黎偉華，金學(xué)琴，吳 璟

（寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，寧夏 銀川 750004）

腎結(jié)石（renal calculi）是由一些晶體物質(zhì)（如鈣、草酸、尿酸、胱氨酸等）和有機(jī)基質(zhì)（如基質(zhì)A、酸性黏多糖等）在腎臟異常聚積所致，是泌尿系統(tǒng)的常見(jiàn)病和多發(fā)?。?-2］。 近年來(lái)我國(guó)腎結(jié)石的發(fā)病率居高不下（南方24%左右，北方14%左右），且復(fù)發(fā)率極高［3］。 該病男性較女性易發(fā)，且易發(fā)生于青壯年［4］，主要表現(xiàn)為腰腹部絞痛、腹脹、惡心、嘔吐、血尿等癥狀，目前臨床多用手術(shù)和體外碎石的方法治療，損傷較大，尤其對(duì)腎損傷嚴(yán)重，且有復(fù)發(fā)的可能，治療效果不理想。中醫(yī)認(rèn)為，腎結(jié)石為腎虛氣化失司，濕熱煎熬成石，結(jié)石阻塞尿路，氣機(jī)升降紊亂，氣滯不通，水道不行，則腎盂積水，故腰腹部絞痛，甚至隨沖氣上逆犯胃而惡心嘔吐［5-7］。

結(jié)石通片主要由廣金錢草、石韋、雞骨草等中藥材組成， 為臨床較常用的中成藥， 具有清熱利尿、通淋排石、鎮(zhèn)痛止血之效［8-10］。 目前對(duì)結(jié)石通片急性毒性的評(píng)價(jià)及其對(duì)乙二酰胺致大鼠腎結(jié)石的調(diào)節(jié)作用鮮有報(bào)道。 該試驗(yàn)通過(guò)研究結(jié)石通片對(duì)小鼠的急性毒性作用、 大鼠利尿作用及其對(duì)乙二酰胺致大鼠腎結(jié)石的影響， 了解其對(duì)腎結(jié)石發(fā)揮的作用， 為臨床進(jìn)一步對(duì)結(jié)石通片利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

結(jié)石通片 （廣東恒誠(chéng)制藥有限公司， 批號(hào)：1503105；規(guī)格：0.264 g/片，2 g 原藥材/片）；乙二酰胺 （廣州市弘順化工科技有限公司， 批號(hào)：HS001787）；生理鹽水。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)ICR 小鼠（18～22 g）40 只，SD 大鼠78只，雌、雄各半，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)［SCXK 2015-0001］。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飼養(yǎng)于屏障環(huán)境內(nèi)［SYXK（寧）2015-0001］，自由進(jìn)食飲水。

1.3 方法

1.3.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)［11-13］經(jīng)預(yù)試驗(yàn)證明，結(jié)石通片幾乎無(wú)毒，無(wú)法進(jìn)行半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定試驗(yàn)， 故采用最大耐受量試驗(yàn)方法測(cè)定該樣品的毒性。 取健康ICR 小鼠40 只，分為給藥組和對(duì)照組（生理鹽水組），每組20 只，雌、雄各半，體重為（20.3±1.41）g，禁食16 h，將結(jié)石通片配制成溶液，15 h 內(nèi)連續(xù)灌胃給藥5 次， 共計(jì)給予該藥21.4 g/（kg·BW），對(duì)照組給予等量生理鹽水，連續(xù)觀察7 d，記錄體重變化并觀察動(dòng)物有無(wú)死亡。 第8 天將動(dòng)物解剖后肉眼觀察動(dòng)物臟器有無(wú)明顯的病理改變。

1.3.2 對(duì)大鼠利尿作用的影響取SD 大鼠36只，雌、雄各半，體重為（247.7±17.4）g，隨機(jī)分為3組，分別為對(duì)照組、低劑量和高劑量（給予5%和10%結(jié)石通片溶液）組，放入代謝籠2 d 后開(kāi)始試驗(yàn)。試驗(yàn)前對(duì)大鼠以1.5 mL/（100 g·BW）生理鹽水灌胃， 記錄此后24 h 的排尿量； 給藥組分別以5%、10%結(jié)石通片溶液給大鼠灌胃1.5 mL/（100 g·BW）， 對(duì)照組仍以生理鹽水灌胃1.5 mL/（100 g·BW），記錄給藥后24 h 的排尿量。

1.3.3 對(duì)乙二酰胺致大鼠腎結(jié)石的影響取雄性SD 大鼠42 只，體重為（212.5±19.2）g，分為對(duì)照組、低劑量組和高劑量組，每組14 只。 3 組均飼喂摻入2%乙二酰胺的常規(guī)飼料，低、高劑量組分別將5%、10%結(jié)石通片溶液給大鼠灌胃1.5 mL/（100 g·BW·d），連續(xù)給藥5 d，第6 天將大鼠稱重后處死，取出腎臟稱重后剖開(kāi)，用解剖顯微鏡觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)小鼠體重變化情況

給藥后小鼠沒(méi)有不適表現(xiàn)， 通過(guò)連續(xù)7 d 觀察，給藥組小鼠排泄、飲食、飲水均表現(xiàn)正常，沒(méi)有異常情況出現(xiàn)，與對(duì)照組比較，體重?zé)o顯著（P＞0.05）差異，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)大鼠利尿作用的影響

由表2 可見(jiàn)， 以5%、10%結(jié)石通片溶液給大鼠灌胃［1.5 mL/（100 g·BW）］后，低劑量組和高劑量組大鼠24 h 排尿量明顯增加， 與給藥前比較，差異極顯著（P＜0.01）；并且24 h 排尿量隨著給藥劑量的加大而增加，低、高劑量組給藥前后的尿量差值與對(duì)照組相比，差異極顯著（P＜0.01）。 對(duì)照組24 h 排尿量無(wú)明顯的變化（P＞0.05）。

表1 結(jié)石通片給藥前后小鼠體重變化情況分析（±S） 單位：g

表1 結(jié)石通片給藥前后小鼠體重變化情況分析（±S） 單位：g

注：與對(duì)照組相比，無(wú)*標(biāo)注表示差異不顯著（P＞0.05）。

時(shí)間給藥前第3 天第4 天第5 天第6 天第7 天對(duì)照組（n=20）給藥組（n=20）雌雄雌雄19.44±0.62 21.54±0.65 22.95±0.58 23.82±0.53 24.64±0.52 25.43±0.51 20.65±1.13 22.39±1.12 23.60±1.04 24.45±1.04 25.21±1.03 26.04±1.03 19.62±0.54 21.61±0.50 22.99±0.50 23.74±0.47 24.31±0.47 24.94±0.50 20.43±0.80 22.67±0.88 23.69±0.75 24.39±0.69 24.99±0.70 25.63±0.71

表2 結(jié)石通片對(duì)大鼠利尿作用的影響（±S）

表2 結(jié)石通片對(duì)大鼠利尿作用的影響（±S）

注：與給藥前排尿量相比，標(biāo)注*表示差異極顯著（P＜0.01），無(wú)*標(biāo)注表示差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，標(biāo)注**表示差異極顯著（P＜0.01）。

組別低劑量組高劑量組對(duì)照組動(dòng)物數(shù)/只12 12 12劑量/（mg/kg）75 150-24 h 排尿量/mL給藥后10.30±0.73*14.90±0.91*8.17±0.61給藥前7.67±0.54 8.23±0.67 7.95±0.58差值/mL 2.63±0.32**6.67±0.41**0.22±0.18

2.3 對(duì)乙二酰胺致大鼠腎結(jié)石的影響

試驗(yàn)的第6 天將大鼠稱重后處死， 取出腎臟稱重后剖開(kāi)， 用解剖顯微鏡觀察可見(jiàn)對(duì)照組的腎臟內(nèi)有大量的泥沙樣結(jié)晶，呈米黃色，主要分布在腎髓質(zhì)，在腎盂、腎盞、腎乳頭處可見(jiàn)大量游離的結(jié)石。 兩個(gè)結(jié)石通片給藥組的腎臟內(nèi)有少量的米黃色結(jié)晶， 個(gè)別有少量的小結(jié)石， 隨著劑量的增加，結(jié)晶和結(jié)石的數(shù)量明顯減少。 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩個(gè)結(jié)石通片給藥組的形成結(jié)石動(dòng)物數(shù)量與對(duì)照組相比在P＜0.01 或P＜0.001 水平上有極顯著差異（見(jiàn)表3）。

3 討論

目前腎結(jié)石的發(fā)病率較高， 發(fā)病急， 疼痛劇烈，嚴(yán)重影響生活［14］。臨床治療的方法多采用體外沖擊波碎石，該方法對(duì)小結(jié)石效果明顯，而無(wú)法使過(guò)大結(jié)石或位置不理想的結(jié)石排出， 且治療時(shí)間長(zhǎng)，取凈率低，復(fù)發(fā)率高［15-17］。結(jié)石通片為收錄于衛(wèi)計(jì)委藥品標(biāo)準(zhǔn)的成方制劑，是由廣金錢草、石韋、茯苓、車前草、海金沙等制成的一種中成藥，可用于治療泌尿系統(tǒng)感染、膀胱炎、腎炎水腫、尿路結(jié)石、血尿、淋漓混濁、尿道灼痛等癥［18-20］。 近年來(lái)關(guān)于結(jié)石通片的研究主要集中在成方分析和質(zhì)量控制等方面，對(duì)其急性毒性、利尿作用和腎結(jié)石的調(diào)節(jié)作用報(bào)道較少。 該研究通過(guò)結(jié)石通片急性毒性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 小鼠對(duì)結(jié)石通片的最大耐受量大于21.4 g/（kg·BW），根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)石通片實(shí)際無(wú)毒。 通過(guò)結(jié)石通片對(duì)大鼠利尿作用的研究發(fā)現(xiàn)， 與對(duì)照組比較， 隨著結(jié)石通片給藥劑量的增加，大鼠的排尿量顯著增加。 同時(shí)，結(jié)石通片對(duì)乙二酰胺誘導(dǎo)的大鼠腎結(jié)石具有明顯抑制作用，與對(duì)照組比較，大鼠結(jié)石形成率明顯降低，腎重比明顯降低，且隨劑量的增加，效果更好。 該試驗(yàn)對(duì)結(jié)石通片急性毒性的研究結(jié)果， 為臨床用藥劑量的選擇提供了參考。研究結(jié)果提示，結(jié)石通片對(duì)大鼠的利尿作用較佳，且對(duì)腎結(jié)石的抑制作用明顯，為臨床開(kāi)發(fā)中藥制劑治療腎結(jié)石提供了依據(jù)。

表3 結(jié)石通片對(duì)大鼠乙二酰胺致腎結(jié)石的影響（±S）

表3 結(jié)石通片對(duì)大鼠乙二酰胺致腎結(jié)石的影響（±S）

注：與對(duì)照組相比，標(biāo)注*表示在P＜0.01 水平差異極顯著；標(biāo)注**表示在P＜0.001 水平差異極顯著。

組別低劑量組高劑量組對(duì)照組動(dòng)物數(shù)/只14 14 14劑量/（mg/kg）75 150-體重/g 234.0±29.4*243.1±23.4*192.8±20.5腎重/g 1.49±0.25 1.19±0.19 1.58±0.25腎重比/（g/kg）6.32±0.52*4.93±0.58*8.18±1.14形成結(jié)石動(dòng)物數(shù)/只6*3**13