郁樣行為。有趣的是，在高架十字實驗中發(fā)現(xiàn)，雖然咀嚼可增加PS子代大鼠在中央?yún)^(qū)的時間，但是與對照組相比，還有明顯差異。高架十字迷宮實驗是評估大鼠焦慮樣行為的經(jīng)典實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)咀嚼對PS子代大鼠焦慮樣行為是部分改善。咀嚼改善應(yīng)激所致的抑郁樣行為的機制近來發(fā)現(xiàn)與降低PS所致室旁核血管加壓素的增高，增加海馬區(qū)BDNF的表達(dá)有關(guān)[28-29]。

海馬作為情緒調(diào)節(jié)的重要中樞，一直是研究焦點之一。突觸可塑性是維持海馬正常功能的重要基礎(chǔ)。GluA1是介導(dǎo)突觸可塑性的重要受體[30]。GluA1主要調(diào)節(jié)AMPARs通道的電導(dǎo)，其磷酸化不僅在LTP過程中增強突觸調(diào)節(jié)，而且在LTP發(fā)生后仍影響AMPARs的電導(dǎo)[31]。LTP正常功能的維持也主要依賴于GluA1[32-34]。因此研究又探討咀嚼對抑郁樣行為的改善作用是否與GluA1有關(guān)。通過RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PS子代大鼠海馬中的GluA1 mRNA表達(dá)較對照組明顯降低，初步表明PS導(dǎo)致的抑郁樣行為與子代海馬的GluA1 mRNA表達(dá)減少有關(guān)。而給予咀嚼干預(yù)后，PS子代大鼠海馬的GluA1 mRNA表達(dá)較PS子代明顯升高，證實咀嚼可逆轉(zhuǎn)PS對子代大鼠GluA1的損害作用，從而發(fā)揮改善PS子代抑郁樣行為的作用。在Western Blot實驗中，發(fā)現(xiàn)了相同的結(jié)果。PS導(dǎo)致子代大鼠海馬中GluA1蛋白表達(dá)相對于對照組明顯降低，咀嚼干預(yù)后，可恢復(fù)PS子代大鼠海馬GluA1蛋白的表達(dá)，進一步證實GluA1的變化是PS導(dǎo)致子代大鼠產(chǎn)生抑郁樣行為的重要機制之一。

通過以上研究證實咀嚼可有效逆轉(zhuǎn)PS導(dǎo)致的子代抑郁樣行為，并部分改善焦慮樣行為。抑郁樣行為的發(fā)生與PS抑制海馬區(qū)GluA1的表達(dá)有關(guān)，咀嚼可通過提高GluA1的表達(dá)有效改善PS子代的抑郁樣行為。由于LTP正常功能的維持也主要依賴于GluA1[32-34]，Collingridge等[35]報道，在發(fā)育期間突觸后膜的AMPARs功能抑制，是LTD產(chǎn)生的重要機制之一。多項研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)在出生后2周的大鼠海馬突觸活動的改變極易影響AMPARs的表達(dá)[36-37]。

由此推測咀嚼改善PS子代的抑郁樣行為與提高受損海馬突觸可塑性密切相關(guān)。為何咀嚼對于子代焦慮樣行為只是部分改善，成為下一步研究的主要內(nèi)容。

參考文獻

[1] Murphy S K，F(xiàn)ineberg A M，Maxwell S D，et al.Maternal infection and stress during pregnancy and depressive symptoms in adolescent offspring[J].Psychiatry Res，2017，257：102-110.

[2] Talge N M，Neal C，Glover V.Antenatal maternal stress and long-term effects on child neurodevelopment：how and why？[J].Journal of Child Psychology and Psychiatry，2007，48（3-4）：245-261.

[3] Goosens K A.Hippocampal regulation of aversive memories[J].Curr Opin Neurobiol，2011，21（3）：460-466.

[4] Maller J J，Daskalakis Z J，F(xiàn)itzgerald P B.Hippocampal volumetrics in depression：the importance of the posterior tail[J].Hippocampus，2007，17（11）：1023-1027.

[5] MacQueen G M，Yucel K，Taylor V H，et al.Posterior hippocampal volumes are associated with remission rates in patients with major depressive disorder[J].Biol Psychiatr，2008，64（10）：880-883.

[6] Bustamante C，Bilbao P，Contrerans W，et al.Effects of prenatal stress and exercise on dentate granule cells maturation and spatial memory in adolescent mice[J].Int J Dev Neuroscience，2010，28（7）：605-609.

[7] Lu W，Shi Y，Jackson A C，et al.Subunit composition of synaptic AMPA receptors revealed by a single-cell genetic approach[J].Neuron，2009，62（2）：254-268.

[8] Collingridge G L，Olsen R W，Peters J，et al.A nomenclature for ligand-gated ion channels[J].Neuropharmacol，2009，56（1）：2-5.

[9] Malenka R C，Bear M F.LTP and LTD：an embarrassment of riches[J].Neuron，2004，44（1）：5-21.

[10] Lee H K，Huganir R L.AMPA receptor regulation and the reversal of synaptic plasticity-LTP，LTD，depotentiation and dedepression.In：Sweatt J D，editor.Learning and memory：A comprehensive reference[M].Elsevier Press，2008.

[11] Lee H K.AMPA receptor phosphorylation in synaptic plasticity： Insights from knockin mice.In：Kittler J，Moss S J， editors.The Dynamic Synapse：Molecular methods in ionotropic receptor biology[M].Boca Raton：CRC Press，2006.

[12] Kubo K，Iinuma M，Chen H.Mastication as a stress-coping behavior[J].Bio Med Res Int，2015，2015：876409.

[13] Furuzawa M，Chen H，F(xiàn)ujiwara S，et al.Chewing ameliorates? chronic mild stress-induced bone loss in senescence-accelerated mouse（SAMP8），a murine model of senile osteoporosis[J].Exp Gerontol，2014，55：12-18.

[14] Azuma K，F(xiàn)uruzawa M，F(xiàn)ujiwara S，et al.Effects of Active Mastication on Chronic Stress-Induced Bone Loss in Mice[J].Int J Med Sci，2015，12（12）：952-957.

[15] Miyake S，Yoshikawa G，Yamada K，et al.Chewing ameliorates stress-induced suppression of spatial memory by increasing glucocorticoid receptor expression in the hippocampus[J].Brain Res，2012，1446：34-39.

[16] Kubo K，Sasaguri K，Ono Y，et al.Chewing under restraint stress inhibits the stress-induced suppression of cell birth in the dentate gyrus of aged SAMP8 mice[J].Neurosci Lett，2009，466（3）：109-113.

[17] Sun H，Jia N，Guan L，et al.Involvement of NR1，NR2A different expression in brain regions in anxiety-like behavior of prenatally stressed offspring[J].Behav Brain Res，2013，257：1-7.

[18] Koehl M，Darnaudéry M，Dulluc J，et al.Maccari S.Prenatal stress alters circadian activity of hypothalamo-pituitary-adrenal axis and hippocampalcorticosteroid receptors in adult rats of both gender[J].Journal of Neurobiology，1999，40（3）：302-315.

[19] Van den Bergh B R，Mulder E J，Mennes M，et al.Antenatal maternal anxiety and stress and the neurobehavioural development of the fetus and child：links and possible mechanisms.A review[J].Neurosci Biobehav Rev，2005，29（2）：237-258.

[20] Stalge N M，Neal C，Glover V.Antenatal maternal stress and long-term effects on child neurodevelopment：how and why？[J].

J Child Psychol Psychiatry，2007，48（3-4）：245-261.

[21] Glover V.Annual research review：prenatal stress and the origins of psychopathology：an evolutionary perspective[J].J Child Psychol Psychiatry，2011，52（4）：356-367.

[22] Brown A S，van Os J，Driessens C，et al.Further evidence of relation between prenatal famine and major effective disorder[J].Am J Psychiatry，2000，157（4）：190-195.

[23] Glavin G B，Pare W P，Sandbak T，et al.Restraint stress in biomedical research：an update[J].Neurosci Biobehav Rev，1994，18（2）：223-249.

[24] Nishigawa K，Suzuki Y，Matsuka Y.Masticatory performance alters stress relief effffect of gum chewing[J].J Prosthodont Res，2015，59（4）：262-267.

[25] Smith A P.Chewing gum and stress reduction[J].J Clin Transl Res，2016，2：52-54.

[26] Kubo K Y，Iinuma M，Chen H.Mastication as a Stress-Coping Behavior[J].Bio Med Res Int，2015：876409.

[27] Ono Y，Yamamoto T，Kubo K Y，et al.Occlusion and brain function：Mastication as a prevention of cognitive dysfunction[J].

J Oral Rehabil，2010，37（8）：624-640.

[28] Kubo K Y，Kotachi M，Suzuki A，et al.Chewing during prenatal stress prevents prenatal stress-induced suppression of neurogenesis， anxiety-like behavior and learning deficits in mouse offspring[J].International Journal of Medical Sciences，2018，15（9）：849-858.

[29] Qian Zhou，Ayumi Suzuki，Mitsuo Iinuma，et al.Effects of Maternal Chewing on Prenatal Stress-Induced Cognitive Impairments in the Offspring via Multiple Molecular Pathways[J].Int J Mol Sci，2020，21（16）：5627.

[30] Fadó R，Soto D，Mi?ano-Molina A J，et al.Novel regulation of the synthesis of AMPA receptor subunit GluA1 by carnitine palmitoyltransferase 1C（CPT1C） in the hippocampus[J].Journal of Biological Chemistry，2015，290（42）：25548-25560.

[31] Grimm V E，F(xiàn)rieder B.The effects of mild maternal stress during pregnancy on the behavior of rat pups[J].Int J Neurosci，1987，35（1-2）：65-72.

[32] Van Den Hove D L A，Steinbusch H W M，Scheepens A，et al.Prenatal stress and neonatal rat brain development[J].Neuroscience，2006，137（1）：145-155.

[33] Goffer Y，Xu D，Eberle S E，et al.Calcium-permeable AMPA receptors in the nucleus accumbens regulate depression-like behaviors in the chronic neuropathic pain state[J].J Neurosci，2013，33（48）：19034-19044.

[34] Nabavi S，F(xiàn)ox R，Proulx C D，et al.Engineering a memory with LTD and LTP[J].Nature，2014，511：348-352.

[35] Collingridge G L，Peineau S.Long-term depression in the CNS[J].Nat Rev Neurosci，2010，11（7）：459-473.

[36] Xiao M Y，Wasling P，Hanse E，et al.Creation of AMPA-silent synapses in the neonatal hippocampus[J].Nat Neurosci，2004，7（3）：236-243.

[37] Abrahamsson T，Gustafsson B，Hanse E，et al.AMPA silencing is a prerequisite for developmental long-term potentiation in the hippocampal CA1 region[J].J Neurophysiol，2008，100（5）：2605-2614.

（收稿日期：2021-04-08） （本文編輯：程旭然）