魏志敏，孫斌，方成，代子雯，劉滿強(qiáng)，焦加國(guó)，胡鋒，李輝信，徐莉

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210095）

毛葉苕子（Vicia villosa）為豆科巢菜屬，其生長(zhǎng)快，生物量大，粗蛋白含量高，是優(yōu)良的飼料作物［1］。同時(shí)其固氮能力強(qiáng)，也是一種優(yōu)質(zhì)的綠肥作物［2?4］。目前，作為稻區(qū)常用的一種冬季綠肥，不僅能充分利用稻田冬閑時(shí)期的水、光、熱和土地資源，翻壓還田為后茬水稻（Oryza sativa）提供養(yǎng)分，起到化肥減施的效果，同時(shí)還能改善土壤理化性狀［5?7］，提高作物產(chǎn)量［8?10］，改善生態(tài)環(huán)境［11］。

豆科植物?根瘤菌共生體系是自然界存在的最主要的生物固氮體系之一，全球每年生物固氮達(dá)1.75 億噸，土壤中70%氮素來(lái)自生物固氮［12］，其中生物固氮的65%來(lái)自豆科植物與根瘤菌共生體系［13］。此外，也有自生氮菌參與固氮，自生固氮菌除固定少量氮外，有些還能分泌吲哚乙酸類似物和赤霉素類物質(zhì)［14］，能活化土壤中的磷、鉀［15?16］，不僅刺激農(nóng)作物的根系發(fā)育，還能促進(jìn)土壤有機(jī)物質(zhì)的礦化。

利用生物接種的方法可以固定土壤中的氮素，能起到提高牧草產(chǎn)量和質(zhì)量、減少化肥投入、提升土壤肥力、倒茬輪換、保護(hù)環(huán)境等作用，對(duì)于保障國(guó)家糧食安全、資源環(huán)境可持續(xù)利用、促進(jìn)優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)和農(nóng)民增收方面具有重大意義。研究表明根瘤菌可以促進(jìn)毛葉苕子、箭筈豌豆（Vicia sativa）以及苜蓿（Medicago）等豆科綠肥的生長(zhǎng)［17?19］，還可以明顯促進(jìn)農(nóng)業(yè)作物大豆（Glycine max）的生長(zhǎng)［20］。施用根瘤菌菌劑能有效提高豆科植物的產(chǎn)量，還可以改良土壤的肥力，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有積極的意義，已成為豆科植物增產(chǎn)的主要措施［21］。而傳統(tǒng)的根瘤菌菌劑往往存在環(huán)境適應(yīng)性差、占瘤率低和接種效果不穩(wěn)定等問題，制約了其應(yīng)用和發(fā)展。近年來(lái)，根瘤菌劑已由單一菌種、單一功能向復(fù)合菌種、多功能方向發(fā)展。李曉旭等［22］研究表明大豆根瘤菌、解磷菌、解鉀菌的復(fù)合菌劑可增加土壤養(yǎng)分的有效性、提高作物抗性也可增加大豆的株高、干重和百粒重，進(jìn)而提高作物產(chǎn)量。而目前關(guān)于豆科綠肥作物專用復(fù)合根瘤菌菌劑的報(bào)道較少。在固氮功能上，雖然普遍認(rèn)為自生固氮菌固氮量很低，但它不需要與一定的植物配合，具有條件寬、適應(yīng)性廣的特點(diǎn)，在天然生態(tài)系統(tǒng)的氮素循環(huán)中也具有重要作用。此外，很多植物促生菌包括自生固氮菌能夠在共接種中促進(jìn)根瘤菌的結(jié)瘤，起到促進(jìn)固氮的作用［23］。因此，本研究通過(guò)前期固氮功能菌的篩選，獲得高效自生固氮菌菌株N3，聯(lián)合南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院根瘤固氮實(shí)驗(yàn)室提供的能在毛葉苕子上成功結(jié)瘤并固氮的豌豆（Pisum sativum）根瘤菌菌株Vic5 進(jìn)行復(fù)配，在溫室盆栽條件下，研究單一和復(fù)合接種對(duì)綠肥作物?毛葉苕子的促生效果以及土壤性質(zhì)的影響，為研發(fā)豆科綠肥專用菌劑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株：巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）菌株N3 分離自種植花生（Arachis hypogaea）根際土壤，菌株固氮酶活性達(dá) C2H428.33 nmol·h?1·mL?1；豌豆根瘤菌（Rhizobium leguminosarum）菌株 Vic5 由生物科學(xué)院根瘤固氮實(shí)驗(yàn)室提供，菌株根瘤固氮酶活性達(dá) 15492.16 μmol·min?1·g?1·plant?1。供試作物：豆科巢菜屬毛葉苕子。供試土壤（未滅菌）：采自山東泰安綜合試驗(yàn)站（117°0′27″E，35°59′55″N），采樣深度為0～20 cm，土壤類型為棕壤褐土。供試土壤基本理化性質(zhì)為：pH 值 7.19，有機(jī)質(zhì) 25.77 g·kg?1，全氮 1.40 g·kg?1，NH4+-N 1.84 mg·kg?1，NO3?-N 5.84 mg·kg?1，全磷 0.74 g·kg?1，速效磷 17.24 mg·kg?1，速效鉀 149.18 mg·kg?1。培養(yǎng)基配方：LB 培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，pH 7.0～7.2。TY 培養(yǎng)基：胰蛋白胨5 g，酵母提取物3 g，氯化鈣0.67 g，pH 7.0～7.2。培養(yǎng)基配置時(shí)均用蒸餾水定容至1000 mL，121 ℃滅菌20 min。

1.2 毛葉苕子盆栽試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：盆栽試驗(yàn)于2019 年3?5 月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)土壤生態(tài)實(shí)驗(yàn)溫室二樓中進(jìn)行。共設(shè)4 個(gè)處理：1）不接菌處理CK；2）單一接種巨大芽孢桿菌菌株N3；3）單一接種豌豆根瘤菌菌株Vic5；4）復(fù)合接種菌株N3+Vic5。每個(gè)處理 4 次重復(fù)。步驟：1）將 N3 接種于 LB 液體培養(yǎng)基，28 ℃、180 r·min?1振蕩培養(yǎng) 24 h，Vic5 接種于 TY 液體培養(yǎng)基，28 ℃、180 r·min?1振蕩培養(yǎng) 2～3 d，無(wú)菌條件下把菌液倒入已滅菌的離心管中，8000 r·min?1離心 5 min，去掉上清液，再用無(wú)菌水重懸菌體，制成菌懸液待用。2）試驗(yàn)前將毛葉苕子種子進(jìn)行消毒處理：首先用3%雙氧水表面消毒20 min，再用無(wú)菌水反復(fù)沖洗。將消毒過(guò)的種子浸泡在盛有濃硫酸的燒杯中10 min，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗后平鋪于滅菌的大平皿上，置于28 ℃環(huán)境中催芽，每12 h 用無(wú)菌水沖一次，去掉種子表面的分泌物。3）將催芽的種子用3%雙氧水消毒2.5 min，無(wú)菌水清洗7～8 次，小心剝?nèi)シN子表皮待用。將供試土壤過(guò)5 mm 篩以混合均勻并除去土壤中的根系殘?bào)w及凋落物，裝填3 kg 過(guò)篩的土壤于10 cm×20 cm 的花盆中，加水至最大田間持水量的80%左右。平衡1 d 后，每盆穴播催芽后的毛葉苕子10 顆，同時(shí)接種菌液于穴中，接種量按108CFU·g?1土接入，復(fù)合處理中兩株菌比例為1∶1，讓菌液與種子充分接觸，生長(zhǎng)期采用稱重法將盆栽土壤水分含量控制在土壤最大持水量的80%左右。種植3 個(gè)月后，每盆采集長(zhǎng)勢(shì)一致的毛葉苕子3 株，同時(shí)采集土壤樣品。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.3.1 毛葉苕子根系形態(tài)的測(cè)定 采用根系掃描儀（LA1600+scanner，加拿大）掃描毛葉苕子根系形態(tài)，獲取根系圖（WinRHIZO 2003b，加拿大）進(jìn)行相關(guān)根系指標(biāo)分析。

1.3.2 毛葉苕子根瘤固氮酶活性的測(cè)定 采用乙炔還原法［24］：將毛葉苕子的瘤體全部剪下置于20 mL 頂空瓶中，用密封的1 mL 注射器抽出頂空瓶中1 mL 氣體，立即注入1 mL 高純度的乙炔氣體，使用封口膜密封針孔。將瓶子倒置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h 后，用1 mL 密封的注射器抽出1 mL 反應(yīng)氣體注入2 mL 頂空瓶中，同時(shí)從頂空瓶中抽出1 mL 空氣，檢測(cè)時(shí)用上樣器抽取100 μL 于2 mL 頂空瓶中的制備氣體注入氣相色譜儀上（Agilent，美國(guó)）樣口中，進(jìn)行乙烯乙炔峰高值檢測(cè)。樣品檢測(cè)后將所有瘤體于烘箱中50 ℃烘干后稱取干重。

1.3.3 土壤肥力指標(biāo)的測(cè)定 土壤pH 采用無(wú)CO2水浸提，pH 計(jì)測(cè)定；采用外加熱重鉻酸鉀容量法測(cè)定土壤有機(jī)質(zhì)；采用凱氏定氮法測(cè)定土壤全氮；土壤全磷采用HClO4?H2SO4消煮，鉬銻抗比色法測(cè)定；土壤銨態(tài)氮、硝態(tài)氮均采用2 mol·L?1KCl 浸提，連續(xù)流動(dòng)分析儀（Seal-AutoAnalyzer3，德國(guó)）測(cè)定；土壤速效磷采用 0.5 mol·L?1NaHCO3浸提，鉬銻抗比色法測(cè)定；土壤速效鉀采用CH3COONH4浸提，火焰光度法測(cè)定［25］。

1.3.4 土壤生物學(xué)性質(zhì)測(cè)定 土壤基礎(chǔ)呼吸（soil basal respiration，SBR）的測(cè)定［25］：稱取10.0 g 新鮮土壤到100 mL 鹽水瓶中，黑暗室溫條件培育24 h 后通風(fēng)2 h。密封后黑暗條件下培養(yǎng)4 h。用10 mL 注射器吸取10 mL氣體，采用氣相色譜（Agilent，美國(guó)）測(cè)定CO2濃度。土壤微生物量碳（microbial biomass carbon，MBC）和微生物量氮（microbial biomass nitrogen，MBN）的測(cè)定［26］：采用氯仿熏蒸?硫酸鉀浸提法，用K2CrO7外加熱法測(cè)定濾液中MBC 含量；采用半微量凱氏定氮法測(cè)定MBN 含量。土壤固氮酶活性采用乙炔還原法［24］：取盆栽土樣15 g 于100 mL 血清瓶中，加入0.1 mol·L?1葡萄糖液2 mL，塞上異丁基膠塞搖勻，加鋁蓋密封。用注射器從瓶中抽出5 mL 空氣再注入等體積乙炔氣體，密封針眼，28 ℃培養(yǎng)2 d。培養(yǎng)結(jié)束后，取500 μL 氣樣在氣相色譜儀上測(cè)定乙烯峰值。乙炔還原活性（acetylene reduction activity，ARA）計(jì)算公式為：

式中：K為乙烯峰高/乙炔峰高，T為絕對(duì)溫度，X為測(cè)定時(shí)的氣溫，Y為測(cè)定時(shí)的大氣壓，760 為標(biāo)準(zhǔn)大氣壓（汞柱），Z為注入乙炔的量（mL），22.4 為每1 摩爾氣體在絕對(duì)溫度和標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的體積（L），W為測(cè)定樣品的干重（g），t為注入乙炔后的反應(yīng)時(shí)間（h）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用Microsoft Excel 2007 軟件處理數(shù)據(jù)，運(yùn)用SPSS 20.0 進(jìn)行單因素方差分析，用LSD 和Duncan’s 檢驗(yàn)法多重比較進(jìn)行差異顯著性分析（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)毛葉苕子生長(zhǎng)的影響

2.1.1 不同處理下毛葉苕子的生長(zhǎng)情況 與CK 相比，單一接種菌株N3 對(duì)毛葉苕子生物量和結(jié)瘤數(shù)有增加的趨勢(shì)，且能顯著提高其根瘤固氮酶活性（表1）。單一接種菌株Vic5，毛葉苕子地上和地下部鮮重、結(jié)瘤數(shù)和根瘤固氮酶活性都顯著增加，單一接種菌株Vic5 的促生效果好于單一接種菌株N3。復(fù)合接種菌株N3 和Vic5 處理下，毛葉苕子生物量最大、結(jié)瘤數(shù)最多、根瘤固氮酶活性最高，說(shuō)明復(fù)合接種對(duì)毛葉苕子的促生效果好于單一接種。

表1 不同處理對(duì)毛葉苕子植株的影響Table 1 Effects of different treatments on V.villosa

2.1.2 不同處理下毛葉苕子的根系發(fā)育情況 相比CK，單一接種菌株N3 可顯著提高毛葉苕子根長(zhǎng)和根尖數(shù)，單一接種菌株Vic5，毛葉苕子的根系總長(zhǎng)、表面積、體積以及根尖數(shù)都有顯著提高。復(fù)合接種菌株N3 和Vic5處理下，毛葉苕子根系總長(zhǎng)、表面積、體積、根尖數(shù)達(dá)到最高，分別是對(duì)照的2.05、2.04、3.00、2.40 倍（表2）。

表2 不同處理對(duì)毛葉苕子根系的影響Table 2 Effects of different treatments on the root of V.villosa

2.2 不同處理對(duì)土壤性質(zhì)的影響

2.2.1 不同處理對(duì)土壤基礎(chǔ)理化性質(zhì)的影響 所有接菌處理對(duì)土壤pH 無(wú)顯著影響（表3）。相比CK，單一接種菌株N3 處理，土壤全磷、速效磷和速效鉀含量顯著提高；單一接種菌株Vic5 處理，土壤NH4+-N 和NO3?-N 含量顯著提高；二者復(fù)合接種處理下，土壤有機(jī)質(zhì)含量、全氮、全磷、速效鉀、NH4+-N 和NO3?-N 含量均顯著增加，分別是對(duì)照的 1.10、1.06、1.12、1.07、1.92 和 1.60 倍。

表3 不同處理對(duì)土壤性質(zhì)的影響Table 3 Effects of different treatments on soil properties

2.2.2 不同處理對(duì)土壤基礎(chǔ)呼吸的影響 土壤呼吸作用是反映土壤碳氮循環(huán)與生物活性的重要指標(biāo)。相比CK，單一接種菌株Vic5 和菌株N3+Vic5 復(fù)合處理均顯著提高了土壤基礎(chǔ)呼吸強(qiáng)度，增幅為57.14%～100.00%，單一接種菌株N3 處理下，土壤基礎(chǔ)呼吸強(qiáng)度略有升高，但并不顯著（圖1）。

圖1 不同處理對(duì)土壤基礎(chǔ)呼吸的影響Fig.1 Effects of different treatments on soil basal respiration

2.2.3 不同處理對(duì)土壤微生物量碳、氮的影響 相比CK 處理，單一接種菌株N3 處理，土壤微生物量碳、氮含量略微升高，但差異并不顯著；單一接種菌株Vic5 能有效提高土壤微生物量碳、氮含量；菌株N3+Vic5 復(fù)合處理下，土壤 MBC 和 MBN 含量最高，達(dá)168 μg·g?1和 62.58 μg·g?1，復(fù)合接種處理比單一接種處理表現(xiàn)出更好的提升效果（圖2）。

圖2 不同處理對(duì)土壤微生物量碳、氮的影響Fig.2 Effects of different treatments on soil microbial biomass carbon and soil microbial biomass nitrogen

2.2.4 不同處理對(duì)土壤固氮酶活性的影響 與CK 相比，所有接菌處理均能顯著提高土壤固氮酶活性（圖3）。單一接種菌株N3 的提升效果低于單一接種菌株Vic5 的處理；復(fù)合菌株接種處理提升效果最好，土壤固氮酶活性達(dá) C2H453.77 nmol·g?1·h?1，是對(duì)照的 1.95 倍。

圖3 不同處理對(duì)土壤固氮酶活性的影響Fig.3 Effects of different treatments on soil nitrogenase activity

3 討論

相比不接菌處理，單一接種豌豆根瘤菌菌株Vic5 和自生固氮菌菌株N3 均能促進(jìn)毛葉苕子的生長(zhǎng)，毛葉苕子在無(wú)外源氮素添加條件下，通過(guò)固氮微生物的生物固氮作用可以提供其生長(zhǎng)需要的氮素。單一接種自生固氮菌N3 不影響毛葉苕子的結(jié)瘤數(shù)，但是會(huì)促進(jìn)根瘤固氮酶活性。單一接種豌豆根瘤菌Vic5 不僅能促進(jìn)毛葉苕子結(jié)瘤，也能提高根瘤固氮酶活性，這與付萍［18］研究發(fā)現(xiàn)接種有效根瘤菌可增加箭筈豌豆根瘤數(shù)量及根瘤固氮酶活性的結(jié)論一致。復(fù)合接菌處理下的毛葉苕子生物學(xué)性狀優(yōu)于單一接種處理，相比單一接種N3 和Vic5 處理，毛葉苕子地上部生物量分別增加了90.20%和10.23%，結(jié)瘤數(shù)和根瘤固氮酶活性分別顯著增加了187.80%和103.37%、35.63%和38.14%，這和劉麗等［27］的研究結(jié)果慢生大豆根瘤菌和膠質(zhì)類芽孢桿菌雙接種可以促進(jìn)大豆生長(zhǎng)，顯著增加大豆的占瘤率和大豆產(chǎn)量一致。雙接種協(xié)同效益發(fā)生的可能原因是有一些菌株能分泌激素類物質(zhì)如吲哚乙酸（3-Indoleacetic acid，IAA），或者解磷功能，改善植物生長(zhǎng)和養(yǎng)分供應(yīng)，調(diào)控植物根瘤的產(chǎn)生和固氮酶活性；一些植物促生菌會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞壁溶解酶，促進(jìn)根瘤菌的侵染，促進(jìn)結(jié)瘤［28］；此外根瘤菌接種，還可以激活土壤中已經(jīng)存在的一些無(wú)效低活性的土著根瘤菌，進(jìn)而促進(jìn)結(jié)瘤固氮［29］。本研究所用固氮菌N3 也分泌IAA，并有解磷能力，通過(guò)改善毛葉苕子的生長(zhǎng)情況，調(diào)控根瘤的形成和發(fā)育，至于其他機(jī)制還需進(jìn)一步的試驗(yàn)證實(shí)。另外有研究表明較高氮素水平下，接種根瘤菌更有利于根瘤的著生［30?31］，本研究通過(guò)自身固氮菌N3 的輔助接種也有利于土壤氮水平的提高，從而進(jìn)一步促進(jìn)結(jié)瘤固氮達(dá)到根瘤菌與促生菌混合接種協(xié)同的優(yōu)勢(shì)［32］。

根系形態(tài)特征與植物利用土壤養(yǎng)分的效率密切相關(guān)，養(yǎng)分虧缺條件下，根系形態(tài)構(gòu)型參數(shù)有敏感的適應(yīng)性變化，研究證明植物適應(yīng)低氮脅迫的重要機(jī)制之一是對(duì)根系發(fā)育的促進(jìn)作用，這反過(guò)來(lái)也會(huì)幫助植物對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收［33］。N3 處理對(duì)毛葉苕子根系生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，與之前研究該巨大芽孢桿菌有一定的產(chǎn)IAA 和溶磷能力，且對(duì)二月蘭（Orychophragmus violaceus）根系生長(zhǎng)發(fā)育有良好的促進(jìn)作用的結(jié)果一致［34］。復(fù)合接菌對(duì)毛葉苕子根系生長(zhǎng)發(fā)育可以起到更好的促進(jìn)作用，根系總長(zhǎng)、根表面積、根體積以及根尖數(shù)等均有顯著增加。這與馬文彬等［35］研究接種根瘤菌、固氮菌和溶磷菌均能促進(jìn)箭筈豌豆根系生長(zhǎng)，且根瘤菌+固氮菌+溶磷菌復(fù)合接種對(duì)其的促進(jìn)作用優(yōu)于單一接種是一致的結(jié)果。

人工接種微生物是維持和提高土壤肥力的有效手段，所有接菌處理對(duì)土壤pH 影響不大，N3 處理下土壤速效磷和速效鉀含量最高，這與菌株N3 對(duì)土壤磷、鉀的活化作用有關(guān)［34］。根瘤菌可以增加土壤中氮素來(lái)源，同時(shí)根瘤菌脫落、殘留及分泌到土壤中的氮，可增加土壤肥力從而改良土壤，因此Vic5 處理土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量較N3 處理高。復(fù)合接菌能有效提高土壤有機(jī)質(zhì)、氮、全磷、速效磷和速效鉀含量，研究表明多種菌復(fù)合菌劑能增加土壤氮、磷、鉀的利用率，還能加速有機(jī)質(zhì)的分解，拮抗病原微生物，刺激作物生長(zhǎng)［36］。復(fù)合接菌處理下土壤基礎(chǔ)呼吸作用最強(qiáng)，微生物量碳、氮含量最高，這與復(fù)合處理下土壤有機(jī)質(zhì)和全氮含量的增加，可為土壤中微生物的生長(zhǎng)提供充足的碳源和氮源，以及根瘤菌接種能提高植物根際微生物數(shù)量有關(guān)［37］。土壤固氮酶活性在一定程度上能夠反映土壤固氮微生物固氮酶作用能力強(qiáng)弱，土壤氮素含量與固氮微生物的活動(dòng)密切相關(guān)，共生體系由于固氮微生物直接從寄主植物獲得碳水化合物作為固氮能源，其固氮能力比自生固氮微生物強(qiáng)得多［38］，因此Vic5 處理土壤固氮酶活性高于N3 處理。

總之，本研究表明復(fù)合接種豌豆根瘤菌Vic5 和固氮菌N3 能夠有效促進(jìn)毛葉苕子生長(zhǎng)，并改善土壤性質(zhì)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)單一接種兩株不同菌株對(duì)毛葉苕子生長(zhǎng)和土壤性質(zhì)的影響不同，篩選構(gòu)建合適匹配的微生物菌劑對(duì)于綠肥作物的高效種植具有重要意義。在“綠水青山就是金山銀山”的發(fā)展理念主導(dǎo)下，綠肥科研工作中如何提升輕簡(jiǎn)化高效生產(chǎn)能力，研發(fā)高效根瘤菌劑等專用產(chǎn)品非常重要［39］。當(dāng)然也有研究表明在田間條件下雙接種根瘤菌劑及解磷菌劑相較于單接種根瘤菌劑并沒有促進(jìn)大豆結(jié)瘤，提高大豆產(chǎn)量［40］。雖然根瘤菌與促生菌混合接種具有一定的優(yōu)勢(shì)，但由于田間環(huán)境的復(fù)雜性，土著微生物對(duì)根瘤菌劑的競(jìng)爭(zhēng)等［41］，都會(huì)造成效果的減弱。因此后續(xù)優(yōu)化固氮菌的發(fā)酵培養(yǎng)基來(lái)獲得更高的活菌數(shù)，篩選合適的菌劑載體，提高固氮菌劑配合根瘤菌劑的應(yīng)用效果，確定固氮菌的最優(yōu)應(yīng)用方式及與根瘤菌劑用量等方式來(lái)發(fā)揮雙接種的固氮菌劑與根瘤菌劑相應(yīng)的作用需要進(jìn)一步深化研究。

4 結(jié)論

接種豌豆根瘤菌Vic5、固氮菌N3 均能促進(jìn)毛葉苕子生物量的增加和根系發(fā)育。單一接種Vic5 對(duì)毛葉苕子的促生效果優(yōu)于單一接種N3 處理，復(fù)合接菌處理對(duì)毛葉苕子的促生效果最好。復(fù)合接菌還能有效提高土壤有機(jī)質(zhì)、土壤微生物量碳、氮含量及土壤固氮酶活性，同時(shí)能顯著提高毛葉苕子的結(jié)瘤固氮能力。