張佳誠(chéng) 劉軍 付書(shū)林

摘要：為研究黃芩苷對(duì)仔豬感染副豬嗜血桿菌（Glaesserella parasuis，GPS）后血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血液生化指標(biāo)的影響，選取48頭“杜×長(zhǎng)×大”健康斷奶仔豬，隨機(jī)分為6組，分別為：空白對(duì)照組、GPS感染模型組、對(duì)照藥物氟尼辛葡甲胺組和不同劑量黃芩苷處理組（肌內(nèi)注射，劑量分別為25、50和100 mg/kg）。飼養(yǎng)3 d后進(jìn)行攻毒及藥物處理，攻毒后48 h和96 h分別采集血樣進(jìn)行血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血液生化指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示，攻毒后48 h，氟尼辛葡甲胺能緩解副豬嗜血桿菌引起的血小板、單核細(xì)胞數(shù)量的降低（P<0.01），緩解嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量的降低及谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量的升高（P<0.05）;25、50及100 mg/kg黃芩苷能緩解血小板、單核細(xì)胞數(shù)量的降低（P<0.01）;25、100 mg/kg黃芩苷能緩解谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量的升高（P<0.05）;50 mg/kg黃芩苷能緩解紅細(xì)胞數(shù)量的降低（P<0.05）。攻毒后96 h，氟尼辛葡甲胺能緩解副豬嗜血桿菌引起的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)量的升高及淋巴細(xì)胞數(shù)量的降低（P<0.01）;25、50及100 mg/kg黃芩苷能緩解白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)量的升高;50 mg/kg黃芩苷能緩解血小板數(shù)量的降低（P<0.05）;100 mg/kg黃芩苷能緩解葡萄糖、磷含量的降低（P<0.05）。以上結(jié)果表明，黃芩苷能在一定程度上緩解仔豬因感染GPS引起的血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血液生化指標(biāo)的異常變化。

關(guān)鍵詞：黃芩苷;副豬嗜血桿菌（Glaesserella parasuis，GPS）;仔豬;血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù);血液生化指標(biāo)

副豬嗜血桿菌病也稱(chēng)格拉澤氏?。℅lasser's disease），是近年來(lái)嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的主要細(xì)菌性疾病之一 [1，2]。副豬嗜血桿菌（Glaesserella parasuis，GPS）為該病的病原體，常引發(fā)豬的纖維素性多發(fā)性漿膜炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重感染時(shí)出現(xiàn)敗血癥而導(dǎo)致豬死亡。黃芩苷（Baicalin）是一種黃酮類(lèi)化合物，從植物黃芩根部分離提純得到，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化和抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等藥理活性[3]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃芩能通過(guò)抑制α-溶血素的溶細(xì)胞作用保護(hù)感染金黃色葡萄球菌引起肺炎的小鼠[4];黃芩苷與耐甲氧苯青霉素的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素具有協(xié)同抗菌作用[5];黃芩苷能通過(guò)調(diào)控豬血管內(nèi)皮細(xì)胞感染GPS而激活的TLR4/NF-κB和NLRP3/Caspase-1信號(hào)通路，緩解仔豬炎癥反應(yīng)與血管損傷 [6]。氟尼辛葡甲胺是一種獸用非甾體類(lèi)的抗炎鎮(zhèn)痛藥物，通過(guò)抑制環(huán)氧化酶的活性，減少炎性因子的合成，起到抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛的作用[7]。本試驗(yàn)通過(guò)建立仔豬GPS感染模型，研究黃芩苷對(duì)仔豬感染GPS后血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血液生化指標(biāo)的影響，旨在為黃芩苷用于治療副豬嗜血桿菌引起的炎癥反應(yīng)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃芩苷，四川泰康藥業(yè)有限公司，含量 ≥ 90%;黃芩苷鈉，本實(shí)驗(yàn)室合成，以黃芩苷計(jì)含量為92%，注射時(shí)按25、50和100 mg/kg稱(chēng)取黃芩苷鈉，溶于5 mL生理鹽水中肌內(nèi)注射;氟尼辛葡甲胺，廣東溫氏大華農(nóng)生物科技有限公司，含量為50 mg/mL，按2 mg/kg肌內(nèi)注射;GPS為地方型強(qiáng)毒株SH0165，血清5型，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取體重8～10 kg、副豬嗜血桿菌抗體陰性的“杜×長(zhǎng)×大”健康斷奶仔豬48頭，隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、GPS感染模型組、對(duì)照藥物氟尼辛葡甲胺（劑量為2 mg/kg）和不同劑量黃芩苷處理組（劑量分別為25、50和100 mg/kg），每組8頭。GPS感染模型組及各藥物處理組按每頭豬2×109 CFU菌量腹腔注射1 mL菌液。對(duì)照藥物和不同濃度黃芩苷在攻毒前0.5 h給藥，每日給藥2次。2019年3月9日8：30開(kāi)始攻毒;3月11日8：30第1次采集血樣;3月13日8：30第2次采集血樣。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)仔豬購(gòu)自武漢市江夏區(qū)萬(wàn)年青畜牧有限公司，于國(guó)藥動(dòng)保金口分公司動(dòng)物房負(fù)壓攻毒舍進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。試驗(yàn)期內(nèi)仔豬自由采食飲水，調(diào)節(jié)攻毒舍溫度在25～30 ℃，飼養(yǎng)3 d待仔豬適應(yīng)環(huán)境后再進(jìn)行分組和后續(xù)藥物處理及攻毒。

1.4 樣品采集

使用EDTA抗凝負(fù)壓采血管及普通負(fù)壓采血管，攻毒后48、96 h于仔豬前腔靜脈采集血樣。EDTA抗凝負(fù)壓管采集血樣用于血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)檢測(cè);普通負(fù)壓采血管采集血樣后分離血清用于血液生化指標(biāo)檢測(cè)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)采用 Siemens ADVIA? 2120i 全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定，血液生化指標(biāo)采用HITEC 7100全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)分析采用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析和LSD多重比較。統(tǒng)計(jì)結(jié)果用平均值和SEM（標(biāo)準(zhǔn)誤）表示。P<0.01為差異極顯著，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芩苷對(duì)仔豬感染GPS后血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)變化的影響

由表1可見(jiàn)，感染 GPS 48 h 后，與空白對(duì)照組相比，GPS 模型組紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P<0.05），血小板、單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量極顯著降低（P<0.01）。與GPS模型組相比，氟尼辛葡甲胺能極顯著增加血小板、單核細(xì)胞數(shù)量（P<0.01），顯著增加嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量（P<0.05）;25 mg/kg劑量黃芩苷能極顯著增加血小板、單核細(xì)胞數(shù)量（P<0.01）;50 mg/kg劑量黃芩苷能極顯著增加血小板、單核細(xì)胞數(shù)量（P<0.01），顯著增加紅細(xì)胞數(shù)量（P<0.05）;100 mg/kg劑量黃芩苷能極顯著增加血小板、單核細(xì)胞數(shù)量（P<0.01）。

感染GPS 96 h后，與空白對(duì)照組相比，GPS模型組血小板、淋巴細(xì)胞數(shù)量極顯著降低（P<0.01），白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量極顯著增加（P<0.01）。與GPS模型組相比，氟尼辛葡甲胺能極顯著降低白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)量（P<0.01）;25 mg/kg劑量黃芩苷能極顯著降低白細(xì)胞數(shù)量（P<0.01），顯著降低中性粒細(xì)胞數(shù)量（P<0.05）;50 mg/kg劑量黃芩苷能顯著增加血小板、淋巴細(xì)胞數(shù)量（P<0.05），極顯著降低白細(xì)胞數(shù)量（P<0.01）、顯著降低中性粒細(xì)胞數(shù)量（P<0.05）;100 mg/kg劑量黃芩苷能極顯著降低白細(xì)胞數(shù)量（P<0.01）、顯著降低中性粒細(xì)胞數(shù)量（P<0.05）。

2.2 黃芩苷對(duì)仔豬感染GPS后血液生化指標(biāo)變化的影響

由表2可見(jiàn)，感染GPS 48 h后，與空白對(duì)照組相比，GPS模型組仔豬血液中堿性磷酸酶、總膽固醇含量顯著降低（P<0.05），葡萄糖、磷含量極顯著降低（P<0.01），谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量極顯著升高（P<0.01）。與GPS模型組相比，氟尼辛葡甲胺能極顯著降低谷草轉(zhuǎn)氨酶含量（P<0.01）且顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量（P<0.05）;25 mg/kg黃芩苷能極顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量并極顯著增加磷含量（P<0.01）;100 mg/kg黃芩苷能顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量（P<0.05）。

感染GPS 96 h后，與空白對(duì)照組相比，GPS模型組仔豬血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量顯著增加（P<0.05），堿性磷酸酶、葡萄糖、磷含量極顯著降低（P<0.01），總膽固醇含量顯著降低（P<0.05）。與GPS模型組相比，氟尼辛葡甲胺能極顯著增加總膽固醇含量（P<0.01），顯著增加總蛋白含量（P<0.05）;25 mg/kg黃芩苷能顯著增加總蛋白含量（P<0.05）;100 mg/kg黃芩苷能極顯著增加葡萄糖含量（P<0.01）、顯著增加磷的含量（P<0.05）。

3 討論

仔豬感染GPS后，各時(shí)間點(diǎn)紅細(xì)胞及血小板數(shù)量均有明顯下降，與前期仔豬臨床癥狀出現(xiàn)呼吸困難以及剖檢中出現(xiàn)肝臟與脾臟出血的癥狀相符。仔豬感染GPS 48 h時(shí)，對(duì)照藥物及各劑量黃芩苷均能極顯著緩解血小板數(shù)量的降低，96 h 時(shí)50 mg/kg劑量的黃芩苷能顯著緩解仔豬感染GPS引起的血小板數(shù)量的降低。結(jié)果表明，黃芩苷在保護(hù)血管損傷與止血凝血方面有一定作用。

仔豬感染GPS 48 h時(shí)單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量極顯著下降，提示血液中白細(xì)胞可能遷移到炎癥部位[8]，導(dǎo)致外周血液中的白細(xì)胞數(shù)量降低，對(duì)照藥物及各劑量黃芩苷均能極顯著緩解血液中單核細(xì)胞數(shù)量降低。仔豬感染GPS 96 h時(shí)，白細(xì)胞數(shù)量極顯著增加，其中中性粒細(xì)胞數(shù)量的增加尤為明顯，提示機(jī)體因GPS入侵引發(fā)的炎癥反應(yīng)加劇。對(duì)照藥物及各劑量黃芩苷藥物組中性粒細(xì)胞數(shù)量均顯著下降，表明其可以有效緩解仔豬炎癥。汪洋等[9]研究發(fā)現(xiàn)脂多糖（LPS）在短期內(nèi)可引起仔豬血液白細(xì)胞顯著降低，24 h后白細(xì)胞數(shù)量又極劇增加，與本試驗(yàn)仔豬感染GPS后的情況相似。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血糖值是動(dòng)物肝功能的重要指標(biāo)[10]。本試驗(yàn)中，仔豬感染GPS 48 h 后，血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量顯著升高，血糖顯著降低，推斷GPS引發(fā)仔豬肝功能損傷。仔豬感染GPS 48 h時(shí)，25 mg/kg劑量的黃芩苷能極顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量，100 mg/kg劑量的黃芩苷和對(duì)照藥物能顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量;感染后48 h和96 h 時(shí)100 mg/kg黃芩苷均能極顯著增加血糖含量。結(jié)果表明，黃芩苷對(duì)GPS引發(fā)的仔豬肝功能損傷有一定的緩解作用，對(duì)仔豬肝臟有一定的保護(hù)作用。

4 結(jié)論

仔豬感染GPS后，血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血液生化指標(biāo)會(huì)發(fā)出現(xiàn)異常變化，通過(guò)肌內(nèi)注射25～100 mg/kg的黃芩苷，能有效緩解和改善這一現(xiàn)象。

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