彭敏 魏婷婷

【關(guān)鍵詞】 肺炎支原體肺炎 可溶性B7-H3 乳酸脫氫酶 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1

[Abstract] Objective： To investigate the levels of soluble B7-H3 （sB7-H3）， lactate dehydrogenase （LDH） and transforming growth factor-β1 （TGF-β1） in children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and their correlation with the severity of the disease. Method： A total of 120 children with mycoplasma pneumoniae pneumonia admitted to our hospital from April 2019 to October 2020 were selected as the mycoplasma pneumoniae pneumonia group， and 80 healthy children who underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the healthy control group. The venous blood of all subjects were extracted and the levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 were determined. The expression levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and their correlation with disease severity were analyzed. Result： The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in mycoplasma pneumoniae pneumonia group were higher than those in healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with acute mycoplasma pneumoniae pneumonia were higher than those in the remission stage， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with severe mycoplasma pneumoniae pneumonia were higher than those in children with mild cases， the differences were statistically significant （P<0.05）. Spearman correlation analysis showed that sB7-H3， LDH and TGF-β1 were positively correlated with disease severity （P<0.05）. Conclusion： sB7-H3， LDH and TGF-β1 are all highly expressed in mycoplasma pneumoniae pneumonia， and are positively correlated with the severity of the disease， which are involved in the progression of the disease.

[Key words] Mycoplasma pneumoniae pneumonia Soluble B7-H3 Lactate dehydrogenase Transforming growth factor-β1

First-author’s address： Hunan Maternal and Child Health Hospital， Changsha 410000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.008

肺炎支原體屬于在兒童社區(qū)獲得性肺炎中較為常見的病原菌，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肺炎支原體進(jìn)入患兒機(jī)體內(nèi)，會(huì)吸附在患兒呼吸道上皮細(xì)胞表層，與局部組織形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而誘發(fā)呼吸道病變，影響患兒生長(zhǎng)發(fā)育[1]。肺炎支原體肺炎多發(fā)于兒童，與成年患者相比，此類患者多表現(xiàn)為肺外臟器受累，較易轉(zhuǎn)變?yōu)殡y治性毛細(xì)支氣管肺炎、慢性支氣管肺炎，嚴(yán)重威脅著患兒的身心健康[2]。雖然目前已有研究顯示，肺炎支原體肺炎的發(fā)生是多種因素共同作用的結(jié)果[3]，但關(guān)于此病發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制尚不完全明確，多數(shù)研究認(rèn)為，多種細(xì)胞因子表達(dá)異常與肺炎支原體肺炎的發(fā)生發(fā)展相關(guān)?；谏鲜鲅芯浚疚姆治隽丝扇苄訠7-H3（sB7-H3）、乳酸脫氫酶（LDH）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）在肺炎支原體肺炎患者中的水平，并進(jìn)一步觀察上述因子表達(dá)水平與患者病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性，以明確sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎的關(guān)系，為臨床上此病的診治提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年4月-2020年10月本院收治的肺炎支原體肺炎患兒120例為肺炎支原體肺炎組，同期選取于本院行健康體檢的健康兒童80例為健康對(duì)照組。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：肺炎支原體肺炎組患兒符合第7版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》中對(duì)肺炎支原體肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。急性期診斷標(biāo)準(zhǔn)為患兒病程在10 d內(nèi)，CRP、白細(xì)胞總數(shù)輕度升高，血清MP-IgM抗體陽(yáng)性，影像學(xué)顯示患兒肺門影增大、雙肺紋理粗;恢復(fù)期診斷標(biāo)準(zhǔn)為患兒胸部影像學(xué)檢查異常癥狀消失或者減輕，咳痰、咳嗽、肺部體征消失或者減輕，體溫正常2周以上。輕癥標(biāo)準(zhǔn)為①持續(xù)劇烈咳嗽，X線所見遠(yuǎn)較體征為顯著;②白細(xì)胞數(shù)大多正?；蛏栽龈?，血沉多增快;③血清支原體抗體檢測(cè)陽(yáng)性：肺炎支原體抗體IgM、IgG抗體陽(yáng)性;④支原體半定量檢測(cè)1︰160及以上。重癥符合以下至少一條，①影像學(xué)檢查顯示患兒存在雙側(cè)或者單側(cè)大片狀、高密度實(shí)變影、存在大量積液、甚至出現(xiàn)壞死性肺炎、彌漫性肺炎表現(xiàn);②使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素連續(xù)治療1周后仍存在發(fā)熱、咳嗽、癥狀加重;③出現(xiàn)較為嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、低氧血癥、腎衰竭、消化道出血、心肌炎等癥狀。健康對(duì)照組兒童無(wú)呼吸道急慢性疾病、肺部疾病史，身體健康。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)核等其他肺部疾病;急性感染病史;近兩周使用糖皮質(zhì)激素;心、肝、腎功能不全;先天性疾病;癲癇、腦部疾病?；純杭覍倬?，且簽署了知情同意書，研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 清晨抽取所有患兒空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存待檢。

1.2.2 sB7-H3、LDH、TGF-β1水平檢測(cè) 使用全自動(dòng)生化分析儀（博萬(wàn)達(dá)生物科技有限公司）對(duì)所有研究對(duì)象的LDH水平進(jìn)行檢測(cè)，參考值為80～245 IU/L。采用ELISA法檢測(cè)血清sB7-H3、TGF-β1水平，將上層血清樣本置于室溫后，取出試劑盒，標(biāo)記酶標(biāo)板，制作標(biāo)準(zhǔn)品，以1︰2的稀釋液稀釋樣品;在反應(yīng)孔上依次加入稀釋好的待測(cè)血清及標(biāo)準(zhǔn)品100 μL/孔，放置37 ℃恒溫孵育箱中濕育2 h;用專用洗滌液將反應(yīng)板清洗3次后，加入抗體工作液（1︰100倍稀釋后）100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min;繼續(xù)清洗反應(yīng)板4次后，在反應(yīng)孔內(nèi)加入TMB溶液100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min后將終止液100 μL加入每反應(yīng)孔內(nèi)，在450 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，顏色反應(yīng)深淺與sB7-H3、TGF-β1水平成正比，經(jīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算sB7-H3、TGF-β1水平。

1.3 觀察指標(biāo) 比較健康對(duì)照組與肺炎支原體肺炎組sB7-H3、LDH、TGF-β1水平;比較不同發(fā)病期及不同疾病嚴(yán)重程度肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平。分析sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 肺炎支原體肺炎組男68例，女52例;年齡3～8歲，平均（5.5±2.0）歲;緩解期74例，急性期46例;輕癥95例，重癥25例。健康對(duì)照組男45例，女35例;年齡3～8.5歲，平均（5.8±2.2）歲。兩組性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 健康對(duì)照組與肺炎支原體肺炎組sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 肺炎支原體肺炎組患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 不同發(fā)病期肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 急性期肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于緩解期患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 不同疾病嚴(yán)重程度肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 重癥肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于輕癥患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.5 sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，sB7-H3、LDH、TGF-β1均與患兒疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（P<0.05），見表4。

3 討論

肺炎支原體肺炎屬于比較常見的呼吸內(nèi)科疾病之一，其臨床特征是劇烈咳嗽、發(fā)熱、血沉增快、CRP升高、胸片顯示單側(cè)實(shí)變等，雖然肺炎支原體感染多屬于良性自限性疾病，但若不診治則會(huì)發(fā)展為難治性或者重癥疾病，嚴(yán)重威脅著患兒的生命安全[5-6]。目前對(duì)于肺炎支原體肺炎的發(fā)病機(jī)制還未完全明確，因此探究此病的發(fā)病機(jī)制對(duì)臨床診治具有重要意義。

B7-H3為B7共刺激分子家族的成員之一，具有調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能的作用，一方面可誘導(dǎo)T細(xì)胞在靜息期分泌，另一方面可抑制活化T細(xì)胞的分泌和機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)[7]。隨著對(duì)B7-H3的研究，發(fā)現(xiàn)其存在兩種表達(dá)形式，即膜型（mB7-H3）和可溶性（sB7-H3）兩種，其中mB7-H3表達(dá)形式均在活化的T細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、多種腫瘤細(xì)胞中存在，而sB7-H3主要來(lái)源于活化的T細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞上的mB7-H3，與機(jī)體免疫調(diào)控相關(guān)[8-9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，sB7-H3正性調(diào)節(jié)T細(xì)胞，表現(xiàn)為抑制Th1/Th2細(xì)胞分化，抑制IFN-γ等多種細(xì)胞因子分泌[10]。當(dāng)機(jī)體被肺炎支原體感染后，sB7-H3水平異常升高，經(jīng)治療后其水平明顯降低，與疾病嚴(yán)重程度正相關(guān)[11]。本研究分析了sB7-H3在肺炎支原體肺炎患兒中的表達(dá)，結(jié)果顯示，sB7-H3在肺炎支原體肺炎患兒中呈高表達(dá)，且處于急性期、重癥患兒sB7-H3水平均顯著升高，提示sB7-H3在肺炎支原體肺炎中高表達(dá)，且與患兒疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

氧自由基、炎性因子等會(huì)在肺炎支原體肺炎疾病發(fā)生發(fā)展中刺激患兒，損傷肺細(xì)胞，進(jìn)而誘導(dǎo)一系列的心肌酶產(chǎn)生，最終損傷心肌細(xì)胞，另一方面，心肌細(xì)胞會(huì)受到支原體自身毒素的刺激，進(jìn)而誘導(dǎo)心肌酶的產(chǎn)生[12]。LDH屬于糖酵解酶，能夠促進(jìn)乳酸分泌，心肌細(xì)胞損傷后，LDH釋放至血液中，進(jìn)而增加其濃度[13]。臨床上多應(yīng)用LDH水平高低評(píng)價(jià)疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后情況，研究發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體肺炎的發(fā)生發(fā)展同時(shí)多伴隨著較為劇烈的免疫反應(yīng)，并且機(jī)體多種器官和肺炎支原體間均存在相同的抗原，肺炎支原體感染機(jī)體后，機(jī)體會(huì)形成與之相應(yīng)的自身抗體，進(jìn)而產(chǎn)生免疫復(fù)合物，激發(fā)免疫反應(yīng)，引發(fā)組織損傷，導(dǎo)致LDH濃度升高[14-15]。鄧?yán)杳鞯萚16]研究發(fā)現(xiàn)，重癥支原體肺炎患兒血清LDH水平顯著升高，且經(jīng)治療后其水平降低，其研究結(jié)果提示LDH水平高低與重癥支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，隨著疾病加重，其表達(dá)水平升高。本研究分析了LDH在肺炎支原體肺炎患兒中的表達(dá)，結(jié)果顯示，LDH在肺炎支原體肺炎患兒中高表達(dá)，且處于急性期、重癥患兒LDH水平均顯著升高，提示LDH在肺炎支原體肺炎中高表達(dá)，且與患兒疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

TGF-β1是生物學(xué)功能較多的細(xì)胞因子之一，同時(shí)擁有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能[17]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1在激發(fā)炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、免疫功能調(diào)節(jié)等方面具有重要作用，可刺激間充質(zhì)起源細(xì)胞，抑制上皮或者神經(jīng)外胚層來(lái)源細(xì)胞[18]。局部TGF-β1可聚集并激活白細(xì)胞，從而推動(dòng)炎癥反應(yīng)進(jìn)展，而全身TGF-β1可抑制初始T細(xì)胞分化為Th1/Th2過(guò)程，起到免疫抑制作用，影響機(jī)體免疫功能[19]。目前TGF-β1已經(jīng)被證實(shí)為免疫細(xì)胞因子，一方面可誘導(dǎo)Treg細(xì)胞產(chǎn)生，另一方面可抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能，不僅具有抑制免疫炎癥反應(yīng)的作用，還可與炎癥反應(yīng)相關(guān)[20]。當(dāng)機(jī)體被肺炎支原體感染后，TGF-β1表達(dá)顯著升高，可調(diào)節(jié)過(guò)敏性氣道炎癥和膠原蛋白在氣道的沉積，進(jìn)而導(dǎo)致氣道纖維化，促進(jìn)疾病進(jìn)展[21]。本研究分析了TGF-β1在肺炎支原體肺炎患兒中的表達(dá)，結(jié)果顯示，TGF-β1在肺炎支原體肺炎患兒中高表達(dá)，且處于急性期、重癥患兒TGF-β1水平均顯著升高，提示TGF-β1在肺炎支原體肺炎中高表達(dá)，且與患兒疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

綜上所述，sB7-H3、LDH、TGF-β1在肺炎支原體肺炎中高表達(dá)，且與患兒疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，參與此病的進(jìn)展。

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（收稿日期：2021-05-14） （本文編輯：姬思雨）