吉莉莉

免疫組化病理技術(shù)制片為很多疾病檢測(cè)提供幫助，技術(shù)水平日益提升[1]。像腫瘤惡性病變、良性病變等在免疫組化病理技術(shù)制片的幫助下都取得了較大成績(jī)，臨床檢驗(yàn)、診斷、治療效率變高。但免疫組化病理技術(shù)制片過(guò)程中依然存在著較多問(wèn)題，成為檢驗(yàn)中的困擾，像制片質(zhì)量不佳等，會(huì)降低檢驗(yàn)準(zhǔn)確性，免疫組化病理技術(shù)制片也成為檢驗(yàn)重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象，檢驗(yàn)人員也根據(jù)實(shí)際工作對(duì)制片進(jìn)行改善。質(zhì)量控制后免疫組化病理技術(shù)制片比傳統(tǒng)方法制片更高效，切片質(zhì)量從多方面進(jìn)行保障，切片污染、樣本質(zhì)量不佳等較少發(fā)生[2]。質(zhì)量控制對(duì)制片流程進(jìn)行要求，切片選擇、樣本提取、試劑使用/選擇等都變的更嚴(yán)格，免疫組化病理技術(shù)制片水平被提高，制片良好率上升，報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月—2019年4月住院的42例患者進(jìn)行本次研究，遵循擲硬幣法均分為參照組和觀察組，各21 例。所有患者或家屬皆簽署了知情同意書(shū)，且經(jīng)由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。參照組有17例男和4 例女，年齡均值（47.19±11.98）歲，包括6 例肝類(lèi)疾病、10 例胃腸道相關(guān)疾病、5 例泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病。觀察組有14 例男和7 例女，年齡均值（47.82±12.46）歲，包括9 例肝類(lèi)疾病、5例胃腸道相關(guān)疾病、7 例泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病。兩組基線(xiàn)資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 參照組 傳統(tǒng)方法制片：樣本固定：從組織樣本提取開(kāi)始計(jì)時(shí)，30 分鐘內(nèi)必須放置到固定液中，用超過(guò)固定液體積4 ～10倍的甲醛溶液（生產(chǎn)廠商：浙江普洛康裕制藥有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20065487；規(guī)格：15 mL/瓶）（濃度為10%）對(duì)組織樣本固定8 ～24 小時(shí)?？乖迯?fù)：以熱修復(fù)法為主，溫度要在100℃以上，修復(fù)時(shí)間為3 ～15 分鐘，修復(fù)液pH 值為7.5 ～8.5。脫蠟處理：試劑添加時(shí)要均勻操作，避免邊緣效應(yīng)，試劑面積要超出切片組織界線(xiàn)0.05 ～0.35 cm，對(duì)浸液溫度和烘烤切片溫度要進(jìn)行控制，直到封固完成。

1.2.2 觀察組 質(zhì)量控制免疫組化病理技術(shù)制片：（1）常溫下先將組織樣本制作成脫蠟切片，控制好浸泡在雙氧水中的時(shí)間，一般20 分鐘，雙氧水（生產(chǎn)廠商：廣東恒健制藥有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H44023919；規(guī)格：500 mL/瓶）濃度為3%，時(shí)間到達(dá)后用磷酸鹽（生產(chǎn)廠商：福安藥業(yè)集團(tuán)煙臺(tái)只楚藥業(yè)有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37020894；規(guī)格：1 mL）對(duì)切片進(jìn)行沖洗，每次5 分鐘，共進(jìn)行3 次。（2）將700 mL 檸檬酸緩沖液（生產(chǎn)廠商以上海遠(yuǎn)慕生物科技公司為主；未查到生產(chǎn)批號(hào)，此種緩沖液可以用檸檬酸等材料自行配比，一般規(guī)格在500 mL）（pH 值控制在6.0）放在1 000 mL 容積的燒杯中加熱，再放入標(biāo)記好的細(xì)胞角蛋白19（Cytokeratin 19，CK19）、Ki-67、乙型肝炎核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg）等抗體，燒杯加熱至沸騰15 min 后，往每個(gè)切片中滴入相應(yīng)抗體，將切片放置在4℃的冰箱中進(jìn)行孵育。（3）用磷酸鹽沖洗液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗液（pH 值為7.4）開(kāi)始沖洗切片，每次5 分鐘，共進(jìn)行3 次。（4）常溫下為每個(gè)切片滴入抗溶液并孵育15 min，再用PBS 沖洗，每次5 min，連續(xù)3 次。（5）將切片放到二氨基聯(lián)苯氨（diaminobezidine，DAB）顯色劑中5 ～10 min 后用蘇木精進(jìn)行襯染和水洗，完成后進(jìn)行封固。

表1 兩組的制片良好率對(duì)比

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)兩組的制片優(yōu)良例數(shù)，生成制片良好率。統(tǒng)計(jì)并比較兩組的制片平均時(shí)間、誤差率等相關(guān)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)處理使用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料制片良好率用χ2檢驗(yàn)，采用（%）表示，相關(guān)情況用（±s）表示，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組的制片良好率

控制后，參照組制片良好率較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)比兩組的相關(guān)情況

控制后，參照組和觀察組的制片平均時(shí)間分別為（1.95±0.36）d 和（0.97±0.22）d，比值為（t=10.645，P=0.000）；參照組和觀察組的誤差率分別為（8.98±3.46）%和（4.07±2.53）%，比值為（t=5.249，P=0.000），觀察組相關(guān)情況更好，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

免疫組化病理技術(shù)制片對(duì)轉(zhuǎn)移癌來(lái)源、腫瘤預(yù)后、臨床用藥、正確診斷等提供幫助[3]。免疫組化病理技術(shù)制片雖較常用，但樣本固定不當(dāng)、溫度控制不到位等容易導(dǎo)致檢測(cè)失敗，誤差明顯，制片質(zhì)量變差，影響診斷結(jié)果。質(zhì)量控制后免疫組化病理技術(shù)制片比傳統(tǒng)方法制片質(zhì)量更好，操作更嚴(yán)謹(jǐn)，流程更清晰[4]。質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片要求更細(xì)膩，制片方式被改善，抗體選擇更明確。質(zhì)量控制后免疫組化病理技術(shù)制片編號(hào)清晰、樣本固定效果變佳、切片中氣泡、刀痕等不明顯或不存在，顯微鏡觀察效果好。有效控制免疫組化病理技術(shù)制片需要管理層和檢查人員共同執(zhí)行才能發(fā)揮出巨大效力，本次研究中的質(zhì)量控制以具體操作方法呈現(xiàn)，簡(jiǎn)明扼要的規(guī)范了免疫組化病理技術(shù)制片流程，讓樣本提取、試劑處理等操作都更直觀，制片中的失誤點(diǎn)被規(guī)避[5]。控制好免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量從操作角度保障了檢查人員對(duì)樣本提取、檢驗(yàn)需求的分析、解決能力，加強(qiáng)檢查人員對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片的要求，減少制片中的問(wèn)題。像病變組織壞死、變形；樣本組織位置描述等在質(zhì)量控制后較少出現(xiàn)。檢查人員在接收到樣本后能對(duì)相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行思考，直接將其制作成切片，縮短樣本到保存的時(shí)間，樣本活性、形狀等得到良好保存，減少環(huán)境因素對(duì)樣本的影響，降低樣本污染率[6]。質(zhì)量控制對(duì)樣本切片問(wèn)題也進(jìn)行了改善，將組織樣本提取后脫蠟處理制作成切片，保障了組織樣本的活性，且通過(guò)雙氧水浸泡等處理，樣本保存時(shí)間更長(zhǎng)，而且能在切片中有效固定，后續(xù)染色、觀察等質(zhì)量更佳[7]。如果按照傳統(tǒng)方法制片，固定環(huán)節(jié)需要8 ～24 h，樣本在固定液中的活性、分解、抵抗等會(huì)發(fā)生變化，像組織樣本中的蛋白質(zhì)，會(huì)在組織液中進(jìn)行分解等，釋放二氧化碳、水、尿素等，在后續(xù)處理中會(huì)增加切片中的氣泡、水分等，樣本組織性狀、形態(tài)也容易與提取時(shí)不同，這樣完成的制片會(huì)出現(xiàn)較大誤差，臨床無(wú)法結(jié)合其他檢查結(jié)果對(duì)患者病情進(jìn)行判斷，用藥準(zhǔn)確性受到影響[8]。質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片中的抗體、試劑等使用進(jìn)行規(guī)范，控制好使用種類(lèi)、時(shí)間、次數(shù)等，減少試劑過(guò)多停留對(duì)切片的影響，讓染色順利進(jìn)行。質(zhì)量控制較好的規(guī)避了免疫組化病理技術(shù)制片對(duì)溫度的要求，讓切片制作盡可能在常溫下完成，減少切片出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況[9]。切片孵育良好，能避免染色劑對(duì)切片的污染，提高染色質(zhì)量。在顯微鏡觀察中切片中的抗體會(huì)清晰顯示，檢查結(jié)果能根據(jù)抗體標(biāo)記找到對(duì)應(yīng)抗原，檢查質(zhì)量變高[10]。質(zhì)量控制后免疫組化病理技術(shù)制片變得清晰明了，從樣本提取到完成封固都有詳細(xì)的步驟，檢查人員可按照規(guī)范進(jìn)行操作，加快制片效率，減少樣本提取到制片完成后的時(shí)間，盡可能在一天內(nèi)完成制片和后續(xù)檢測(cè)。質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片提供質(zhì)量保障，從樣本提取、脫蠟、抗體處理、孵育、沖洗等多個(gè)方面保障樣本在切片中的良好性，縮短制片時(shí)間，降低誤差率[11]。質(zhì)量控制后影響免疫組化病理技術(shù)制片的因素變少，制片質(zhì)量受到更好的保護(hù)，檢查效率變高，免疫組化病理技術(shù)制片為臨床檢查、診斷可提供更多支持，減少反復(fù)制片、檢測(cè)率。質(zhì)量控制后免疫組化病理技術(shù)制片良好率不斷上升，提高制片有效性[12-13]。經(jīng)過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，控制后，參照組制片良好率較低；觀察組相關(guān)情況更好，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明質(zhì)量控制加強(qiáng)對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片的要求具有深遠(yuǎn)意義，在保障制片質(zhì)量的前提下提高制片效率。

綜上所述，質(zhì)量控制可提高免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量，提高制片良好率，縮小誤差率。