王譽瑾，張 萌，楊 松

（錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121001）

近年來，禽產(chǎn)品藥物殘留問題越來越受到消費者的重視。抗生素的大量使用造成肉、蛋、奶中抗生素殘留超標(biāo)和細菌耐藥性增強，成為危害消費者健康的重要隱患。中草藥具有來源廣、藥食同源、多靶向和多功能的特點，在疾病的預(yù)防和治療方面具有給藥方便、利用率高、安全、綠色等優(yōu)點，成為替代抗生素的有效產(chǎn)品之一。

大蒜（Allium sativumL．）又稱葫或麝香草，百合科蔥屬，是一種古老的藥食兩用植物[1]。我國大蒜的種植面積占世界種植面積的2/3以上，是大蒜的主產(chǎn)國[2]。大蒜以鱗莖入藥，性溫味辛。大蒜中含有蒜氨酸、蒜氨酸酶、多糖、蛋白質(zhì)、維生素、微量元素、皂苷、揮發(fā)油等活性物質(zhì)，其中大蒜多糖含量占70%以上[3-4]。研究表明，大蒜多糖能增強人體免疫力，具有抗氧化和保護肝臟的作用[5]。大蒜在食品行業(yè)應(yīng)用較多，但在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用報道較少。本研究旨在探討大蒜多糖對肉雞生長性能和免疫功能的影響，為其在肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取優(yōu)質(zhì)大蒜，蒜皮白亮、無霉變。按水提法提取大蒜多糖，提取溫度為80 ℃、提取時間為150 min、料液比（體積比）為1∶30[3]。提取的大蒜多糖經(jīng)測定純度為97%。

1.2 試驗動物

1日齡清潔級健康愛拔益加（AA）肉雞雛160只，由錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.3 儀器與試劑

ELISA試劑盒、Griess試劑、MTT試劑盒、PHA購自上海酶聯(lián)生物公司.

酶標(biāo)儀購自上海精密儀器儀表公司；恒溫培養(yǎng)箱購自上海精密儀器儀表公司。

1.4 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理

1 日齡肉雞隨機分成4 組，每組4 個重復(fù)，每個重復(fù)10只。基礎(chǔ)日糧中分別添加0、1000（低劑量）、2000（中劑量）、3000 mg/kg（高劑量）大蒜多糖。試驗期為42 d。采取3層籠養(yǎng)，1日齡肉雞每10只置于1籠，22日齡后每5只置于1 籠。肉雞自由采食和飲水，雞舍內(nèi)光照、溫濕度適宜，按常規(guī)免疫程序進行免疫。于42日齡以組為單位，每組取3只雞進行取樣?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平Tab.1 Basic diet composition and nutritional level

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長性能

飼養(yǎng)期間每天記錄投料量，取樣前禁食12 h，空腹稱量肉雞體重，計算日均采食量、平均日增重、耗料增重比，計算公式如下：

1.5.2 免疫性能

1.5.2.1 免疫器官指數(shù)

取胸腺、脾臟和法氏囊，去除多余脂肪，稱量免疫器官濕重。免疫器官指數(shù)按如下公式計算：

1.5.2.2 免疫球蛋白

肉雞翅下靜脈采血10 mL，3000 r/min離心10 min，取上清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）按照ELISA 試劑盒說明書要求操作測定，每樣做3個重復(fù)。

1.5.2.3 淋巴細胞增殖活性

取肉雞胸腺、脾臟，除包膜，剪碎并胰酶消化，裂解紅細胞，調(diào)節(jié)細胞濃度為5×106/mL。取96 孔板，每孔加入100 μL，每測試設(shè)3 個重復(fù)，同時設(shè)空白對照。加入含PHA 的RPMl-l640，每孔100 μL。細胞培養(yǎng)箱37 ℃孵育68 h。每孔棄去100 μL 上清，按MTT 試劑盒說明書操作。酶標(biāo)儀570 nm處讀取各孔A值。

1.5.2.4 巨噬細胞釋放NO能力

調(diào)整脾細胞濃度至1×107個/mL，24 孔板中加入1 mL；再加入1 mL 含10%FBS 的RPMI-1640 培 養(yǎng) 液，37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h。細胞洗滌2次后加入0.5 mL細胞培養(yǎng)液，孵育24 h。將上清液和不同濃度的NaNO2標(biāo)準(zhǔn)品加于96 孔板中，100μL/孔，每樣設(shè)3 個重復(fù)。加入Griess試劑100μL/孔，靜置10 min，酶標(biāo)儀550 nm處讀取A值。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0 進行單因素方差分析，組間采用SNK 法進行兩兩比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 大蒜多糖對肉雞生長性能的影響（見表2）

表2 大蒜多糖對肉雞生長性能的影響Tab.2 Effect of garlic polysaccharide on growth performance of broilers

由表2 可知，中劑量組和高劑量組肉雞的平均日采食量、平均日增重顯著高于對照組（P<0.05），料重比顯著低于對照組（P<0.05）；但中、高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 大蒜多糖對免疫器官指數(shù)的影響（見表3）

表3 大蒜多糖對肉雞免疫器官指數(shù)的影響Tab.3 Effect of garlic polysaccharide on immune organ index of broilers 單位：mg/g

由表3 可知，中劑量組和高劑量組肉雞胸腺指數(shù)顯著高于低劑量組和對照組（P<0.05），中劑量組和高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。中劑量組的法氏囊指數(shù)顯著高于低劑量組和對照組（P<0.05）；高劑量組顯著高于對照組（P<0.05），但與低劑量組和中劑量組差異不顯著（P>0.05）。各組的脾臟指數(shù)無顯著差異（P>0.05）。

2.3 大蒜多糖對肉雞血清IgG、IgA含量的影響（見表4）

表4 大蒜多糖對肉雞血清IgG、IgA含量的影響Tab.4 Effect of garlic polysaccharide on serum IgG,IgA of broilers 單位：g/L

由表4 可知，中劑量組和高劑量組肉雞血清中IgG 含量顯著高于低劑量組和對照組（P<0.05）。高劑量組血清IgA水平略有提高，但差異不顯著（P>0.05）。

2.4 大蒜多糖對肉雞T細胞A值的影響（見表5）

表5 大蒜多糖對肉雞T細胞A值的影響Tab.5 Effect of garlic polysaccharide on A value of T lymphocyte of broilers

由表5 可知，中劑量組和高劑量組肉雞的T 細胞A 值顯著高于低劑量組和對照組（P<0.05），中、高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.5 大蒜多糖對肉雞巨噬細胞釋放NO 能力的影響（見表6）

表6 大蒜多糖對肉雞巨噬細胞釋放NO能力的影響Tab.6 Effect of garlic polysaccharide on NO release level of broilers 單位：μmol/L

由表6 可知，中劑量組和高劑量組巨噬細胞釋放NO的能力顯著高于低劑量組和對照組（P<0.05），但中劑量組和高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

枸杞多糖、黨參多糖、黃芪多糖、牛膝多糖等多種植物多糖能提高畜禽的生長性能和免疫功能[6-8]。枸杞多糖能夠提高肉雞日均采食量和平均日增重[9]。大蒜多糖作為益生元對小鼠腸道微生態(tài)具有促進作用[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加中劑量（2000 mg/kg）和高劑量（3000 mg/kg）的大蒜多糖能顯著提高肉雞的日均采食量、平均日增重和耗料增重，進而提高肉雞的生長性能。中劑量和高劑量大蒜多糖之間的效果差異不顯著。

機體的免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細胞和免疫效應(yīng)分子組成。禽類的免疫器官主要是胸腺、脾臟和法氏囊等。免疫器官的發(fā)育和機能直接影響禽類免疫功能的強弱[6,11]。免疫器官指數(shù)是反應(yīng)免疫器官發(fā)育情況的一項重要指標(biāo)。T淋巴細胞是執(zhí)行細胞免疫的主要效應(yīng)細胞。T淋巴細胞的增殖、分化能力越強，細胞免疫功能越強；淋巴細胞A570nm值與淋巴細胞增殖呈正相關(guān)，A570nm值越大，則增殖越顯著[11-14]。B 淋巴細胞是執(zhí)行體液免疫的主要效應(yīng)細胞，B 細胞受抗原刺激后轉(zhuǎn)化為漿細胞產(chǎn)生抗體，是參與體液免疫的主要效應(yīng)分子?？贵w水平的高低，決定機體體液免疫能力的強弱。巨噬細胞是非特異性免疫中執(zhí)行吞噬功能的主要細胞，可通過其產(chǎn)生的NO 發(fā)揮殺傷病原體的作用[15-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加中劑量和高劑量的大蒜多糖可顯著提高胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)、T 淋巴細胞增值率、血清中總IgG 水平及巨噬細胞釋放NO 能力。說明大蒜多糖能有效刺激免疫器官發(fā)育，提高機體的免疫功能，但中劑量和高劑量大蒜多糖組間的效果差異不明顯。

4 結(jié)論

飼糧中添加大蒜多糖能在一定程度上提高肉雞的生長性能和免疫功能，且大蒜多糖的添加量以2000 mg/kg較佳。