張紹君,郭亞萍,李俊巧,陳 穎,劉 欣,宋文杰

保定市第一中心醫(yī)院：1.風(fēng)濕免疫科；2.西院檢驗(yàn)科；3.西院康復(fù)醫(yī)學(xué)二科，河北保定 071000

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是好發(fā)于育齡期女性的自身免疫性疾病，可累及全身多個(gè)器官，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制不盡相同，多數(shù)患者死于感染或并發(fā)的心血管疾病[1]。SLE目前尚無根治方法，探討與SLE疾病相關(guān)的分子機(jī)制有助于指導(dǎo)臨床治療，改善患者預(yù)后。磷脂酰絲氨酸特異性磷脂酶A1(PS-PLA1)是一種特異性作用于磷脂酰絲氨酸并產(chǎn)生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，被認(rèn)為是一種參與免疫系統(tǒng)的溶血磷脂介質(zhì)[2]。脫氧核糖核酸酶1 like 3 (DNase1L3)是一種能夠消化染色質(zhì)中脫氧核糖核酸的分泌型核酸酶，以短片段的形式存在于外周血，其表達(dá)缺失可能導(dǎo)致抗脫氧核糖核酸反應(yīng)和自身免疫[3]。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)是新型血管炎性反應(yīng)標(biāo)志物，與心腦血管疾病有關(guān)，近期研究發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用[4]。本研究擬檢測(cè)79例SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平，分析其與疾病活動(dòng)度、血脂指標(biāo)和腎功能的關(guān)系，旨在探討SLE的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供一定參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床首次診斷為SLE，符合《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南》[5]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)既往無SLE病史；(3)SLE 疾病活動(dòng)度評(píng)分(SLEDAI評(píng)分)≥5分。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并自身免疫性肝炎、自身免疫性胃炎、風(fēng)濕或類風(fēng)濕等其他免疫性疾病；(2)急慢性感染、血液系統(tǒng)疾??；(3)多囊腎、高血壓腎病、糖尿病腎病、腎癌；(4)合并糖尿病、代謝綜合征。選擇2018年1月至2020年4月本院風(fēng)濕免疫科收治的79例SLE患者為SLE組；男11例，女68例；年齡22～48歲，平均(29.05±6.17)歲。另選擇同期于本院進(jìn)行體檢的50例體檢健康志愿者為對(duì)照組；男9例，女41例；年齡21～52歲，平均(30.71±6.02)歲。SLE組和對(duì)照組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法 所有受試者均采集空腹靜脈血3 mL(SLE組入院當(dāng)日采集，對(duì)照組于體檢當(dāng)日采集)，室溫靜置30 min血液凝固取上層液于離心管中，置于Microfuge 20低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(美國(guó)貝克曼庫爾特公司)3 000 r/min離心15 min(離心半徑10 cm)后取上清液上機(jī)檢測(cè)，當(dāng)日未能完成檢測(cè)的標(biāo)本-70 ℃保存于Snowsong DW-105W型超低溫冰箱(上海蘭嫩有限公司)，所有標(biāo)本48 h內(nèi)完成檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平，所用儀器為Fluostar Omega全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(德國(guó)BMG Labtech公司)，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技公司。采用羅氏(上海)Modular全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂指標(biāo)和腎功能指標(biāo)，包括總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血清尿素(Urea)、血清肌酐(Scr)。

1.3SLE疾病活動(dòng)度評(píng)價(jià) SLE患者入院后收集臨床和實(shí)驗(yàn)室資料，采用SLEDAI評(píng)分[6]，根據(jù)胸膜炎、黏膜潰瘍、新發(fā)皮疹、脫發(fā)、膿尿、蛋白尿、血尿、管型尿、肌炎、關(guān)節(jié)炎、脈管炎、腦血管意外、發(fā)熱、血小板降低、白細(xì)胞減少、視覺受損、顱神經(jīng)損傷、狼瘡性頭痛共計(jì)18項(xiàng)內(nèi)容評(píng)價(jià)SLE疾病活動(dòng)度，0～4分表示基本無活動(dòng)，5～9分表示輕度活動(dòng)，10～14分表示中度活動(dòng)，≥15分表示重度活動(dòng)。根據(jù)SLEDAI評(píng)分結(jié)果將患者分為輕度組(21例)、中度組(32例)、重度組(26例)。

2 結(jié) 果

2.1SLE組和對(duì)照組PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2、血脂指標(biāo)、腎功能指標(biāo)比較 SLE組入院時(shí)血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平高于對(duì)照組，DNase1L3水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);SLE組血清TC、TG、LDL-C、Urea、Scr水平高于對(duì)照組，HDL-C水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 SLE組和對(duì)照組 PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平、血脂指標(biāo)、腎功能指標(biāo)水平比較

2.2不同疾病活動(dòng)度SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平比較 血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平均隨疾病活動(dòng)度的增加而升高(P趨勢(shì)檢驗(yàn)<0.05)，輕度組、中度組、重度組整體比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P差異分析<0.05)；DNase1L3隨疾病活動(dòng)度的增加而降低(P趨勢(shì)檢驗(yàn)<0.05)，輕度組、中度組、重度組整體比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P差異分析<0.05)。見表2。

表2 不同疾病活動(dòng)度SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平比較

2.3相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，PS-PLA1與SLEDAI評(píng)分、TC呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與其他指標(biāo)無相關(guān)性(P>0.05)。Lp-PLA2與LDL-C、SLEDAI評(píng)分、Urea、Scr呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與其他指標(biāo)無相關(guān)性(P>0.05)。DNase1L3與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與其他指標(biāo)無相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表3 血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平與疾病活動(dòng)度、血脂指標(biāo)和腎功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討 論

SLE是由環(huán)境、遺傳等因素引起的以B淋巴細(xì)胞異?；罨?、自身抗體產(chǎn)生、免疫復(fù)合物沉積為主要病理特征的自身免疫性疾病[7]。隨著疾病進(jìn)展，SLE可累及多個(gè)臟器，尤其是腎臟，常威脅患者生命安全[8]。SLE患者血脂異常發(fā)生率在65.3%～84.6%，合并血脂異常SLE患者心血管疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯增加[1]，因此，探討與SLE疾病活動(dòng)度、血脂異常和腎功能損傷相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物有助于指導(dǎo)臨床治療和改善患者預(yù)后。

PS-PLA1是產(chǎn)生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，屬于第2代生物活性脂質(zhì)介質(zhì)，從細(xì)胞膜中釋放的花生四烯酸衍生而來，通過細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與人體各種生理反應(yīng)，與細(xì)胞活化有關(guān)[9]。目前PS-PLA1在SLE中的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，本研究結(jié)果顯示，SLE組患者血清PS-PLA1水平明顯升高，且隨著疾病活動(dòng)度增加而升高，說明PS-PLA1參與SLE發(fā)病和疾病活動(dòng)過程，可為SLE疾病活動(dòng)評(píng)估提供參考。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PS-PLA1水平與SLEDAI評(píng)分、TC呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)，提示PS-PLA1在SLE疾病活動(dòng)和血脂異常機(jī)制中可能發(fā)揮一定作用，但具體機(jī)制尚不清楚。動(dòng)物研究顯示，載脂蛋白A-I轉(zhuǎn)基因小鼠PS-PLA1高度表達(dá)，PS-PLA1過表達(dá)導(dǎo)致載脂蛋白A-I水平增加88%，TC水平增加78%，PS-PLA1參與體內(nèi)脂質(zhì)分解、代謝及細(xì)胞膽固醇外排過程，PS-PLA1過表達(dá)通過抑制清道夫受體-BI介導(dǎo)的膽固醇外排過程，進(jìn)而增加血脂水平[10]。

DNase1L3是脫氧核糖核酸酶Ⅰ家族成員之一，具有3-OH端脫氧核糖核酸片段，能編碼分裂單鏈和雙鏈DNA的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞凋亡和壞死過程中參與核內(nèi)脫氧核糖核酸的碎片化。目前研究顯示，DNase1L3基因功能缺失與SLE家族遺傳有關(guān)，DNase1L3參與強(qiáng)直性脊柱炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性肌炎/皮肌炎等多種自身免疫性疾病發(fā)病過程[11-14]。本研究結(jié)果顯示，SLE患者血清DNase1L3水平明顯降低，且隨著SLEDAI評(píng)分的升高而降低，DNase1L3水平與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，SUN等[14]報(bào)道顯示，強(qiáng)直性脊柱炎患者血清DNase1L3水平呈升高狀態(tài)，DNase1L3水平與疾病活動(dòng)度、補(bǔ)體C3、C反應(yīng)蛋白水平呈正相關(guān)，CARBONELLA等[12]研究顯示，SLE、多發(fā)性肌炎/皮肌炎患者中血清DNase1L3水平明顯降低，而類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清DNase1L3水平保持不變，說明DNase1L3在不同自身免疫性疾病中可能存在不同的作用機(jī)制。本研究觀察DNase1L3與血脂指標(biāo)、腎功能之間均無明顯相關(guān)性，說明DNase1L3可能并不參與SLE血脂異常和腎損傷過程。

Lp-PLA2是新型炎癥標(biāo)志物，由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成，可誘導(dǎo)單核細(xì)胞聚集于血管內(nèi)膜并形成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞凋亡后形成泡沫細(xì)胞，參與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程，Lp-PLA2 主要與血脂結(jié)合，其中80%的Lp-PLA2 與LDL 結(jié)合，其對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化的作用與其結(jié)合的脂蛋白類型有關(guān)[15-16]。Lp-PLA2在SLE的研究報(bào)道尚不多見，本研究發(fā)現(xiàn)SLE組血清Lp-PLA2水平高于對(duì)照組，Lp-PLA2水平隨著疾病活動(dòng)度增加而升高，說明疾病活動(dòng)度高的SLE患者Lp-PLA2活性更高，Lp-PLA2可用來評(píng)估SLE活動(dòng)度。本研究結(jié)果顯示，Lp-PLA2與SLE患者血脂指標(biāo)HDL-C、LDL-C均存在相關(guān)性，說明Lp-PLA2可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝參與SLE發(fā)病過程，此外，本研究還發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2與SLE患者Urea、Scr呈正相關(guān)，提示Lp-PLA2水平升高可能導(dǎo)致SLE腎損傷。近年來研究顯示，腎臟功能受損時(shí)，單核細(xì)胞Lp-PLA2 mRNA表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致Lp-PLA2活性升高[17-18]。SLE患者血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平升高，DNase1L3水平降低，PS-PLA1、Lp-PLA2、DNase1L3水平均與SLE疾病活動(dòng)度有關(guān)，Lp-PLA2、PS-PLA1可能參與了SLE血脂異常過程，且PS-PLA1可能在SLE腎損傷進(jìn)程中發(fā)揮一定作用。值得注意的是，本研究納入的樣本量較少，且表3中r最大為0.631，呈中強(qiáng)相關(guān)，其相關(guān)性有一定誤差，后續(xù)可通過多中心調(diào)查、大樣本量的研究提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。