楊 軍

植物類中藥的品種相對復(fù)雜，植物類入藥部位多種多樣，包括根、莖、葉、花、果實(shí)，中藥材也有動物藥和礦物藥，但中藥材缺少專屬性強(qiáng)的特征，在鑒別上存在一定難度[1]。中藥材往往需要經(jīng)過加工后才能入藥，炮制和加工過程導(dǎo)致藥材外表特征已經(jīng)發(fā)生改變，通過肉眼很難辨別真?zhèn)?，另外中藥還會制作成多種劑型，中藥材已經(jīng)完全改變外部特征[2]。隨著我國中藥學(xué)事業(yè)的發(fā)展，通過顯微鑒別有利于鑒別植物組織和細(xì)胞之間的不同之處，填補(bǔ)了中藥材鑒別的空白。

1 顯微鑒定概述

顯微鑒定為中藥傳統(tǒng)鑒定方法之一，已經(jīng)被《中華人民共和國藥典》所記載，用于中藥材和成方制劑的鑒定。顯微鑒定技術(shù)是通過光學(xué)系統(tǒng)或電子光學(xué)系統(tǒng)設(shè)備，對肉眼不能分娩的微小形態(tài)結(jié)構(gòu)和特征進(jìn)行鑒別的技術(shù)手段。中藥按照來源可分為動物藥、植物藥、礦物藥，其中植物藥能夠有較多品種用于顯微鑒定[3]。中藥的顯微特性主要包括各種細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)果，細(xì)胞內(nèi)通過顯微鏡能夠觀察到內(nèi)容物包括菊糖、淀粉粒、揮發(fā)油、結(jié)晶、脂肪油等，同時也能夠觀察到組織碎片和非動物組織等[4]。花類藥材的顯微特征為具有花粉粒，根莖類藥材的顯微特征具有毛茸和氣孔，根莖類藥材的顯微特征為具有導(dǎo)管，動物類藥材的顯微特征能觀察到骨碎片和肌肉纖維，種子類藥材顯微特征為種皮柵狀細(xì)胞。藥材經(jīng)過搗碎或磨粉后，藥材本身原有的性狀特征發(fā)生改變，給肉眼鑒別真?zhèn)螏砝щy[5]。將粉末藥材制成丸、散、膏、丹后更難以辨別其真實(shí)性。隨著我國藥學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，對中藥材特別是中藥制劑的鑒別提出了新的要求。顯微鑒別更適用于性狀相似不容易區(qū)分的藥材，主要包括生藥粉末鑒別和顯微組織切片鑒別方法，通過顯微鏡對藥材進(jìn)行觀察[6]。顯微鑒定步驟為切片、表面裝片、解離組織片、粉末制片、觀察、記錄、繪圖，在制片過程中因鑒別不同內(nèi)容選擇不同試劑，觀察較薄、透明的樣品多會使用稀甘油或蒸餾水，觀察較厚不透明的組織多會使用水合氯醛以增加其透明度和透光度[7]。在顯微鑒別觀察時應(yīng)觀察組織碎片、細(xì)胞內(nèi)含物，如需要對其長度或直徑進(jìn)行測量，可選用顯微測微尺以微米為單位測量。

2 顯微鑒別在中藥鑒定中的應(yīng)用

顯微鑒別通過光電子系統(tǒng)對人眼難以觀察的微小細(xì)節(jié)進(jìn)行觀測，對不同中藥加以區(qū)分，在不斷實(shí)踐中將顯微鑒別分為2類：組織結(jié)構(gòu)與粉末鑒定、半顯微性狀鑒別[7]。

2.1 組織結(jié)構(gòu)與粉末鑒定除了使用普通的光學(xué)設(shè)備，還可借助高精尖的設(shè)備，例如激光共聚焦掃描顯微鏡、掃描電鏡聯(lián)用儀、原子力顯微鏡等，通過以上設(shè)備發(fā)揮長處，起到準(zhǔn)確鑒別藥物的效果。激光共聚焦掃描顯微鏡，將激光掃描裝置、計(jì)算機(jī)、熒光顯微鏡相結(jié)合，通過激光或紫外線對檢測對象的內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行細(xì)胞探查，以獲得更為清晰的三維圖像，使觀察人員更為清晰地觀察到內(nèi)部結(jié)果[8]。通過激光共聚焦掃描顯微鏡對小檗堿和苦參堿的動態(tài)進(jìn)行測定，能夠判斷苦參堿通過劑量依賴促進(jìn)鈣內(nèi)流，但不具有促進(jìn)該釋放的作用。小包間細(xì)胞的內(nèi)流鈣濃度變化明顯，通過降低小檗堿濃度來抑制豚鼠心肌細(xì)胞電壓依賴性鈣通道，以刺激細(xì)胞的鈣釋放。掃描電鏡聯(lián)用，為X射線和掃描電鏡聯(lián)用設(shè)備，可通過宏觀到微觀，粗糙到表面的觀察，以解決定位困難問題。原子力顯微鏡在物理原子學(xué)理論基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的分析儀，通過激光源發(fā)出的激光束，經(jīng)懸臂反射發(fā)生位移來鑒別藥物的分子聚集體和內(nèi)部細(xì)胞情況。

2.2 半顯微性狀鑒別通過顯微識別和常規(guī)性狀識別相結(jié)合形成的一種新的鑒別方式，與顯微鑒別比較該種方式操作相對簡單。半顯微性狀鑒別通過肉眼進(jìn)行初步性狀鑒別，對無法確定的部分通過放大鏡、掃描儀、顯微鏡等設(shè)備進(jìn)行細(xì)微外觀觀察，從而達(dá)到鑒別的目的[9]。利用半顯微性狀鑒別不用改變藥材外貌，對藥材本身不造成傷害，特別是對種子類和動物類藥材具有重要價值。

3 常用的顯微鑒定

3.1 中藥材粉末鑒定中藥材在研磨成粉末后失去外部特征，不能通過性狀來完成鑒別，需要借助顯微鏡觀察微觀結(jié)構(gòu)特征，以完成對藥材真?zhèn)芜M(jìn)行鑒別。典型中藥材粉末鑒別為天南星的粉末顯微鑒定，比較粉末顯微特征的區(qū)別以鑒別藥材的真?zhèn)?。也有研究通過對中藥桑白皮、黃柏、厚樸、土荊皮、秦皮、紫荊皮、木棉皮、茯苓、豬苓等皮類中藥材和菌類中藥材中后含物進(jìn)行顯微鑒定以區(qū)別藥材真?zhèn)?。藥材粉末通過顯微鑒定有一定的技巧，例如皂角子在顯微鑒定下能夠觀察到皂角子特有的顯微特征[10]?！吨腥A人民共和國藥典》收載的5種海馬粉末通過顯微鑒別，能夠觀察到特有的顯微特征，例如橫紋肌顯微、皮膚碎片和骨碎片特征等。對羚羊角、穿山甲、珍珠、地龍、海馬等珍稀藥物粉末進(jìn)行顯微特征研究能夠明確附注顯微特征圖。有研究結(jié)果顯示通過對鹿茸茸毛進(jìn)行顯微鑒別分析，可有效區(qū)分鹿茸正品、混用品、代用品，對評價鹿茸質(zhì)量有重要作用。

3.2 中藥材后含物鑒定后含物為植物細(xì)胞在代謝過程中產(chǎn)生的物質(zhì)，其不具有生命活性。后含物的性質(zhì)和形態(tài)通常與植物種類有關(guān)，中藥材后含物也可作為鑒別的重要依據(jù)。后含物多為脂肪、蛋白質(zhì)、糖類、液泡鹽類、有機(jī)化合物等，對中藥粉末通過顯微鑒定檢索信息表中物質(zhì)以鑒別中藥種類。石細(xì)胞多在根被組織和厚生表皮中存在較多，并且具有一定的穩(wěn)定性，可鑒別不同科屬[11]。草酸鈣結(jié)晶、淀粉粒形態(tài)在顯微鑒定中均有重要意義。草酸鈣結(jié)晶體不是所有的植物都具有，在含有該成分的植物中會呈現(xiàn)出不同的大小和形態(tài)，可根據(jù)草酸鈣結(jié)晶體的顯微特征作為鑒別中藥的依據(jù)。

3.3 地方用藥和民族藥物的鑒別地方用藥和民族藥物多為少數(shù)民族地區(qū)用藥，建立在少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥理論，藥物只生長在本民族地區(qū)，有明顯地域性。各民族醫(yī)藥獨(dú)立發(fā)展并保持本民族特色，許多藥物均存在共同點(diǎn)。響鈴草為云南白族特有藥材，根據(jù)其顯微特征制定了顯微鑒定標(biāo)準(zhǔn)，通過顯微構(gòu)造簡圖對地上部分和翼首草根進(jìn)行切面繪制，具體描述了草酸鈣和細(xì)胞顯微特征，可根據(jù)顯微圖譜進(jìn)行鑒別[12]。鴨嘴花屬植物在進(jìn)行顯微鑒別中發(fā)現(xiàn)其橫截面存在維管束，兩端存在多層紋的石細(xì)胞、薄壁細(xì)胞、草酸鈣方晶等結(jié)構(gòu)。小葉黑柴胡、銀州柴胡、錐葉柴胡進(jìn)行了鑒別，其橫截面可見淀粉顆粒，為顯微鑒定提供了依據(jù)。

4 顯微鑒定專屬性特征

多基源藥材鑒別可用顯微鑒定進(jìn)行，《中華人民共和國藥典》中大部分藥材均可通過外部特征和性狀進(jìn)行鑒別，但藥材被粉碎成粉末后很難通過外部特征進(jìn)行區(qū)分，需要借助顯微鏡開展顯微鑒別[13]。不同用藥部位的鑒別也可通過顯微鑒別方法，例如三七為五加科植物，在入藥時使用的部位分別為根和莖，在三七炮制過程中可分為支根、主根、根莖，三者的差別可通過顯微鑒別進(jìn)行判定，以辨別三七粉末的優(yōu)劣。對于具有顯微特征的專屬性藥物可通過顯微鑒別進(jìn)行分析，在顯微視野下種皮表皮細(xì)胞含有半球形、球形的草酸鈣晶體，薄壁細(xì)胞可出現(xiàn)三角形間隙，存在網(wǎng)狀紋理及柄單細(xì)胞[14]。

5 小結(jié)

中藥材是疾病治療和衛(wèi)生保健的重要物質(zhì)，顯微鑒別對中藥鑒別真?zhèn)魏退幬飳傩跃哂兄匾饬x。中藥材質(zhì)量不達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)會直接影響中藥材的臨床使用價值，為了保證中藥臨床使用的安全性，必須對其質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格管控[15]。中藥質(zhì)量主要體現(xiàn)在臨床療效中，中藥質(zhì)量會受到生物基因特征、形態(tài)特征及理化特征影響，結(jié)合以上相關(guān)因素可對中藥品質(zhì)及療效加以判斷。隨著中藥鑒定技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也在逐步提高，利于中藥走向國際化。