鄭 楊，李 巖，劉 博，周 芹

(1.黑龍江省植檢植保站，黑龍江 哈爾濱 150090；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，北京 100083；3.黑龍江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150080)

1 前言

目前國內(nèi)對莪術(shù)醇原藥分析方法尚未見報道。本文采用高效液相色譜法對莪術(shù)醇進(jìn)行定性和定量分析。該方法操作經(jīng)濟(jì)、快速、簡便、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量的檢測分析。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；甲酸：分析純；超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；莪術(shù)醇標(biāo)樣：99.1%；試樣：莪術(shù)醇原藥。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1260，具有二級管陣列檢測器和自動進(jìn)樣器，定量環(huán)20μL；色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱，內(nèi)裝Zorbax SB-C18、5μm填充物；過濾器：濾膜孔徑約0.45um。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：乙腈:0.1%甲酸水溶液=85:15；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：210nm；進(jìn)樣體積：5.0uL；保留時間：莪術(shù)醇5.3min。

2.4 測定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取莪術(shù)醇標(biāo)樣0.031g(精確至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，靜置備用。

圖1 莪術(shù)醇標(biāo)品的液相色譜圖

圖2 莪術(shù)醇92%原藥樣品的液相色譜圖

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取試樣0.026g(精確至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶液超聲溶解并稀釋至刻度，靜置備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待各針相對響應(yīng)值變化﹤1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測定。

2.4.4 計(jì)算 將測得的2針試樣溶液及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中莪術(shù)醇的峰面積值分別進(jìn)行平均，按下式計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)：

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中莪術(shù)醇峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中莪術(shù)醇峰面積的平均值；

m1—標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

P —標(biāo)樣中莪術(shù)醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果分析

3.1 色譜條件的選擇 通過Agilent ZORBAX 高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得莪術(shù)醇的紫外吸收圖(圖3)，從圖中可以看到在吸收波長190～400nm區(qū)域內(nèi)，莪術(shù)醇的最大吸收波長在200nm附近，由于吸收波長200nm附近溶劑干擾比較明顯，因此將檢測波長定為210nm。

圖3 莪術(shù)醇紫外吸收譜圖

依據(jù)莪術(shù)醇的理化性質(zhì)，選用乙腈和甲酸水溶液作為流動相，用乙腈溶解樣品，有效成分與雜質(zhì)能得到很好分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，分離效果好。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取莪術(shù)醇標(biāo)樣0.033g(精確至0.2mg)，置于50mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，靜止備用。用移液管準(zhǔn)確移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度搖勻后備用。按上述條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為y莪術(shù)醇=9 632.27x-5.39，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

3.3 方法精密度的測定 在上述色譜操作條件下對同一樣品平行測定5次莪術(shù)醇的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10；變異系數(shù)為0.11%(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 方法準(zhǔn)確度的測定 按照配方比例要求，將除原藥以外的所有填料助劑混勻，作制劑空白，按照制劑標(biāo)稱值在制劑空白中添加有效成分，合成5個制劑樣品，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得莪術(shù)醇的平均加標(biāo)回收率為99.93%(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 方法特異性 對樣品組分色譜峰進(jìn)行峰純度試驗(yàn)，通過工作站軟件計(jì)算匹配度，峰純度因子為999.89，特異性符合要求。

圖4 莪術(shù)醇純度

4 結(jié)論

本文建立了檢測莪術(shù)醇原藥中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的高效液相色譜分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，莪術(shù)醇在測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，有較高的準(zhǔn)確度和精密度，具有簡便、快速、分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，是一種可行的分析方法。