柴軍發(fā)，謝 婷，景亮亮，洪 波，賈彥霞

(寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,銀川 750021)

近年來(lái)，農(nóng)藥殘留問(wèn)題在中國(guó)被持續(xù)關(guān)注，是一個(gè)既普遍又嚴(yán)重的問(wèn)題[1]，要想降低農(nóng)藥殘留，不僅要立足長(zhǎng)遠(yuǎn)，且要?jiǎng)菰诒匦?。隨著人民的物質(zhì)生活和精神追求的不斷提高,綠色安全的農(nóng)產(chǎn)品供給出現(xiàn)不足[2]，對(duì)人民群眾的“菜籃子”造成很大壓力。日光溫室大棚是中國(guó)北方地區(qū)反季節(jié)設(shè)施蔬菜生產(chǎn)的最重要形式之一[3]，但設(shè)施蔬菜時(shí)常飽受各種病蟲(chóng)害的侵?jǐn)_，不僅造成品質(zhì)下降，而且使口感大打折扣。

煙粉虱[Bemisiatabaci(Gennadius)]不僅通過(guò)刺吸式口器直接吸食植物汁液和分泌蜜露導(dǎo)致植物生長(zhǎng)不良，還可傳播以雙生病毒(Geminivirus)為主的多種植物病毒[4]。隨著各種化學(xué)殺蟲(chóng)劑的使用，煙粉虱的抗藥性也迅速增加[5]，對(duì)環(huán)境負(fù)面影響較大且防治效果逐漸變差，故而防治手段急需改進(jìn)。目前在防治煙粉虱的措施中,處于主導(dǎo)地位的仍是化學(xué)殺蟲(chóng)劑,常見(jiàn)的有擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)、新煙堿類(lèi)和昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等[6]。近年來(lái)，利用蟲(chóng)生真菌的生物防治替代化學(xué)防治也逐漸取得很多成果[7]，但是生物防治見(jiàn)效慢，環(huán)境因素影響大，對(duì)突然爆發(fā)的蟲(chóng)災(zāi)不能及時(shí)控制，而蟲(chóng)生真菌與化學(xué)殺蟲(chóng)劑的混用，既可優(yōu)化生物防治方法，還可以推進(jìn)“雙減”目標(biāo)的進(jìn)程。

球孢白僵菌(Beauveriabassiana)是害蟲(chóng)生物防治中應(yīng)用最廣的昆蟲(chóng)病原真菌之一[8]，其對(duì)不同昆蟲(chóng)的致病力強(qiáng)弱與球孢白僵菌在昆蟲(chóng)體表的芽管伸長(zhǎng)速度有關(guān)[9]。近年來(lái)，許壽濤等[10]研究發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌與一些殺蟲(chóng)劑有較好的相容性，具有一定的協(xié)同增效作用，但因殺蟲(chóng)劑和菌株種類(lèi)以及使用濃度的不同，相容性表現(xiàn)出明顯的差異。目前，國(guó)內(nèi)外研究的主要是不同殺蟲(chóng)劑與不同菌株的相容性[11-12]，球孢白僵菌次生代謝物的毒力作用[13]等，但球孢白僵菌與低劑量殺蟲(chóng)劑混用防治煙粉虱的研究相對(duì)較少。因此，本試驗(yàn)選取8種常見(jiàn)殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌混配，探究它們的相容性及對(duì)煙粉虱的聯(lián)合毒力，旨在為常見(jiàn)的8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌的相容性及對(duì)溫室大棚防治煙粉虱提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：球孢白僵菌粉劑，購(gòu)自江西天人生態(tài)有限公司。

供試蟲(chóng)源：采自寧夏銀川軍馬場(chǎng)(N 38°33′, E 106°08′)溫室大棚番茄(碧嬌)植株上的2～3齡煙粉虱若蟲(chóng)。

供試殺蟲(chóng)劑見(jiàn)表1。

表1 供試殺蟲(chóng)劑種類(lèi)信息Table 1 Information of testedchemical insecticides

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 測(cè)定孢子萌發(fā)率 用含0.05% Tween-80的無(wú)菌水將PDA平板上球孢白僵菌孢子充分洗脫，制成濃度為1×107個(gè)/mL的孢子懸浮液，然后利用無(wú)菌水將殺蟲(chóng)劑配制成田間推薦濃度C1、C1稀釋5倍后的濃度C2、C1稀釋10倍后的濃度C3，使用濾膜注射器將不同濃度的殺蟲(chóng)劑加入配置好的孢子懸浮液中，并以不加任何藥劑的孢子懸浮液作為對(duì)照，在渦旋振蕩儀上充分混勻，分裝至1.5 mL離心管中，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。置于(25±1)℃、170 r/min的恒溫?fù)u床上震蕩 24 h后，觀察其孢子萌發(fā)量(孢子芽管大于孢子短半徑為萌發(fā))，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

孢子萌發(fā)抑制率=萌發(fā)的孢子數(shù)/孢子總數(shù)×100%

1.2.2 測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌菌絲生長(zhǎng)的影響 將球孢白僵菌在PDA培養(yǎng)基上活化7 d左右后，用滅菌打孔器(d=5 mm)在菌落邊緣打取菌餅，后轉(zhuǎn)接至8種殺蟲(chóng)劑制成的3個(gè)濃度梯度的含藥平板中央，殺蟲(chóng)劑濃度同“1.2.1”，以不含藥平板作對(duì)照，每處理設(shè)3次重復(fù)，(25±1) ℃下黑暗培養(yǎng)10 d，每隔5 d，利用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，最后計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照菌絲平均直徑-含藥菌絲平板直徑)/(對(duì)照菌絲平均直徑-菌餅直徑)×100%

1.2.3 測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌產(chǎn)孢的影響 在無(wú)菌條件下，用滅菌后的打孔器(d=5 mm)在“1.2.2”中培養(yǎng)10 d后的菌落中心至邊緣1/2處，采用十字交叉法取4個(gè)菌餅，用20 mL含 0.05% Tween-80的無(wú)菌水充分洗脫孢子，在渦旋振蕩器上充分混勻后，用紗布過(guò)濾，然后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，計(jì)算孢子濃度，每處理設(shè)3次重復(fù)，最后計(jì)算產(chǎn)孢抑制率。

產(chǎn)孢抑制率=(對(duì)照組產(chǎn)孢量-處理組產(chǎn)孢量)/對(duì)照組產(chǎn)孢量×100%

1.3 測(cè)定8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌對(duì)煙粉虱若蟲(chóng)的聯(lián)合毒力

利用w=0.05% Tween-80無(wú)菌水將球孢白僵菌孢子懸浮液制成濃度為1×106個(gè)/mL、 1×107個(gè)/mL、5×107個(gè)/mL 3個(gè)濃度梯度測(cè)定其單劑毒力，將8種藥劑分別配置成3個(gè)濃度梯度(表3)，測(cè)定其單劑毒力，每種殺蟲(chóng)劑各濃度分別稀釋3倍和5倍計(jì)算共毒系數(shù)。然后用孢子懸浮液(107cfu/mL)分別與8種殺蟲(chóng)劑以體積比 1∶1混配，取帶有煙粉虱若蟲(chóng)的番茄新鮮葉片，每個(gè)葉片保留30頭2～3齡若蟲(chóng)，浸泡10 s，取出晾干后，用保濕棉球包住葉柄，置于培養(yǎng)皿(d=90 mm)中，在(25±1)℃、RH=80%、L∶D= 14 h∶10 h的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，記錄若蟲(chóng)死亡數(shù)，每處理重復(fù)3次，連續(xù)記錄4 d，并用概率分析法計(jì)算毒力回歸方程、LC50、置信區(qū)間及共毒系數(shù)。

采用孫云沛法，根據(jù)共毒系數(shù)(co-toxicity coefficient,簡(jiǎn)稱(chēng)：CTC) 評(píng)價(jià)毒力，CTC值小于80為拮抗作用，大于120為增效作用，80～120為相加作用。

單劑毒力指數(shù)(TI)=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LC50/供試藥劑的LC50×100

混合藥劑的毒力指數(shù)(ATI)=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LC50/供試藥劑的LC50×100

混劑理論毒力指數(shù)(TTI)=TI(a)×a在混劑中所占比例+TI(b)×b在混劑中所占比例

共毒系數(shù)(CTC)=ATI/TTI×100

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Microsoft Excel 2019整理數(shù)據(jù)并進(jìn)行毒力回歸方程、LC50、相關(guān)系數(shù)、置信區(qū)間及共毒系數(shù)的計(jì)算[14]，以SAS 9.4軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Duncan’s新復(fù)極差法( α=0.05)進(jìn)行多重比較，Origin 2018 64Bit作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌生長(zhǎng)的影響

從表2可見(jiàn)，8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢量均有抑制作用，且隨著殺蟲(chóng)劑濃度降低，抑制作用減弱。C1濃度時(shí)，孢子萌發(fā)抑制率均在60%以上，產(chǎn)孢量的抑制率均在50%以上；C2濃度時(shí)，孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢量抑制率均大于40%；C3濃度時(shí)，除吡蚜酮和氯噻啉外，其余殺蟲(chóng)劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率小于40%，其中藜蘆堿對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率為14.20%，產(chǎn)孢量抑制率小于40%，其中印楝素和藜蘆堿對(duì)產(chǎn)孢量的抑制率分別為14.78%和17.60%，相對(duì)較低。

從圖1可得出，8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用；隨著殺蟲(chóng)劑稀釋倍數(shù)增加，除印楝素外，其余殺蟲(chóng)劑各處理間有顯著差異。在C1濃度下，印楝素對(duì)培養(yǎng)10 d的菌絲生長(zhǎng)抑制率最低；在C3濃度下，藜蘆堿對(duì)培養(yǎng)5 d或10 d的菌絲生長(zhǎng)抑制率均相對(duì)最低。

表2 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢的影響Table 2 Spore germination and sporulation of B.bassiana under treatment of 8 insecticides

2.2 8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力

由表3可以看出，藜蘆堿、印楝素、螺蟲(chóng)乙酯、乙基多殺菌素和甲維鹽在3種濃度梯度下，與球孢白僵菌混配的CTC值均大于120，有較好的增效作用，其中印楝素和球孢白僵菌以1(0.3 mg/L)∶1(107cfu/mL)混配后，CTC值最大(393)；藜蘆堿與球孢白僵菌混配后，240

表3 8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌對(duì)煙粉虱若蟲(chóng)的聯(lián)合毒力Table 3 Co-toxicity of 8 insecticides and B.bassiana on nymphs of B.tabaci

3 結(jié)論與討論

由于化學(xué)殺蟲(chóng)劑的大量使用，造成煙粉虱的抗藥性增加[6]，而真菌殺蟲(chóng)劑防治速率慢，對(duì)環(huán)境要求高，但菌藥混配卻可以起到一定的協(xié)同增效作用[15]。本試驗(yàn)為了準(zhǔn)確評(píng)價(jià)殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌的相容性，結(jié)合孢子萌發(fā)率、菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量3個(gè)指標(biāo)進(jìn)行探究。結(jié)果表明，8種殺蟲(chóng)劑在田間推薦劑量下對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量均有顯著地抑制作用，隨著殺蟲(chóng)劑濃度減小，抑制作用減弱，與熊琦等[16]、范曉杰等[17]研究有相似的結(jié)果。由圖1和表2可得，藜蘆堿對(duì)球孢白僵菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)、印楝素和藜蘆堿對(duì)產(chǎn)孢量的抑制率顯著小于其他幾種殺蟲(chóng)劑，表明藜蘆堿和印楝素與球孢白僵菌有較好的相容性。另外，殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌的相容性不僅與殺蟲(chóng)劑濃度有關(guān)，還可能與菌株培養(yǎng)時(shí)間緊密相關(guān)，由圖1可得，菌株培養(yǎng)5 d和培養(yǎng) 10 d，殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌的抑制作用是有差 異的。

殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌的合理混配，既可以提高生物菌劑的防治速率，還可以減少化學(xué)殺蟲(chóng)劑的用量，在處理煙粉虱若蟲(chóng)后，對(duì)后代種群有顯著的亞致死作用[18]。本試驗(yàn)測(cè)定8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌的室內(nèi)毒力，由表3可得，不同濃度的8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌混配后，LC50均小于單劑，故混劑具有一定的協(xié)同增效作用；印楝素、藜蘆堿與球孢白僵菌混配的CTC值相對(duì)較高，表明藜蘆堿和印楝素與球孢白僵菌混配有較好的協(xié)同增效作用，這與Touhidul等[19]研究印楝素與球孢白僵菌的配伍性以及胡娟等[20]研究藜蘆堿與白僵菌對(duì)水稻褐飛虱的防治效果有相似的結(jié)果。因此，推薦選擇藜蘆堿或印楝素與球孢白僵菌混配，以防治溫室白粉虱。