萬 云，張四化，黎 巧，楊曉培，岳 龍，蘭鄒然，阮 征

（1.武漢市動物疫病預(yù)防控制中心，湖北武漢 430016；2.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022）

豬圓環(huán)病毒2 型（porcine circovirus type 2，PCV2）被公認(rèn)為是養(yǎng)豬業(yè)的重要病原，是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要病原，也可引起豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、豬呼吸道疾病復(fù)合征（PRDC）、A2 型先天性震顫（CT）及母豬繁殖障礙等疫病[1]。PCV2 對外界抵抗力非常強(qiáng)，可同時與豬細(xì)小病毒、豬流感病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒等病原發(fā)生混合感染，導(dǎo)致整體致病性增強(qiáng)，使豬只死亡率明顯升高，從而給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前，我國多地均有PCV2感染的報道[2-4]。為掌握武漢市大型規(guī)?；B(yǎng)豬場的PCV2 流行率，并探索其傳播風(fēng)險因素，2020年4—6 月對武漢市22 個大型規(guī)模化養(yǎng)豬場抽樣采集豬口腔液樣品，采用PCR 方法進(jìn)行PCV2 核酸檢測，以期為科學(xué)防控該病提供依據(jù)。

1 方法

1.1 目標(biāo)群體

以武漢市的蔡甸、江夏、黃陂、新洲、東西湖、經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)等6 個區(qū)作為調(diào)查區(qū)域，將這些區(qū)域內(nèi)所有年出欄大于1 萬頭的規(guī)?；B(yǎng)豬場作為目標(biāo)群體。

1.2 樣品采集及檢測

以單個欄舍為單位，將滅菌粗棉繩系在欄舍欄桿上，并保持與豬身同高。豬只充分咀嚼粗棉繩0.5 h 后，將棉繩取下，刮取和擠壓繩上的口腔液，收集于滅菌離心管中保存，用于PCR 檢測。檢測試劑盒，使用世紀(jì)元亨公司生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒PCR 檢測試劑盒。

1.3 抽樣策略

本研究采取二階段隨機(jī)抽樣方法。第一階段，對武漢市所有大型規(guī)?；i場，采用估計(jì)流行率的樣本量計(jì)算方式，確定抽樣場數(shù)后隨機(jī)抽取豬場。全市共有28 個大型規(guī)?；B(yǎng)殖場。參考前期監(jiān)測數(shù)據(jù)，置信水平設(shè)為95%，可接受絕對誤差設(shè)為10%，場預(yù)期流行率設(shè)為30%，計(jì)算得出抽樣場點(diǎn)數(shù)應(yīng)為21 個，實(shí)際隨機(jī)抽取22 個。第二階段，在豬場內(nèi)采取發(fā)現(xiàn)疫病的樣本量計(jì)算方式，以欄舍為單位，計(jì)算需要隨機(jī)抽取的欄舍數(shù)量。因年出欄大于1 萬頭的豬場，其存欄量應(yīng)≥6 500 頭，假設(shè)每個欄位圈養(yǎng)20 頭，則整個豬場欄位應(yīng)≥300 個。采用發(fā)現(xiàn)疫病的方式計(jì)算，置信水平設(shè)為95%，試驗(yàn)敏感性設(shè)為95%，欄舍預(yù)定流行率為20%，當(dāng)群體大于100 頭時，樣本量均為14 份，實(shí)際從每個場點(diǎn)隨機(jī)采集15 個欄舍的口腔液樣本，重點(diǎn)選取圈養(yǎng)多頭豬只的欄舍。

1.4 病例定義

陽性欄：采集到的口腔液樣品，經(jīng)PCR 檢測為PCV2 核酸陽性的欄；低流行率場：陽性欄檢出率＜20% 的場點(diǎn)；高流行率場：陽性欄檢出率≥20%的場點(diǎn)。

1.5 問卷調(diào)查

問卷內(nèi)容包括，養(yǎng)殖場基本養(yǎng)殖情況、引種情況、免疫情況、消毒措施、發(fā)病情況等。采取現(xiàn)場填寫、電話問詢等方式進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)分析

使用Excel、WinEpi、SPSS 等軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，計(jì)算大型規(guī)?；B(yǎng)豬場PCV2 的場群流行率；使用地圖慧在線地圖工具（http://e.dituhui.com/app）繪制場點(diǎn)空間分布圖，并尋找該病傳播的風(fēng)險因素，進(jìn)而分析原因并提出相應(yīng)防控措施。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

在6 個區(qū)的22 個大型規(guī)?；B(yǎng)豬場的330 份豬口腔液樣本中，檢測出55 份PCV2 核酸陽性（表1）。陽性樣品分別來自8 個規(guī)模豬場（表2）。所調(diào)查的6 個區(qū)中有5 個區(qū)均檢測到PCV2 陽性場點(diǎn)，場點(diǎn)空間分布見圖1。

表1 豬口腔液PCV2 核酸檢測結(jié)果

表2 PCV2 核酸陽性規(guī)模場分布

圖1 隨機(jī)抽樣大型規(guī)?；i場場點(diǎn)分布

2.2 場群流行率

從22 個豬場中檢測出8 個場為PCV2 核酸陽性，場群表觀流行率為36.4%（8/22）。設(shè)PCR的試驗(yàn)敏感性Se 為95.0%，特異性Sp 為100%，計(jì)算得出群敏感性HSe 為95.8%，群特異性HSp=100%。通過真實(shí)流行率公式計(jì)算，得出武漢市大型規(guī)?；i場PCV2 病原群體真實(shí)流行率為38.0%（95%CI，17.5%～58.5%）。

2.3 風(fēng)險因素

根據(jù)調(diào)查問卷，選擇出8 個因素（均為二分類變量）進(jìn)行單因素分析，利用2×2 表格，將數(shù)據(jù)進(jìn)行Fisher 確切概率法計(jì)算，結(jié)果僅1 個因素即“凈道、污道是否分開”具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.05），具體見表3。

3 討論

3.1 口腔液采樣方式

口腔液樣品采集以欄舍為單位，在收集過程中可能混有環(huán)境樣品，因此該種采樣方式無法用于掌握動物個體流行率，而是更有利于更加全面掌握豬群及豬場的整體病原存在狀況。為此本研究采取發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣策略進(jìn)行抽樣。此外，根據(jù)前期本實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果及PCV2 侵入動物機(jī)體的特性，從口腔液中能夠檢測到的PCV2 病原含量與從組織樣品中的會存在一定差異，從口腔液中檢測到病原的時間（疫病早期）可能更早[5]，但能夠從組織中檢測到的PCV2 數(shù)量可能更多。因此，該采樣方式對判斷場點(diǎn)的帶毒情況還需做更深入研究。

表3 風(fēng)險因素單因素分析結(jié)果

3.2 加強(qiáng)生物安全管理

受全市大型規(guī)?；i場數(shù)量的限制，本研究對象數(shù)量較少，對風(fēng)險因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，僅找出1 個與PCV2 相關(guān)的風(fēng)險因素“凈道、污道是否分開”，而其他生物安全風(fēng)險因素關(guān)聯(lián)性較弱。但是“凈道、污道是否分開”能夠反映養(yǎng)殖場對生物安全防護(hù)的重視水平，說明加強(qiáng)生物安全管理是防控圓環(huán)病毒病的關(guān)鍵點(diǎn)之一，如場點(diǎn)遠(yuǎn)離交通要道、場內(nèi)結(jié)構(gòu)分區(qū)合理、污道凈道分離、運(yùn)輸車輛使用專業(yè)洗消烘設(shè)備、自繁自養(yǎng)等措施，均能在一定程度上控制PCV2 傳播。

3.3 局限性

受新冠肺炎疫情影響，該橫斷面研究采樣持續(xù)時間較長。且本市大型規(guī)?；B(yǎng)豬場總數(shù)為28個，數(shù)量較少，可能采取普查的方式進(jìn)行采樣監(jiān)測結(jié)果會更加準(zhǔn)確，但因采樣時部分場點(diǎn)封村封路，未能對所有場點(diǎn)進(jìn)行抽樣。同時，因場點(diǎn)數(shù)較少，導(dǎo)致后續(xù)風(fēng)險因素分析的置信度較低，找到的風(fēng)險因素較少。

本研究在場內(nèi)采用發(fā)現(xiàn)疫病的策略進(jìn)行隨機(jī)采樣。根據(jù)前期本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果與經(jīng)驗(yàn)判斷，將PCV2 欄舍流行率預(yù)設(shè)為20%。因該預(yù)設(shè)數(shù)值較高，導(dǎo)致采樣數(shù)較少。在后續(xù)統(tǒng)計(jì)分析中，未檢測到陽性樣品的場，并不代表一定是陰性場，只能說明該場PCV2 欄舍流行率低于20%，仍有可能是陽性場。因此，本研究以場內(nèi)PCV2 陽性欄舍檢出率20%為界，劃分PCV2 高流行率場和低流行率場，并進(jìn)行風(fēng)險因素分析，但全市大型規(guī)?；i場PCV2 實(shí)際的真實(shí)場群流行率可能更高。

受總體檢測樣品數(shù)量的限制，在研究設(shè)計(jì)階段，未對場內(nèi)豬群進(jìn)行更加細(xì)致的規(guī)劃采樣。如根據(jù)PCV2 的流行特點(diǎn)，在場內(nèi)采取分層抽樣方法，將豬群分為仔豬群、后備母豬群、經(jīng)產(chǎn)母豬群、公豬群等，分別分析PCV2 對不同種群的影響；針對PCV2 不同毒株疫苗的使用，探討疫苗對PCV2 的影響。同時，在調(diào)查問卷中也需要增加更多疾病傳播風(fēng)險相關(guān)問題。

4 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)：武漢市大型規(guī)模豬場的PCV2 場群流行率較高，流行范圍較廣；凈道、污道不分開是場內(nèi)PCV2 感染的主要風(fēng)險因素。因此，各場需通過強(qiáng)化生物安全管理來控制PCV2 的流行。