張仕雙 李彬彬 傅波
(四川大學(xué)機(jī)械工程學(xué)院 成都 610065)
受化石能源的不可再生性、日益減少的存儲(chǔ)量以及對(duì)環(huán)境的污染等影響,可再生能源引起世界各國的廣泛關(guān)注[1]。生物質(zhì)能源是人類應(yīng)對(duì)能源危機(jī)和環(huán)境惡化時(shí)提出的解決方案之一。其中生物柴油是將生物體內(nèi)的油脂經(jīng)酯交換反應(yīng)而形成以脂肪酸甲酯為主要成分的一種生物質(zhì)液體燃料,是近年來生物質(zhì)能源研究的熱點(diǎn)。在制備生物柴油的眾多原料中,微藻憑借油脂含量高、生長速度快、培養(yǎng)不占用耕地等優(yōu)點(diǎn)被認(rèn)為是生物質(zhì)能源的重要原料[2?3]。
在微藻的能源轉(zhuǎn)化過程中,將微藻植物油經(jīng)酯交換反應(yīng)制得生物柴油的技術(shù)已經(jīng)成熟;但是,由于微藻細(xì)胞壁比較堅(jiān)固,微藻中油脂的提取仍然面臨巨大的挑戰(zhàn)[4]。超聲波破碎法是一種有效的細(xì)胞破碎方法,廣泛應(yīng)用于油脂浸取、多糖提取以及天然藥物活性成分提取[5]。郭孝武等[6]介紹了利用超聲提取分離技術(shù)在蘋果、紅花、橘皮、小球藻等植物中提取油脂的應(yīng)用以及相關(guān)工藝參數(shù)。Araujo等[7]設(shè)置不同實(shí)驗(yàn)組,研究超聲對(duì)微藻油脂提取的影響,結(jié)果表明超聲波處理能有助于細(xì)胞壁破碎,提高了提取效率。Santos等[8]通過實(shí)驗(yàn)對(duì)幾種小球藻油脂的提取方法進(jìn)行比較,結(jié)果表明在超聲波輔助作用下,利用有機(jī)溶劑氯仿:甲醇(2:1)的混合物作為溶劑是從微藻類中提取脂類物質(zhì)最有效的方法。Ellison等[9]介紹了一種對(duì)微藻類進(jìn)行處理的新技術(shù)路線,研究了超聲功率和處理時(shí)間對(duì)微藻油脂提取的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲功率越高,處理時(shí)間越長,細(xì)胞破碎越徹底,油脂產(chǎn)量越高。岳敏等[10]研究了超聲功率、超聲處理溫度以及時(shí)間等因素對(duì)細(xì)胞破壁率的影響,得出一組優(yōu)化的超聲破壁參數(shù)。
現(xiàn)有研究主要是采用固定的超聲設(shè)備進(jìn)行實(shí)驗(yàn),研究超聲電功率、時(shí)間以及萃取試劑等因素對(duì)提取率的影響,而對(duì)超聲輔助提取微藻油脂的機(jī)理、超聲振動(dòng)子的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)以及超聲頻率、超聲振動(dòng)子工具頭浸入溶液深度等工藝參數(shù)如何影響微藻細(xì)胞破碎率等方面較少涉及。本文分析了超聲波對(duì)微藻細(xì)胞的作用機(jī)理,建立了基于聲沖流、聲輻射力、聲空化的傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)的經(jīng)驗(yàn)?zāi)P?,設(shè)計(jì)了幾種常見縱振頻率的超聲振動(dòng)子,研究超聲頻率、超聲電功率、工具頭浸入溶液深度、超聲處理時(shí)間、萃取試劑等因素對(duì)微藻細(xì)胞破碎率的影響,獲取超聲提取微藻油脂的最佳工藝參數(shù)。
超聲振動(dòng)子將電能轉(zhuǎn)變?yōu)槌曊駝?dòng),在溶液中形成聲沖流、聲輻射力以及聲空化效應(yīng)[11]。聲空化效應(yīng)形成的空化泡在振蕩或破裂的過程中會(huì)在局部產(chǎn)生瞬時(shí)的高溫、高壓,同時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈沖擊波和剪切力,對(duì)周圍的細(xì)胞有沖擊撕裂的效果,破壞生物細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,有利于細(xì)胞內(nèi)容物釋放到提取液中[12]。高頻振動(dòng)產(chǎn)生的聲沖流與聲輻射力在提取液中產(chǎn)生的沖流、渦流以及湍流促進(jìn)微藻細(xì)胞與溶劑形成對(duì)流,具有攪拌作用,加快提取進(jìn)程。
微藻油脂的物理提取是有效成分從固相向液相傳遞的動(dòng)力學(xué)過程,其實(shí)質(zhì)是傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)理論。Fick第一定律表達(dá)式為
式(1)中,D表示擴(kuò)散系數(shù),S表示擴(kuò)散面的面積,c表示擴(kuò)散物質(zhì)的體積濃度,dc/dx表示溶質(zhì)濃度梯度,“?”號(hào)表示擴(kuò)散方向與濃度梯度的方向相反,dn/dt表示溶質(zhì)擴(kuò)散速率。
微藻細(xì)胞中溶質(zhì)的濃度隨著時(shí)間的增加而不斷下降的同時(shí),擴(kuò)散邊界層的濃度也隨時(shí)間減小,其變化曲線可用冪函數(shù)表示:
在超聲振動(dòng)提取時(shí),擴(kuò)散系數(shù)D由兩種擴(kuò)散系數(shù)組成,分別為分子擴(kuò)散系數(shù)DM和渦流擴(kuò)散系數(shù)DE[13]:
其中,
式(4)中,K表示影響系數(shù),E表示擴(kuò)散活化能,R表示普適氣體常量,T表示溫度,q表示濃度的參數(shù)。
考慮到聲空化、聲沖流、聲輻射力所產(chǎn)生的微射流、渦流以及湍流現(xiàn)象,對(duì)渦流擴(kuò)散系數(shù)DE進(jìn)行定義:
式(5)中,vs表示由聲沖流引起的渦流速度,vf表示由聲輻射引起的振動(dòng)速度,vc表示聲空化引起的射流速度;k1、k2、k3、k4分別表示聲沖流系數(shù)、聲輻射振動(dòng)系數(shù)、聲空化系數(shù)以及各因素之間的相互影響系數(shù)。
將式(4)、式(5)帶入式(3)可得
超聲作用于溶液,溶液中物質(zhì)破碎產(chǎn)生的附加表面積能提高傳質(zhì)率[14]。超聲振動(dòng)將細(xì)胞壁破碎,增大細(xì)胞中的溶質(zhì)與溶液的接觸面積,根據(jù)文獻(xiàn)[15]研究結(jié)果對(duì)擴(kuò)散面的面積S進(jìn)行修正:
式(7)中,S0表示超聲作用前的擴(kuò)散面積,t表示時(shí)間,μ表示與微藻顆粒形狀相關(guān)的系數(shù),P表示超聲功率。
微藻細(xì)胞的總數(shù)為ω,其顆粒線度為σ,總質(zhì)量為G,其密度為ρ,可得
其中,k、k′是與細(xì)胞形狀和線度有關(guān)的常數(shù),化簡后得
式(11)中,Y表示細(xì)胞吸收溶劑的速率,對(duì)于特定的細(xì)胞Y是一定值。
將式(2)、式(6)、式(7)、式(8)、式(11)、式(12)代入式(1),結(jié)合邊界條件:在t=0時(shí),c=0;在t≠時(shí),n=Vc,n表示溶質(zhì)物質(zhì)的量,V表示溶液體積。進(jìn)行積分化簡得到超聲微藻油脂提取的傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)方程:
以上方程表明,擴(kuò)散物質(zhì)的體積濃度受超聲電功率、作用時(shí)間等工藝參數(shù)的影響,為了提高微藻細(xì)胞的破碎率及油脂的提取率,需選取恰當(dāng)?shù)某曒o助工藝參數(shù)。
超聲振動(dòng)子主要由換能器、變幅桿和工具頭組成,結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示。在工作區(qū)內(nèi)要破壞微藻細(xì)胞壁,縱向振動(dòng)的振幅應(yīng)不低于25μm,換能器的縱振頻率應(yīng)在20 kHz以上[16]。因此,本文設(shè)計(jì)常見的共振頻率20 kHz、25 kHz、28 kHz振動(dòng)子。
圖1 超聲振動(dòng)子結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Schematic diagram of ultrasonic vibrator structure
傳輸矩陣法作為一種壓電超聲振動(dòng)子的設(shè)計(jì)建模方法,因其簡明有效的特性被許多研究采用[17]。將超聲振動(dòng)子等效成多個(gè)單一截面桿的串聯(lián),對(duì)各個(gè)單一截面桿建立四端網(wǎng)絡(luò),得到若干個(gè)傳輸矩陣,忽略機(jī)械損耗及預(yù)應(yīng)力螺栓的影響,最后再將所有的四端網(wǎng)絡(luò)串聯(lián)起來,即可得到超聲振動(dòng)子整體的傳輸矩陣方程[18?19]:
根據(jù)邊界條件以及上述的傳輸矩陣方程,計(jì)算出振動(dòng)子各段的尺寸。用有限元分析軟件對(duì)振動(dòng)子的各段進(jìn)行模態(tài)分析及優(yōu)化,優(yōu)化后的28 kHz超聲振動(dòng)子實(shí)物圖如圖2所示。
圖2 28 kHz超聲振動(dòng)子實(shí)物圖Fig.2 Physical map of 28 kHz ultrasonic vibrator
在超聲破碎實(shí)驗(yàn)中,利用坐標(biāo)支架來固定超聲振動(dòng)子,通過電機(jī)與絲杠可以實(shí)現(xiàn)超聲振動(dòng)子的垂直與水平方向的移動(dòng)。利用超聲電源和PC機(jī)調(diào)節(jié)超聲破碎時(shí)的電功率和頻率。圖3為搭建好的超聲破碎實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
圖3 超聲破碎系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)Fig.3 Experimental platform of ultrasonic crushing system
實(shí)驗(yàn)儀器主要包括WG-1000W型超聲電源、PC機(jī)、超聲振動(dòng)子(諧振頻率分別為20 kHz、25 kHz、28 kHz)、PV80A阻抗分析儀、坐標(biāo)軸移動(dòng)平臺(tái)、BMC500系列生物顯微鏡、FA2004型電子天平、TD5A型離心機(jī)、燒杯(規(guī)格500 mL、杯身直徑90 mm)。
實(shí)驗(yàn)材料與試劑主要有干燥的剛毛藻顆粒與扁藻顆粒、正己烷試劑、無水乙醚/石油醚(1:2)混合溶劑、氯仿試劑、蒸餾水。
利用超聲破碎實(shí)驗(yàn)平臺(tái),研究超聲振動(dòng)的頻率、電功率、超聲處理時(shí)間以及振動(dòng)子工具頭浸入溶液的深度等工藝參數(shù)對(duì)微藻細(xì)胞破碎率的影響。采用阻抗分析儀分別測量振子在空氣負(fù)載和水負(fù)載下的導(dǎo)納圓直徑,根據(jù)電聲效率計(jì)算公式(16)計(jì)算,得到28 kHz超聲振動(dòng)子的電聲效率為73.4%。
其中,Dw為水負(fù)載時(shí)導(dǎo)納圓的直徑,Da為空氣負(fù)載時(shí)導(dǎo)納圓的直徑,G0為水負(fù)載時(shí)諧振頻率下的電導(dǎo)[20]。
為了評(píng)價(jià)細(xì)胞破碎率,用膠頭滴管、量筒量取1 mL處理前的微藻溶液,通過高倍電子顯微鏡與血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)微藻溶液中微藻細(xì)胞的個(gè)數(shù)。再按照實(shí)驗(yàn)方法用滴管吸取超聲破碎后的溶液,在顯微鏡下觀察統(tǒng)計(jì)未被破碎的細(xì)胞個(gè)數(shù)。為提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度,多次統(tǒng)計(jì)求取平均值,計(jì)算出細(xì)胞的破碎率,計(jì)算公式為
式(17)中,ψ表示細(xì)胞破碎率,Ni表示超聲處理前計(jì)算細(xì)胞數(shù)目,Nj表示超聲處理后計(jì)算細(xì)胞數(shù)目的平均值,在本實(shí)驗(yàn)中n=5,表示統(tǒng)計(jì)次數(shù)為5。
3.2.1 處理時(shí)間與超聲電功率對(duì)細(xì)胞破碎率的影響
設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,超聲電功率分別設(shè)置為75 W、150 W、225 W、300 W。用電子天平稱取25 g剛毛藻放入燒杯中,加入160 mL蒸餾水,微藻溶液的總深度為55 mm,工具頭浸入溶液的深度是25 mm,采用縱振頻率為28 kHz的振動(dòng)子進(jìn)行破碎實(shí)驗(yàn),每隔5 min采集一次數(shù)據(jù)。
3.2.2 振動(dòng)子頻率對(duì)細(xì)胞破碎率的影響
設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組,縱振頻率分別為20 kHz、25 kHz、28 kHz的超聲振動(dòng)子,用電子天平稱取25 g剛毛藻放入燒杯中,加入160 mL蒸餾水,微藻溶液的總深度為55 mm,振動(dòng)子浸入燒杯的深度為30 mm,超聲電功率設(shè)置為225 W,每隔10 min采集一次數(shù)據(jù)。
3.2.3 工具頭浸入溶液的深度對(duì)細(xì)胞破碎率的影響
設(shè)置8個(gè)實(shí)驗(yàn)組,利用PC機(jī)控制坐標(biāo)平臺(tái)的z軸上下移動(dòng)從而改變工具頭浸入溶液深度,浸入深度值分別為5 mm、10 mm、15 mm、20 mm、25 mm、30 mm、35 mm、40 mm。用電子天平稱取25 g剛毛藻放入燒杯中,加入160 mL蒸餾水,超聲振動(dòng)子的工作頻率為28 kHz,超聲電功率設(shè)置為225 W,微藻溶液的總體深度是55 mm,每個(gè)浸入深度值超聲處理時(shí)間為10 min,每隔5 min采集一次數(shù)據(jù)。
3.2.4 不同試劑萃取油脂效果的比較
用電子天平稱取25 g剛毛藻加入160 mL的蒸餾水,采取前述獲得的超聲振動(dòng)工藝參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞破碎處理。破碎結(jié)束后用吸管取出3份樣品,每份樣品15 mL,放入離心管中。在樣品1中加入15 mL的甲醇和15 mL三氯甲烷,在樣品2中加入30 mL無水乙醚/石油醚(1:2)的混合溶劑,在樣品3中加入30 mL的正己烷。提取期間至少搖4次,提取時(shí)間為1 h,充分靜置。用離心機(jī)以4500 r/min的轉(zhuǎn)速離心樣品溶液5 min,用注射器取出樣品1下層溶液,樣品2、樣品3的上層溶液。對(duì)3份樣品重復(fù)上述步驟,使油脂充分得到提取。合并取出的溶液,將溶液放入帶蓋試管中進(jìn)行水浴加熱,得到粗油脂。
3.2.5 兩種常見微藻的油脂含量測定
剛毛藻和扁藻是兩種常見的微藻,在高倍顯微鏡下面這兩種微藻的細(xì)胞形狀如圖4所示。
圖4 微藻細(xì)胞Fig.4 Microalgae cells
各取10 g剛毛藻與扁藻,加入160 mL的蒸餾水,在縱振頻率25 kHz、電功率225 W條件下,超聲破碎處理25 min。用吸管各吸取16 mL微藻破碎溶液,加入16 mL甲醇混合均勻,再加入16 mL三氯甲烷混勻,進(jìn)行萃取,其間至少搖勻4次,萃取時(shí)間為1 h。離心5 min,用注射器取出下層液體,再在上層液體中加入16 mL三氯甲烷混勻進(jìn)行萃取1 h,離心5 min,用注射器取出下層溶液,重復(fù)上述步驟,使充分提取。合并下層液體,置于稱量皿中,通風(fēng)廚過濾去除三氯甲烷,放置24 h。
超聲電功率分別設(shè)置為75 W、150 W、225 W、300 W的實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表1所示。為了更直觀地觀察到超聲電功率與超聲處理時(shí)間對(duì)剛毛藻破碎率的影響,繪制折線圖,如圖5所示。
表1 不同超聲電功率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Table 1 Experimental data of different ultrasonic electrical power
根據(jù)表1和圖5可以觀察到,超聲電功率為75 W的實(shí)驗(yàn)組在前20 min時(shí)間內(nèi),細(xì)胞破碎效果不明顯,破碎率不足40%,相同的條件下,超聲電功率分別為150 W、225 W、300 W的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞破碎率超過80%。說明75 W的超聲電功率過低,超聲振動(dòng)子在提取溶液中所產(chǎn)生的超聲波強(qiáng)度低,聲空化效應(yīng)微弱,所產(chǎn)生的空化泡數(shù)量少,空化泡破裂所產(chǎn)生的沖擊波與剪切力,不能快速對(duì)剛毛藻細(xì)胞壁造成損傷。超聲電功率分別為150 W、225 W、300 W的實(shí)驗(yàn)組在超聲處理25 min時(shí)間內(nèi),隨著處理時(shí)間增加,剛毛藻細(xì)胞破碎率增長迅速,均達(dá)到90%,但增加的趨勢到25 min以后比較平緩,實(shí)驗(yàn)組之間差距不明顯。原因是超聲波強(qiáng)度增加到一定值,空化趨于飽和。通過生物顯微鏡觀察到超聲功率設(shè)置為225 W的實(shí)驗(yàn)組在處理時(shí)間分別為0 min、6 min、12 min、18 min時(shí)剛毛藻細(xì)胞的形狀如圖6所示??梢杂^察到在未對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí),剛毛藻細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞壁厚實(shí),細(xì)胞內(nèi)容物清晰可見。隨著處理時(shí)間的增加,剛毛藻細(xì)胞排列混亂,細(xì)胞內(nèi)容物逐漸減少,完整的剛毛藻細(xì)胞越來越少??紤]到超聲振動(dòng)子的功耗因素,較為合理的超聲電功率為225 W,處理時(shí)間為25 min。
圖5 細(xì)胞破碎率與超聲電功率、時(shí)間的關(guān)系Fig.5 Relationship between cell disruption rate and ultrasonic electrical power and time
圖6 不同處理時(shí)間的細(xì)胞形狀Fig.6 Cell shape at different treatment times
超聲頻率分別為20 kHz、25 kHz、28 kHz的實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表2所示。為了更為清晰直觀地觀察到超聲頻率與剛毛藻破碎率的關(guān)系,繪制折線圖,如圖7所示。
表2 不同超聲頻率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Table 2 Experimental data of different ultrasonic frequencies
由圖7可以觀察到,在相同的條件下,剛毛藻細(xì)胞破碎率隨著超聲振動(dòng)子的縱振頻率的增大而增大,縱振頻率為20 kHz時(shí),細(xì)胞破碎效率較低。說明超聲頻率越高,所產(chǎn)生的聲輻射力越大,引起的振動(dòng)速度越大,對(duì)細(xì)胞壁的破壞更加劇烈。頻率增大到一定值時(shí),破碎率隨著縱振頻率的增加而增加得比較緩慢。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,在相同實(shí)驗(yàn)條件下,28 kHz與25 kHz時(shí)的細(xì)胞破碎率相差不大,并且隨著超聲頻率的提高,產(chǎn)生空化效應(yīng)的閾值也就越高,產(chǎn)生空化效應(yīng)所需電功率就越大。根據(jù)超聲輔助提取微藻油脂理論分析,相比于高頻振動(dòng)產(chǎn)生的聲沖流以及聲輻射作用,更希望獲得更好的聲空化效應(yīng)。因此,縱振頻率選為25 kHz較為合適。
圖7 細(xì)胞破碎率與超聲頻率的關(guān)系Fig.7 Relationship between cell breakage rate and ultrasonic frequency
工具頭浸入溶液中不同深度與剛毛藻細(xì)胞破碎率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示,為了更為清晰直觀地觀察到浸入深度與剛毛藻破碎率的關(guān)系,繪制折線圖,如圖8所示。
圖8 細(xì)胞破碎率與浸入深度的關(guān)系Fig.8 Relationship between cell breakage rate and immersion depth
表3 不同深度下的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Table 3 Experimental data at different d ep ths
由圖8可以觀察到,在超聲振動(dòng)時(shí)間相同的情況下,剛毛藻細(xì)胞破碎率隨著浸入深度的增加呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢,在工具頭浸入剛毛藻溶液總深度的二分之一左右時(shí),細(xì)胞破碎率達(dá)到最大。原因是工具頭浸入溶液總深度的二分之一時(shí),聲壓分布較為均勻;而工具頭浸入微藻溶液較深時(shí),底部的壓強(qiáng)太大,超聲波產(chǎn)生的能量損耗比較大,對(duì)剛毛藻細(xì)胞壁的破壞作用遭到削弱。因此,超聲振動(dòng)子的工具頭浸入溶液的最佳深度應(yīng)為二分之一總深度。
3份樣品在添加萃取劑并充分融合靜置后如圖9所示。樣品1為氯仿試劑萃取效果,樣品2為無水乙醚/石油醚(1:2)的混合溶劑萃取效果,樣品3為正己烷試劑萃取效果。通過離心機(jī)以4500 r/min的轉(zhuǎn)速離心,并水浴加熱去除溶劑后,得到的粗油脂如圖10所示。
圖9 樣品溶液Fig.9 Sample solution
圖10 提取的油脂樣品Fig.10 Extracted oil sample
根據(jù)圖9與圖10可以觀察到,正己烷試劑萃取靜置分層不明顯,從提取到的粗油脂樣品量來分析,氯仿的萃取效果最好,無水乙醇-石油醚次之,正己烷的萃取效果最差。因此,選擇氯仿試劑作為提取微藻油脂的試劑。
獲得的剛毛藻以及扁藻的油脂如圖11所示,圖11(a)是從扁藻中提取的油脂,質(zhì)量為0.0674 g,其提取率為6.74%,圖11(b)是從剛毛藻中提取的油脂,質(zhì)量為0.0815 g,其提取率為8.15%??梢缘贸鰟偯宓挠椭恳缺庠宓挠椭扛?。
圖11 粗油脂F(xiàn)ig.11 Crude oil
本文闡述了超聲輔助提取微藻油脂的機(jī)理,從超聲振動(dòng)處理時(shí)間、超聲頻率、超聲電功率以及超聲振動(dòng)子的工具頭浸入溶液深度等因素分析了超聲波對(duì)微藻細(xì)胞破碎率的影響,獲得了超聲輔助提取微藻油脂的最佳工藝參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:對(duì)于所研究的微藻溶液,超聲振動(dòng)最佳工藝參數(shù)為縱振頻率25 kHz、電功率225 W、浸入溶液總深度的二分之一、超聲振動(dòng)處理25 min。在對(duì)破碎后的微藻溶液的萃取方法中,氯仿的萃取效果最好。對(duì)于常見的剛毛藻和扁藻,采用本文的超聲輔助提取方法進(jìn)行油脂提取,剛毛藻的油脂提取率更高。超聲波在微藻油脂提取過程中具有顯著的優(yōu)點(diǎn),如細(xì)胞破碎效率高、加工時(shí)間短、能耗低等。合理地利用超聲輔助油脂提取的最佳工藝參數(shù)對(duì)于利用微藻進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化制備生物柴油以及相關(guān)高效能源轉(zhuǎn)化裝備的設(shè)計(jì)具有指導(dǎo)意義。