李 丹吳海紅岳 玲馮秀麗呂春晶

(1.遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，遼寧 沈陽 110161； 2.遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧 營口 115009)

大花卷丹屬百合科百合屬植物，花下垂，花瓣呈桔紅色，反卷，有斑點。原產(chǎn)我國東北、華北、陜北地區(qū)，適應(yīng)性強，有很強的耐寒性和耐蔭性，在東北地區(qū)可露地越冬。可以直接用于園林景觀，也可作為盆花、切花的育種親本，鱗片亦可食用和藥用。近年來，由于人工采挖嚴(yán)重，大花卷丹資源遭到破壞，對大花卷丹進行高效的繁殖保護勢在必行，組織培養(yǎng)是有效快速的繁殖方法。本試驗以大花卷丹的鱗片作為外植體，對小鱗莖的誘導(dǎo)、增殖、生根以及移栽進行研究，找出適合各個生長階段的培養(yǎng)基配方，意在建立一套完整的大花卷丹組培快繁體系。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2018年7月采自遼寧省清原縣境內(nèi)的野生大花卷丹，選取健康的，無病蟲害的植株，以鱗莖作為試驗材料。

1.2 試驗方法

將鱗莖表面污垢用洗衣粉水清洗干凈，將鱗片剝下，放到流水下沖洗20～30 min，然后放入75%乙醇溶液中浸一下?lián)瞥?，用無菌水沖洗后濾紙吸干表面水分。將鱗莖切成1 cm見方的小塊，再放入0.1%的氯化汞溶液中消毒3～5 min，無菌水沖洗3～4遍，將鱗莖塊四周接觸氯化汞的邊緣各切掉0.2 cm左右，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。15～20 d以后將誘導(dǎo)出的不定芽切下，接種到增殖培養(yǎng)基中，30 d后待小鱗莖長到一定大小接種到生根培養(yǎng)基中，45 d左右練苗移栽。

1.3 培養(yǎng)基的選擇

1.3.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方

以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA(0.1、1.0 mg/L)和KT(0.1、1.0 mg/L)分別與NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)組合，添加蔗糖40 g/L，瓊脂5 g/L，pH調(diào)到5.8，將處理好的鱗莖塊接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種一塊。

1.3.2 增殖培養(yǎng)基配方

以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA(0.1、1.0 mg/L)和NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)組合，添加蔗糖40 g/L，瓊脂5 g/L，pH調(diào)到5.8，將誘導(dǎo)出的小鱗莖切下接種到增殖培養(yǎng)基中，每瓶接種2個。

1.3.3 生根培養(yǎng)基配方

以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加NAA(0.01、0.1、0.5 mg/L)，蔗糖30 g/L，將直徑長到1 cm左右的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基中，每瓶接種4個。

1.3.4 移栽

待百合鱗莖長到直徑2～3 cm，生有5～6條根時，即可進行移栽。移栽基質(zhì)選擇草炭、草炭∶蛭石1∶1、草炭∶河沙1∶1三種，15 d后統(tǒng)計成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇

將處理好的鱗莖塊接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，15 d以后鱗莖塊邊緣就會陸續(xù)有突起產(chǎn)生，KT與NAA組合的培養(yǎng)基上也會有不定芽產(chǎn)生，但有的鱗莖塊會形成較多的瘤狀突起物，6-BA與NAA組合的培養(yǎng)基易形成類似小鱗莖狀的不定芽，但高濃度激素組合的培養(yǎng)基長出的不定芽易發(fā)生玻璃化情況，所以適合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素組合是6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01～0.1 mg/L。

2.2 增殖培養(yǎng)基的選擇

將不定芽接種到6-BA與NAA組合的增殖培養(yǎng)基中，各種激素組合的培養(yǎng)基芽都會有增殖，但低濃度的6-BA增殖的系數(shù)較小，高濃度的激素導(dǎo)致不定芽產(chǎn)生畸形，不 利 于 增 殖，適 合 的 芽 增 殖 激 素 組 合 為

6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01 mg/L。

表 1 不同濃度6-BA、KT與NAA組合對誘導(dǎo)不定芽的影響

表 2 不同濃度6-BA與NAA組合對不定芽增殖的影響

2.3 生根培養(yǎng)基的選擇

部分小鱗莖在增殖的過程中會有少量的根長出，直接接種，7～15 d的時間就會有新的根系發(fā)出。以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加NAA濃度0.01～0.1 mg/L都可以有較高的生根率，當(dāng)NAA達到0.5 mg/L時，生根率下降，所以高濃度的NAA不合適生根。

表 3 不同濃度NAA對鱗莖生根的影響

2.4 移栽基質(zhì)的選擇

移栽前先將培養(yǎng)瓶瓶口擰松，在溫室內(nèi)放置1 d，進行練苗，而后移栽。將移栽基質(zhì)平鋪到栽培框中，每種基質(zhì)載50個鱗莖。15 d之后觀察出苗率。草炭的出苗率最低，草炭∶蛭石1∶1、草炭∶河沙1∶1出苗率差不多，均可作為栽培基質(zhì)。

表 4 不同栽培基質(zhì)對鱗莖成活率的影響

3 結(jié)論與討論

無論是大花卷丹不定芽誘導(dǎo)還是增殖，都需要低濃度的激素組合，不定芽的誘導(dǎo)適合的組合為6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01～0.1 mg/L。增殖的為6-BA 0.1 mg/L，NAA 0.01 mg/L。適合的生根培 養(yǎng) 基 為1/2MS，添 加NAA濃度0.01～0.1 mg/L。草炭∶蛭石1∶1或草炭∶河沙1∶1均可作為移栽基質(zhì)，在生產(chǎn)中考慮到成本問題，可考慮草炭∶河沙1∶1作為栽培基質(zhì)。鱗莖出苗后要注意加強病蟲害的防治。