姜樹林，寧財，余華陽,鐘志勇

（江西省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，江西南昌330046）

生豬生產(chǎn)過程中采用本交或常溫精液稀釋后配種繁育，在儲存、運(yùn)輸、利用效率、基因質(zhì)量、生物安全等方面存在諸多問題。尤其在傳染病流行期采取封閉防控措施的情況下，在很大程度上限制了優(yōu)秀種公豬的運(yùn)輸和利用，影響了生豬產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。豬冷凍精液有保存時間長、成本低、易于運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn),在生豬生產(chǎn)中起著非常重要的作用。應(yīng)用豬冷凍精液可以杜絕公母豬直接接觸，降低病毒垂直傳染的概率，有利于生物安全防控，解決種豬跨地區(qū)調(diào)運(yùn)及運(yùn)輸難題，實(shí)現(xiàn)跨區(qū)域聯(lián)合育種，打破時間和空間限制，利于集中復(fù)產(chǎn)配種等[1]。同時，豬冷凍精液技術(shù)可高效擴(kuò)繁優(yōu)秀基因，大幅度提升種公豬的遺傳效益，降低公豬飼養(yǎng)數(shù)量，提高養(yǎng)殖場收益。

自2018年開始，筆者通過數(shù)十次冷凍精液制作試驗(yàn)，并成功運(yùn)用到地方豬冷凍精液生產(chǎn)實(shí)踐，形成了較完善的豬冷凍精液操作規(guī)程生產(chǎn)工藝。利用這種生產(chǎn)工藝進(jìn)行冷凍精液制作，可有效保證精液的凍后活力。

1 種公豬飼養(yǎng)管理

1.1 種豬要求

供精種公豬具有種用性能，符合國家有關(guān)規(guī)定。

1.2 免疫

種公豬在供精前要進(jìn)行全面檢疫，并在供精前進(jìn)行程序性免疫，完成免疫程序15d后方可采精。

1.3 飼養(yǎng)管理

1.3.1 能量飼料。種公豬采精期間要注意營養(yǎng)均衡，但要適當(dāng)控制能量飼料，防止種公豬過肥，影響性欲和精液質(zhì)量。

1.3.2 蛋白質(zhì)需求。精液中蛋白質(zhì)占14%，所以供精種公豬飼料必須保證充足的蛋白質(zhì)（不低于17%），特別是在采精期間要適當(dāng)增加飼料蛋白質(zhì)水平。有條件的養(yǎng)殖場，采精期間每頭公豬每天可補(bǔ)充1～2枚雞蛋。

1.3.3 維生素。維生素對種公豬的生殖保健有重要作用，如維生素A不足會引起睪丸萎縮，維生素D和E不足會影響精液質(zhì)量。采精期間要適當(dāng)補(bǔ)充維生素，每日添加飼喂胡蘿卜和魚肝油[2]。

1.3.4 適當(dāng)運(yùn)動。種公豬要適當(dāng)增加運(yùn)動，保證正常的新陳代謝和旺盛的性欲，避免發(fā)生肢蹄病，影響爬跨。

1.4 采精調(diào)教

種公豬10月齡、體重100kg左右開始進(jìn)行爬跨調(diào)教，形成射精反應(yīng)。種公豬采精頻率為每周2～3次。

2 采精前準(zhǔn)備

2.1 采精欄準(zhǔn)備

2.1.1 采精前對采精欄進(jìn)行全面清潔，沖洗干凈，自然干燥后，再用紫外線消毒30min以上。

2.1.2 假臺畜后方放橡膠防滑墊，調(diào)整好位置，以保證公豬爬跨時，站立舒適。

2.1.3 采精室應(yīng)保證冬暖夏涼，控制在16℃～25℃之間。

2.2 種公豬準(zhǔn)備

2.2.1 采精前將種公豬趕到采精欄，刷拭掉種公豬體表尤其是下腹及側(cè)腹的灰塵和污物。

2.2.2 種公豬的陰毛不能過長，以免粘附污物。采精前，修整公豬的陰毛，一般以不超過2cm為宜。

2.2.3 先用0.1%高錳酸鉀溶液清洗種公豬陰莖包皮，再用滅菌生理鹽水清洗，并用消毒的干凈毛巾擦拭包皮部位，避免采精時殘液混入精液中污染精液。

2.3 集精杯準(zhǔn)備

2.3.1 將塑料袋放入集精杯中，然后將塑料袋外翻。將濾紙蓋在集精杯口上，將橡皮筋撐開濾紙固定在集精杯外沿上。濾紙安裝好后，濾紙面向下陷3cm左右，放在35℃～37℃的恒溫箱中預(yù)熱備用。

2.3.2 將消毒紙巾盒、P E手套、集精杯放在實(shí)驗(yàn)室與采精欄之間的壁櫥內(nèi)，關(guān)上壁櫥門。

2.3.3 采精時拿出集精杯并蓋上蓋子，然后傳遞給采精人員。

2.3.4 當(dāng)處理室距采精欄較遠(yuǎn)時，應(yīng)將集精杯放入泡沫保溫箱中，然后帶到采精欄。

2.4 精液營養(yǎng)液、冷凍稀釋液、BTS解凍液配制

2.4.1 營養(yǎng)液配制。葡萄糖1.5g，乳糖3g，甘氨酸0.8g，加雙蒸餾水至100mL。

2.4.2 冷凍稀釋液配方。葡萄糖6.12g、EDTA 0.3g、雙蒸餾水75mL、蛋黃20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、青鏈霉素各10萬U、咖啡因0.2mg/mL。

2.4.3 BTS解凍液配方。葡萄糖3.7g、無水檸檬酸鈉0.6g、碳 酸 氫 鈉0.125g、EDTA 0.125g、氯 化 鉀0.075g、雙蒸餾水100mL。

3 采精

3.1 采精引導(dǎo)

采精員右手戴兩層手套,站在假臺畜的頭部，輕輕敲擊假臺畜以引起公豬的注意，并通過模仿發(fā)情母豬聲音或在假臺畜上灑發(fā)情母豬尿液等方式引導(dǎo)公豬爬跨。當(dāng)公豬爬跨有交配行為時，采精員迅速用右手按摩擠壓公豬包皮囊，將其中的包皮積液擠凈，然后用消毒紙巾將包皮口擦干凈。

3.2 精液采集

3.2.1 采精方法。當(dāng)公豬爬跨假臺畜時，采精員應(yīng)輔助公豬保持正確的姿勢，避免側(cè)向爬或陰莖壓在假臺畜上。手握龜頭呈節(jié)奏性松緊給予壓力進(jìn)行刺激，鎖定龜頭，脫去右手的外層手套，右手呈空拳，當(dāng)龜頭從包皮口伸入空拳后，用中指、無名指、小指鎖定龜頭，并向左前上方拉伸，龜頭一端略向左下方。為了防止未擠凈的包皮積液順著陰莖流入集精杯中，采精時要保證陰莖龜頭端的最高點(diǎn)高于包皮口。

3.2.2 精液收集。最初射出的精液不含精子不能收集，當(dāng)公豬射出乳白色的精液時，左手將集精杯口向上接近右手小指正下方。最后的精液稀薄基本不含精子，不要收集。要保證公豬的射精過程完整。采精過程中，即使最后射出的精液不收集，也不要中止采精，直到公豬陰莖軟縮，試圖爬下假母豬，再慢慢松開公豬的陰莖。取掉集精杯上的濾紙，蓋好集精杯蓋，標(biāo)明公豬耳號，送入化驗(yàn)室櫥窗。

4 品質(zhì)檢測

用帶有恒溫設(shè)施的顯微鏡進(jìn)行檢測，載溫臺溫度應(yīng)恒溫維持在37℃。檢測指標(biāo)主要有：外觀（淡乳白色或灰白色，均勻一致，無雜質(zhì)）、氣味（略帶腥味，無異味）、活力（≥70%。）、畸形率（≤15%）。

5 鮮精處理

5.1 精液稀釋要求

最終稀釋密度為4億/mL。

5.2 預(yù)稀釋

營養(yǎng)液先預(yù)熱到32℃。將活力檢測合格的鮮精，記錄好精液密度、劑量等相關(guān)數(shù)據(jù)，按1：1比例與營養(yǎng)液混合均勻。預(yù)稀釋后的精液放入17℃恒溫箱內(nèi)，等同溫至17℃后，進(jìn)行離心操作。

5.3 離心

將預(yù)稀釋精液裝入100mL的離心管內(nèi)，在恒溫17℃和重力900g條件下離心15min。精液離心后，吸走離心管的上清液。

5.4 稀釋

冷凍稀釋液預(yù)熱至17℃。以每毫升4億的最終稀釋濃度，計(jì)算出需要的冷凍稀釋液。將2/3冷凍稀釋液加到離心管中，以吸吐方式充分混合均勻、合并，再用剩下的1/3冷凍稀釋液洗滌離心管底，合并。

5.5 平衡

將稀釋好的精液放至17℃水浴杯中，一同放進(jìn)4℃冰箱，平衡4h。

5.6 分裝

細(xì)管上應(yīng)用字母標(biāo)明生產(chǎn)場、公豬品種、公豬號、生產(chǎn)日期。檢查灌裝好的細(xì)管精液，將有氣泡、未灌滿的不合格的細(xì)管精液撿出。將分裝好的細(xì)管精液鋪放在冷凍支架上。

6 冷凍

6.1 冷凍方式

6.1.1 程序冷凍。在程控冷凍儀的冷凍柜里，以每分鐘下降30℃的速度填充液氮將精液冷凍。

6.1.2 熏蒸冷凍。采用自制冷凍箱或泡沫箱冷凍，可以降低生產(chǎn)成本，冷凍效果較理想。冷凍箱的深度應(yīng)該在50cm以上，使用前先倒入液氮冷卻10min以上。冷凍支架與液氮面保持2cm，冷凍8min即可。

6.2 包裝

將冷凍好的細(xì)管精液包裝好，外包裝上標(biāo)明品種、豬號、支數(shù)、生產(chǎn)日期等。

6.3 質(zhì)量檢測

6.3.1 解凍。BTS解凍液預(yù)熱至26℃。從液氮罐中取出2～3支細(xì)管精液，迅速放到38℃水中，解凍15s，或50℃水中，解凍7s。剪開細(xì)管精液封口端，擠入數(shù)滴精液至1mLBTS解凍液中，攪勻，回溫到37℃，靜置20min。在37℃載溫臺上，檢測精液活力。

6.3.2 凍精品質(zhì)要求?；盍Α?0%，精子畸形≤18%，密度≥4億/mL，每支（0.25mL規(guī)格細(xì)管）菌落數(shù)≤800個。

7 討論

7.1 種公豬飼養(yǎng)管理

種公豬飼養(yǎng)管理至關(guān)重要，特別是營養(yǎng)均衡方面，要根據(jù)種公豬的生產(chǎn)需要進(jìn)行調(diào)配飼料及添加營養(yǎng)物質(zhì)，保證種公豬的能持續(xù)提供符合冷凍制作的優(yōu)質(zhì)精液。種公豬從體重70kg開始就要飼喂專門的種公豬飼料[4]，控制能量飼料的投入，防止過胖影響生產(chǎn)性能。運(yùn)動對種公豬的健康十分重要，不僅能保持種公豬的性欲，還能有效提高精液質(zhì)量，根據(jù)不同情況合理安排種公豬的運(yùn)動量及運(yùn)動方式[5]。合理的采精頻率是保障精液質(zhì)量和延長種公豬利用年限的重要措施，根據(jù)種公豬不同的年齡合理安排每周采精頻率，后備種公豬1～2次/周，青年種公豬2～3次/周[5]，具體采精頻率還要根據(jù)鮮精品質(zhì)進(jìn)行調(diào)整，一旦發(fā)現(xiàn)精液量減少或精子密度下降，應(yīng)該適當(dāng)減少采精頻率或停采一段時間。

7.2 采精時間

種公豬精液品質(zhì)不僅受營養(yǎng)水平、年齡等因素影響，而且受季節(jié)氣溫因素影響。通常夏季高溫高濕，冬季低溫天氣都會對種公豬精液質(zhì)量有影響，難以制作成功，外界氣溫超過35℃或低于5℃時，建議停采。另外天氣突變，如大幅升降溫對種公豬的精液質(zhì)量也會有影響，但這種影響通常是短暫的，幾天就能恢復(fù)正常。

7.3 溫度控制

溫度控制在豬凍精生產(chǎn)中至關(guān)重要。采精及處理鮮精時，所用的器具應(yīng)保持同等溫度，減少溫差帶來對精子的打擊。在進(jìn)行4℃平衡時，應(yīng)放置在17℃水中，同步降溫，減少降溫帶來的冷打擊[6]?，F(xiàn)在大多數(shù)企業(yè)生產(chǎn)生豬凍精多采取程序冷凍，控溫效果較好。但部分企業(yè)為了節(jié)省成本采用自制冷凍箱或泡沫箱熏蒸冷凍，采用這種方式冷凍時，應(yīng)該提前倒入液氮，靜置10min以上，讓冷凍箱能充分均溫，才能保證冷凍效果。凍精凍制成功后，應(yīng)該全部浸沒在液氮中，避免回溫帶來的影響。檢測精液活力時，應(yīng)確保載溫臺在37℃，才能準(zhǔn)確觀察精子活力，溫度過高或過低都會影響判斷。

7.4 凍精保存

凍精制作好后，應(yīng)該及時投入液氮罐進(jìn)行深度冷凍。冷凍1～2周后，應(yīng)該再進(jìn)行一次凍精質(zhì)量檢查，將合格精液入庫保存。每罐凍精裝2/3左右，充滿液氮，每周定期檢查，及時補(bǔ)充液氮。凍精庫房應(yīng)該保持涼爽、干燥、避風(fēng)、避光，液氮罐外標(biāo)注品種名、豬號、支數(shù)、生產(chǎn)日期等信息，盡量減少不必要的開罐查找精液。