王鳳軍 廖梅杰,3 王印庚 李 彬①秦 蕾 王治平 范瑞用 劉 毅
(1. 江蘇海洋大學(xué) 連云港 222005;2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071;3. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室 青島 266071;4. 青島瑞滋集團(tuán)有限公司 青島 266409)
發(fā)酵飼料技術(shù)是在2006 年歐盟全面禁止在畜禽飼料中添加抗生素后發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù),發(fā)酵飼料作為一種新型飼料,從制作過程和功能上有別于傳統(tǒng)飼料,經(jīng)過微生物發(fā)酵可降解飼料中的毒素,分解或轉(zhuǎn)化抗?fàn)I養(yǎng)因子,將大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì),使飼料更容易被動(dòng)物吸收利用(吳業(yè)陽等, 2018)。同時(shí),發(fā)酵飼料可以改善飼料的適口性、風(fēng)味,并產(chǎn)生促營養(yǎng)因子,改善飼料的營養(yǎng)組成、提高飼料營養(yǎng)價(jià)值;此外,發(fā)酵飼料中的微生物可以改善動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡,增強(qiáng)其免疫力。目前,發(fā)酵飼料已廣泛應(yīng)用到畜禽養(yǎng)殖(陶蕾等, 2015),在仔豬、泌乳奶牛和蛋雞的養(yǎng)殖應(yīng)用中都取得了良好的效果(胡新旭等,2013; 吳小燕等, 2014; 孫汝江等, 2012);在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖方面,發(fā)酵飼料在蝦、蟹、魚的養(yǎng)殖應(yīng)用中已有諸多報(bào)道,對提高養(yǎng)殖對象的飼料利用率和腸道健康有顯著效果(鐘小群等, 2018; 袁春營等, 2018; Refstie et al, 2005)。
刺參飼料以大型海藻粉為主要成分。目前,對刺參飼料的研究主要集中于飼料組成對刺參生長發(fā)育的影響(王曉艷等, 2019; 譚杰等, 2020),對刺參發(fā)酵飼料的研究尚處于探索階段。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),投喂發(fā)酵飼料可促進(jìn)刺參生長(姜燕, 2014; 李利華, 2013;王世英, 2015),而關(guān)于發(fā)酵飼料對刺參養(yǎng)殖效果的綜合性評價(jià)較少。本研究以刺參發(fā)酵飼料為切入點(diǎn),從刺參能量收支、生長、酶活性以及對養(yǎng)殖池水水質(zhì)影響等角度,綜合性探究刺參養(yǎng)殖過程中發(fā)酵飼料的應(yīng)用效果,以期為刺參養(yǎng)殖提供理論數(shù)據(jù)和參考。
本研究所用刺參來源于青島瑞滋集團(tuán)有限公司養(yǎng)殖場,選取生長良好、肉刺堅(jiān)挺、附著力強(qiáng)的健康苗種,苗種規(guī)格為(1.79±0.22) g/頭,在養(yǎng)殖車間內(nèi)暫養(yǎng)5 d 后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
本研究所用飼料來源于青島瑞滋集團(tuán)有限公司,未發(fā)酵飼料的組分比例為海帶(Laminaria j aponica)粉∶馬尾藻(Scagassum)粉∶扇貝邊粉=3∶6∶1。在未發(fā)酵飼料基礎(chǔ)上添加5%的葡萄糖和10%的布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri )發(fā)酵菌液,30℃恒溫發(fā)酵2 d 制成發(fā)酵飼料。飼料與海泥按1∶4的比例混合,加入適量海水?dāng)嚢杈鶆?,?jīng)過80目篩絹過濾后投喂。
本研究選取6 個(gè)容積為12 m3的刺參育苗池,育苗池中擺放波紋板附著基,每個(gè)育苗池投放刺參苗種30 kg。實(shí)驗(yàn)分為2 組,一組投喂未發(fā)酵飼料(未發(fā)酵飼料組,CG),一組投喂發(fā)酵飼料(發(fā)酵飼料組,F(xiàn)G),每組3 個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)周期為50 d,每日飼料投喂量為刺參體重的2%,根據(jù)攝食情況微調(diào)投喂量,每天投喂2 次,08:00 投喂其總量的40%,15:00 投喂其總量的60%。每天換水1/2,每7 d 倒池1 次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將實(shí)驗(yàn)刺參全部撈出,稱取刺參總重,并隨機(jī)取樣,計(jì)算刺參的平均體重,計(jì)算特定生長率(Specific growth rate, SGR);根據(jù)總重和平均體重計(jì)算總頭數(shù),進(jìn)而計(jì)算其存活率(Survival rate, SR)。
刺參SGR 和SR 計(jì)算公式如下:
SGR(%·d-1) = (lnWt-lnW0)/t×100%
SR(%) =(N0-Nt)/N0×100%
式中,W0、Wt分別表示實(shí)驗(yàn)刺參的初始體重和終末體重;t 表示養(yǎng)殖周期;N0、Nt分別表示實(shí)驗(yàn)刺參的初始個(gè)體數(shù)和終末個(gè)體數(shù)。
分別在實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)自6 個(gè)育苗池中隨機(jī)抽取10 頭刺參,用無菌注射器抽取體腔液。抽取體腔液后解剖刺參,用3%滅菌NaCl 溶液反復(fù)沖洗腸道,收集腸道。體腔液和腸道于-20℃冰箱內(nèi)保存,分別檢測刺參的非特異性免疫酶活性和消化酶活性。
選取酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)和溶菌酶(Lysozyme, LZM)4 個(gè)非特異性免疫酶指標(biāo),以及淀粉酶(Amylase, AMS)和胰蛋白酶(Trypsin) 2 個(gè)消化酶指標(biāo),利用酶活性檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測定,測定方法參照試劑盒說明書。
本研究選取1 個(gè)倒池周期(7 d),采集養(yǎng)殖池水樣,測定水體中的氨氮、亞硝酸鹽及pH 值。利用靛酚藍(lán)分光光度法測定水體中的氨氮,利用萘乙二胺分光光度法測定水體中的亞硝酸鹽,詳細(xì)操作方法參照國標(biāo)GB 17378.4,利用pH 計(jì)法測定水體的pH 值。
刺參能量收支測定實(shí)驗(yàn)在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)車間選取1 個(gè)空的養(yǎng)殖池,池內(nèi)放置6 個(gè)容量為40 L 的塑料水槽,每個(gè)水槽投放刺參苗種20 頭。實(shí)驗(yàn)分為2 組,一組投喂未發(fā)酵飼料,另一組投喂發(fā)酵飼料,每組設(shè)3 個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)周期為20 d,實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)分別稱重,計(jì)算刺參的增重率,并隨機(jī)采集10 頭刺參進(jìn)行能值測算。每日飼料投喂量為刺參體重的2%,每天投喂等量的未發(fā)酵飼料和發(fā)酵飼料,收集殘餌和糞便。
刺參飼料為粉末狀飼料,投喂后有溶失現(xiàn)象。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測算飼料溶失率后,換算得到攝食飼料總量(汪洋等, 2012)。
0 d 和20 d 時(shí),隨機(jī)采集10 頭刺參烘干,同時(shí)將收集到的所有糞便和殘餌烘干,用氧彈儀測定0 d和20 d 刺參、糞便和殘餌的能值。
刺參能量收支方程式:
C=G+F+U+R
式中,C 表示攝食能;G 表示生長能;F 表示排糞能;U 表示排泄能;R 表示代謝能。攝食能(C)的計(jì)算公式為:
C=C′×EC′
式中,C′表示實(shí)驗(yàn)中刺參消耗的飼料干重總量;EC′為飼料的能值(J/g)。
生長能(G)的計(jì)算公式為:
G=W1×E1-W0×E0
式中,W0、W1分別表示實(shí)驗(yàn)刺參的初始和終末干物質(zhì)重量;E0、E1分別表示實(shí)驗(yàn)刺參的初始能值和終末能值(J/g)。
排糞能(F)的計(jì)算公式為:
F=F′×EF′
式中,F(xiàn)′表示實(shí)驗(yàn)中刺參產(chǎn)生的糞便干重總量;EF′為糞便的能值(J/g)。
排泄能(U)的計(jì)算公式為:
U=(CN-FN-GN)×24830
式中,CN表示攝食氮(g);FN表示排糞氮(g);GN表示生長氮(g);24830 表示刺參排泄每克氨氮的能值為24830 J/g。
代謝能(R)的計(jì)算公式為:
R=C-G-F-U
利用SPSS 17.0 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析(One-way ANOVA),采用Tukey 檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較,以P<0.05 作為差異顯著水平。
由表1 可以看出,投喂發(fā)酵飼料苗種的SGR 為(1.83±0.01)%/d,略低于未發(fā)酵飼料組,但2 組間無顯著差異(P>0.05);但從 SR 來看,發(fā)酵飼料組(91.51±0.74)%,顯著高于未發(fā)酵飼料組(82.35±2.22)%](P<0.05)。
表1 投喂不同飼料刺參的特定生長率和存活率(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,n=3)Tab.1 Specific growth rate and survival rate of sea cucumbers fed with different feeds (Mean±SD, n=3)
2.2.1 非特異性免疫酶活性 由表2 可以看出,實(shí)驗(yàn)開始時(shí)發(fā)酵飼料和未發(fā)酵飼料組的ACP、SOD、AKP 和LZM 酶活性差異不顯著(P>0.05)。經(jīng)過50 d的投喂實(shí)驗(yàn),2 個(gè)實(shí)驗(yàn)組刺參苗種的ACP、SOD、AKP LZM 酶活性變化呈現(xiàn)出一定的差異。其中,未發(fā)酵飼料組的ACP 和SOD 酶活性變化較小,發(fā)酵飼料組的ACP 和SOD 酶活性出現(xiàn)增高的趨勢,但與未發(fā)酵飼料組差異不顯著(P>0.05);刺參的AKP 酶活性發(fā)酵飼料組和未發(fā)酵飼料組均出現(xiàn)降低的趨勢,投喂50 d后發(fā)酵飼料組酶活性為(0.74±0.04) king U/100 ml,顯著高于未發(fā)酵飼料組(P<0.05);發(fā)酵飼料組和未發(fā)酵飼料組刺參的LZM 酶活性均出現(xiàn)增高趨勢,投喂50 d后發(fā)酵飼料組的LZM 酶活性為(95.52±14.80) U/ml,顯著高于未發(fā)酵飼料組(P<0.05)。
表2 投喂不同飼料刺參的非特異性免疫酶活性變化(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,n=3)Tab.2 Changes in non-specific immunoenzyme activity of sea cucumbers fed with different feeds (Mean±SD, n=3)
2.2.2 消化酶活性 由表3 可以看出,在50 d 的實(shí)驗(yàn)周期內(nèi),發(fā)酵飼料組和未發(fā)酵飼料組刺參的淀粉酶活性均有提高。雖然發(fā)酵飼料組的酶活性高于未發(fā)酵飼料組,但2 組間差異不顯著(P>0.05)。而投喂發(fā)酵飼料組 50 d 后的刺參胰蛋白酶活性為(335.89±13.01) U/mg prot,顯著高于未發(fā)酵飼料組[(268.99±2.99) U/mg prot] (P<0.05)。
表3 投喂不同飼料刺參的消化酶活性變化(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,n=3)Tab.3 Changes in digestive enzyme activity of sea cucumbers fed with different feeds (Mean±SD, n=3)
2.3.1 水體中的氨氮變化 由圖1 可以看出,在7 d 的倒池周期內(nèi),未發(fā)酵飼料組和發(fā)酵飼料組水體中的氨氮均呈上升趨勢,且未發(fā)酵飼料組的上升趨勢明顯高于發(fā)酵飼料組。投喂1~3 d,未發(fā)酵飼料組水體中的氨氮略高于發(fā)酵飼料組(P>0.05);在投喂4~7 d,未發(fā)酵飼料組水體中的氨氮顯著高于發(fā)酵飼料組(P<0.05);7 d 時(shí),發(fā)酵飼料組的水體氨氮濃度為(263.27±32.57) μg/L,未發(fā)酵飼料組的水體氨氮濃度高達(dá)(462.86±14.69) μg/L。
2.3.2 水體中的亞硝酸鹽變化 由圖2 可以看出,在7 d 的倒池周期內(nèi),未發(fā)酵飼料組和發(fā)酵飼料組水體中的亞硝酸鹽均呈上升趨勢,且未發(fā)酵飼料組的上升趨勢明顯高于發(fā)酵飼料組。投喂1~2 d 時(shí),未發(fā)酵飼料組水體中的亞硝酸鹽略高于發(fā)酵飼料組(P>0.05);投喂3~7 d 時(shí),未發(fā)酵飼料組水體中的亞硝酸鹽顯著高于發(fā)酵飼料組(P<0.05);7 d 時(shí),發(fā)酵飼料組的水體亞硝酸鹽濃度為(315.15±61.41) μg/L,未發(fā)酵飼料組的水體亞硝酸鹽濃度高達(dá)(572.87±25.75) μg/L。
2.3.3 水體pH 變化 由圖3 可以看出,在7 d 的倒池周期內(nèi),未發(fā)酵飼料組和發(fā)酵飼料組水體的pH均呈下降趨勢,發(fā)酵飼料組和未發(fā)酵飼料組差異不顯著(P>0.05)。0 d 時(shí)發(fā)酵飼料組pH 為7.24±0.06,未發(fā)酵飼料組pH 為7.25±0.08,7 d 時(shí)發(fā)酵飼料組pH 為6.97±0.08,未發(fā)酵飼料組pH 為7.02±0.01。
圖1 1 個(gè)倒池周期(7 d)內(nèi)養(yǎng)殖池水氨氮含量的變化Fig.1 Concentation of ammonia nitrogen in the culture water during the substrate change period
圖3 一個(gè)倒池(7 d)周期內(nèi)養(yǎng)殖池水pH 的變化Fig.3 Changes of pH in the culture water during the substrate change period
通過氧彈儀測定,0 d 時(shí)刺參的能值為39.34 J/g,發(fā)酵飼料組飼料、殘餌、糞便及20 d 時(shí)的刺參能值分別為34.79、5.35、1.77 和42.45 J/g,未發(fā)酵飼料組飼料、殘餌、糞便及20 d 時(shí)的刺參能值分別為45.61、6.71、1.50 和41.25 J/g。根據(jù)以上能值計(jì)算出發(fā)酵飼料組刺參的生長能、排糞能、排泄能以及代謝能的能量分配分別為(13.25±1.01)%、(44.78±0.80)%、(9.65±0.88)%和(32.32±2.00)%,發(fā)酵飼料組刺參生長能占比為(13.25±1.01)%,略高于未發(fā)酵飼料組(11.38±1.05)%;發(fā)酵飼料組的代謝能占比為(32.32±2.00)%,顯著低于未發(fā)酵飼料組[(44.12±0.54)%] (P<0.05) (表4)。
表4 投喂不同飼料刺參的能量分配(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,n=3)Tab.4 Energy distribution of sea cucumbers fed withdifferent feeds (Mean±SD, n=3)
發(fā)酵飼料通過微生物的新陳代謝和菌體繁殖,將飼料中的大分子物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子分解或轉(zhuǎn)化,產(chǎn)生更利于動(dòng)物采食和利用的富含高活性益生菌及其代謝產(chǎn)物的飼料或原料,促進(jìn)養(yǎng)殖生物的生長(劉艷新等, 2017)。通過對比投喂發(fā)酵飼料和未發(fā)酵飼料對刺參特定生長率和存活率的影響看出,投喂發(fā)酵飼料和未發(fā)酵飼料刺參的特定生長率無顯著差異,但發(fā)酵飼料組的刺參存活率顯著高于未發(fā)酵飼料組。李利華(2013)和姜燕等(2012)比較發(fā)酵飼料和普通飼料對刺參生長的影響,研究表明,投喂發(fā)酵飼料可以提高刺參的特定生長率和存活率。本研究中,發(fā)酵飼料對刺參存活率的影響與以上研究結(jié)果基本一致,但在特定生長率方面的結(jié)果與其存在差別,這可能與2 個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中所用苗種的規(guī)格以及投放密度存在差異有關(guān)。本研究采用了與養(yǎng)殖生產(chǎn)一致的高密度養(yǎng)殖,在發(fā)酵飼料組刺參存活率顯著提高,相同投喂實(shí)驗(yàn)期內(nèi),后期養(yǎng)殖水體中苗種密度較大,影響了刺參特定生長率的增長。
棘皮動(dòng)物主要依靠細(xì)胞免疫和體液免疫來抵抗外界的侵害(Kudriavtsev et al, 2004),非特異性免疫酶在刺參的免疫防御中占據(jù)重要地位(王淑嫻等, 2012;孫永欣等, 2007)。發(fā)酵飼料可以改善動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡,增強(qiáng)其免疫力,發(fā)酵飼料中的小分子物質(zhì)更有利于刺參的腸道吸收,有助于提高刺參的非特異性免疫酶活性,同時(shí),飼料在發(fā)酵過程中,益生菌含量不斷增加。本研究在投喂50 d 后,發(fā)酵飼料組刺參的ACP、AKP、SOD 和LZM 酶活性均高于未發(fā)酵飼料組,2 組間ACP 和SOD 酶活性無顯著差異,AKP 和LZM 酶活性存在顯著差異。王世英等(2016)在刺參的配合飼料中添加30%的發(fā)酵海帶,刺參LZM、SOD、ACP 酶活性都有顯著提高。以上研究均表明,發(fā)酵飼料可顯著提高刺參的免疫酶活性,這也可以解釋投喂發(fā)酵飼料組存活率顯著高于未發(fā)酵飼料組。
本研究中發(fā)酵飼料對刺參消化酶活性的影響表明,發(fā)酵飼料可以顯著提高刺參胰蛋白酶活性,對淀粉酶活性影響較小。王天神(2012)發(fā)現(xiàn),飼喂發(fā)酵飼料后,克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)的胰蛋白酶活性和淀粉酶活性都顯著升高;孫興(2015)發(fā)現(xiàn),發(fā)酵飼料可以不同程度的提高刺參的蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶活性,其研究結(jié)果在胰蛋白酶活性上與本研究結(jié)果相似,這可能是由于發(fā)酵過程可以提高飼料中酵母菌等益生菌,進(jìn)而會(huì)促進(jìn)刺參腸道中蛋白酶活性的提升。而本研究中,發(fā)酵飼料對刺參淀粉酶活性影響較小,可能與養(yǎng)殖動(dòng)物飼料的組成有關(guān),本研究所用的刺參飼料主要為海帶和馬尾藻,飼料的淀粉含量較低(李來好等, 1997),發(fā)酵飼料對刺參腸道淀粉酶活性影響較小。
刺參工廠化養(yǎng)殖過程中,殘餌和糞便不斷沉積,并通過微生物降解產(chǎn)生大量的氨氮和亞硝酸鹽等有害物質(zhì),且會(huì)影響水體的pH 值,這些有害物質(zhì)和pH的變化會(huì)對刺參的攝食、消化和生長產(chǎn)生不利影響(胡煒等, 2018; 韓莎等, 2018)。本研究通過對比投喂未發(fā)酵飼料和發(fā)酵飼料對養(yǎng)殖單元池水水質(zhì)的影響發(fā)現(xiàn),在7 d 的倒池周期內(nèi),未發(fā)酵飼料組水體的氨氮和亞硝酸鹽濃度升高較快,在第3 天或第4 天后顯著高于發(fā)酵飼料組。王永杰等(2019)發(fā)現(xiàn),投喂發(fā)酵飼料水體的氨氮、亞硝酸鹽、pH 和硫化氫的濃度均低于對照組,本研究與其結(jié)果較為相似??偨Y(jié)分析認(rèn)為,發(fā)酵飼料誘食性好、飼料利用率高,并且發(fā)酵飼料中含有大量的益生菌,促進(jìn)了水體的氮循環(huán),從而改善了養(yǎng)殖水體的水質(zhì)。
能量收支作為一種能量流動(dòng)與分配的評估手段,可以用來分析生物體對能量的分配利用情況。通過對比投喂未發(fā)酵飼料和發(fā)酵飼料刺參的能量分配可以看出,發(fā)酵飼料組刺參的生長能、排糞能和排泄能占比均高于未發(fā)酵飼料組,兩組間無顯著差異,發(fā)酵飼料組的代謝能占比低于未發(fā)酵飼料組,且兩組間存在顯著差異。郭娜(2011)研究發(fā)現(xiàn),投喂不同飼料刺參的能量分配有所差異,投喂鼠尾藻(Sargassum thunbergii)粉的刺參代謝能高于投喂海帶粉和滸苔(Enteromorpha p rolifera)粉刺參的代謝能,刺參的排糞能低于投喂海帶粉和滸苔粉刺參的排糞能。本研究所用馬尾藻與鼠尾藻同屬馬尾藻科,據(jù)此推斷,攝食馬尾藻粉刺參會(huì)分配更多的能量用于代謝活動(dòng),而馬尾藻經(jīng)發(fā)酵后大分子物質(zhì)降解為小分子物質(zhì),利于刺參的消化吸收,因此,攝食發(fā)酵飼料刺參分配的代謝能減少;而發(fā)酵飼料增加刺參攝食量,排糞能和排泄能增加。本研究中未發(fā)酵飼料組刺參的生長能占比為(11.38±1.05)%,發(fā)酵飼料組刺參的生長能占比為(13.25±1.01)%。雖然兩組的特定生長率測定結(jié)果無顯著差異,但發(fā)酵組刺參的生長能占比略高,這可能是由于進(jìn)行能量收支實(shí)驗(yàn)時(shí),投喂等質(zhì)量的發(fā)酵飼料和未發(fā)酵飼料,但是發(fā)酵過程飼料中的部分能量被發(fā)酵菌利用,因此,發(fā)酵飼料組刺參攝入的總能(攝食能)低于未發(fā)酵飼料組導(dǎo)致。姜燕(2014)研究發(fā)現(xiàn),投喂發(fā)酵飼料的刺參用于生長的能量高于未發(fā)酵飼料與本研究結(jié)果一致,可能是發(fā)酵過程將飼料中的大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為小分子物質(zhì)(Jiang et al, 2015),更有利于刺參消化吸收,刺參分配更多能量用于生長,提高了飼料的有效利用率。
為充分驗(yàn)證發(fā)酵飼料在工廠化大規(guī)格苗種培育中的養(yǎng)殖效果,本研究采用工廠化養(yǎng)殖模式,在50 d的實(shí)驗(yàn)周期中,投喂發(fā)酵飼料和未發(fā)酵飼料,檢測刺參的能量收支、生長、酶活性及養(yǎng)殖水質(zhì)等指標(biāo)。研究表明,投喂發(fā)酵飼料可以顯著提高刺參的存活率,并使刺參分配更多的能量用于生長;同時(shí),投喂發(fā)酵飼料可以提高刺參的堿性磷酸酶、溶菌酶和胰蛋白酶活性,減緩養(yǎng)殖池水氨氮和亞硝酸鹽濃度的增長。綜上所述,在刺參工廠化保苗中,發(fā)酵飼料的養(yǎng)殖效果要優(yōu)于未發(fā)酵飼料。本研究結(jié)果將對發(fā)酵飼料在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。