李靜，劉祎，崔冰漪，劉秀瑋

目前，獸醫(yī)界已極為廣泛地對(duì)細(xì)菌性疾病防治中的中藥作用進(jìn)行了研究[1-3]。通常情況下，在大腸埃希菌病的防治中，清熱類藥物療效良好[4-6]。本研究建立小鼠模型并予以不同處理，以觀察芩連翹皮方對(duì)感染大腸埃希菌小鼠的防治作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 (1)動(dòng)物：SPF級(jí)KM小鼠120只，由華北理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。(2)試藥試劑：中藥飲片黃芩、黃連、黃柏、連翹、白芨由唐山市中醫(yī)醫(yī)院中藥房提供。芩連翹皮方提取液制備：黃芩10 g，黃連5 g，黃柏10 g，芒硝20 g，皂角刺15 g，連翹20 g，白芨20 g，水煎醇沉法制備原方提取液并濃縮至含1 g/ml的生藥量。配制1.3×107cfu/ml的大腸埃希菌菌懸液。(3)儀器設(shè)備：12號(hào)灌胃針由北京合力科創(chuàng)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)，722G型分光光度計(jì)由上海儀電分析儀器有限公司生產(chǎn)，F(xiàn)W100型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)由天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 芩連翹皮方的預(yù)防實(shí)驗(yàn)：將60只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組10只，雌雄各半?？瞻讓?duì)照組小鼠灌服生理鹽水1 ml，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠灌服氟苯尼考溶液1 ml，低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠分別灌服0.25 g/ml、0.50 g/ml、1.00 g/ml芩連翹皮方提取液1 ml，連續(xù)給藥5 d，最后1次給藥后3 h給予陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠腹腔注射1.3×107cfu/ml的大腸埃希菌菌懸液0.1 ml，給予空白對(duì)照組小鼠注射生理鹽水0.1 ml。

1.2.2 芩連翹皮方的治療實(shí)驗(yàn)：將60只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組10只，雌雄各半。給予陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠腹腔注射1.3×107cfu/ml的大腸埃希菌菌懸液0.1 ml，空白對(duì)照組小鼠注射生理鹽水0.1 ml。3 h后給予陽(yáng)性對(duì)照組小鼠灌服氟苯尼考溶液1 ml，陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組小鼠灌服生理鹽水1 ml，低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠分別灌服0.25 g/ml、0.50 g/ml、1.00 g/ml芩連翹皮方1 ml，連續(xù)給藥5 d。

1.3 觀察指標(biāo) 攻毒前后分別采用溫度傳感器測(cè)量預(yù)防實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)各組小鼠肛門周圍體表溫度。

2 結(jié) 果

2.1 預(yù)防實(shí)驗(yàn)小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較 空白對(duì)照組小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，陰性對(duì)照組、低劑量組小鼠攻毒后肛門周圍體表溫度均高于攻毒前(P<0.01)，但陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。攻毒前，6組小鼠肛門周圍體表溫度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；攻毒后，陰性對(duì)照組、低劑量組小鼠肛門周圍體表溫度均高于空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組(P<0.05)。見表1。

表1 預(yù)防實(shí)驗(yàn)6組小鼠攻毒前后肛門周圍體表 溫度比較

2.2 治療實(shí)驗(yàn)小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較 空白對(duì)照組小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，陰性對(duì)照組、低劑量組小鼠攻毒后肛門周圍體表溫度均高于攻毒前(P<0.05)，但陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組小鼠攻毒前后肛門周圍體表溫度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。攻毒前，6組小鼠肛門周圍體表溫度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；攻毒后，陰性對(duì)照組、低劑量組小鼠肛門周圍體表溫度均高于空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組(P<0.05)。見表2。

表2 治療實(shí)驗(yàn)6組小鼠攻毒前后肛門周圍體表 溫度比較

3 討 論

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[7-10]，中藥治療細(xì)菌感染性具有較好療效。芩連翹皮方是我院自擬方劑之一，組成成分包括連翹、黃芩、芒硝、皂角刺、黃連、白芨及黃柏等，具有燥濕瀉火、消炎鎮(zhèn)痛、清熱疏風(fēng)、解毒散熱等功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，芩連翹皮方可抗炎、促進(jìn)組織再生及血管生成[11]。因此，有學(xué)者認(rèn)為芩連翹皮方治療大腸埃希菌感染具有一定臨床意義。為明確芩連翹皮方對(duì)大腸埃希菌感染的具體作用，本文通過建立小鼠模型并予以不同處理后，預(yù)防實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)均顯示，小鼠攻毒后陰性對(duì)照組、低劑量組小鼠肛門周圍體表溫度均高于空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、中劑量組、高劑量組。提示，芩連翹皮方最顯著的藥理作用為調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡，可能與大腸桿菌的內(nèi)毒素起著重要的作用有關(guān)[12]。內(nèi)毒素具有使小鼠體溫升高，出現(xiàn)全身炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)，導(dǎo)致機(jī)體功能衰竭的作用。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)等因子均在創(chuàng)面愈合的不同階段有重要作用。TGF-β1可有效提升創(chuàng)面的修復(fù)進(jìn)程，對(duì)纖維細(xì)胞的增殖進(jìn)程具有積極的促進(jìn)作用，同時(shí)可對(duì)胞外基質(zhì)中Ⅰ型前膠原的合成產(chǎn)生一定的刺激作用，從而加快創(chuàng)面的愈合進(jìn)程，緩解大腸埃希菌癥狀。EGF對(duì)某些因子的生成具有一定的誘導(dǎo)作用，例如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，從而加快新血管的生成。bFGF的生物學(xué)功能具備多樣性與復(fù)雜性的特征，對(duì)新血管的生成具有積極的促進(jìn)作用[13]。bFGF還與組織再生、創(chuàng)面愈合等具有緊密的關(guān)聯(lián)性。筆者既往研究發(fā)現(xiàn)，治療后，與對(duì)照組比較，應(yīng)用芩連翹皮方進(jìn)行治療的治療組TGF-β1、EGF及bFGF表達(dá)量均明顯提高，且呈現(xiàn)逐漸遞增的增長(zhǎng)趨勢(shì)，但接受治療12 d后，芩連翹皮方治療組的TGF-β1、EGF及bFGF的表達(dá)量均略有下降[14]。芩連翹皮方中，黃芩、連翹等藥材均屬于君藥，具備清熱消炎、解毒瀉火、疏散風(fēng)熱、燥濕等功效；黃連也具備解毒清熱、燥濕瀉火的功效。方中諸藥協(xié)同作用，有助于消炎生肌，對(duì)組織再生、血管生成具有重要意義。

綜上所述，芩連翹皮方可有效防治小鼠感染大腸埃希菌，值得臨床推廣應(yīng)用。