張 婷，徐水亮

鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院/湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北黃石 435000

缺氧缺血性腦病是指圍生期新生兒窒息所引起的腦缺氧缺血性損傷，是新生兒神經(jīng)系統(tǒng)異常和死亡的主要因素[1]。缺氧缺血性腦病在新生兒中的發(fā)病率為0.2%～0.4%，并且患兒的預(yù)后較差，病死率較高[2]。目前，對(duì)缺氧缺血性腦病的臨床診斷主要依靠影像學(xué)診斷結(jié)果、患兒的臨床表現(xiàn)及病史綜合進(jìn)行判斷，缺乏客觀、準(zhǔn)確且有效的血清生化標(biāo)志物[3]?？扇苄匝貥友趸兔芏戎鞍资荏w-1(sLOX-1)主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞分泌產(chǎn)生，具有誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞凋亡和促進(jìn)炎性反應(yīng)等功能，是心血管疾病診斷和治療的新興生物標(biāo)志物[4-5]。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)主要分布于心肌，當(dāng)心肌出現(xiàn)損傷時(shí)被大量分泌至血液中，是心肌損傷的臨床診斷標(biāo)志物，在急性心肌梗死和心力衰竭等心血管疾病的臨床診斷中具有一定價(jià)值[6-7]。肌酸激酶同工酶(CK-MB)主要存在于心肌，參與肌酸的代謝調(diào)節(jié)，心肌損傷時(shí)迅速釋放入血，是反映急性心肌梗死和心力衰竭的典型生化標(biāo)志物[8-9]。目前，缺氧缺血性腦病新生兒的血清學(xué)診斷標(biāo)志物仍然較少，本研究通過檢測(cè)血清sLOX-1、cTnI及CK-MB水平，旨在分析它們?cè)谌毖跞毖阅X病新生兒中的水平及其與新生兒神經(jīng)行為測(cè)評(píng)(NBNA)評(píng)分的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年2月至2019年10月本院診治的120例缺氧缺血性腦病新生兒納入觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)出生后24 h內(nèi)發(fā)生缺氧缺血性腦?。?2)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)制訂的新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]；(3)無貧血和呼吸道阻塞性疾病；(4)腦部CT結(jié)果顯示有低密度灶改變。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在遺傳代謝性疾病；(2)心肺功能異常；(3)合并其他類型腦部疾?。?4)治療期間轉(zhuǎn)院；(5)治療期間死亡，以及治療結(jié)束出院后失訪。120例缺氧缺血性腦病患兒中男67例，女53例；新生兒為其母親首胎98例，非首胎22例；出生時(shí)孕周37～43周，平均(39.88±2.61)周；患兒出生體質(zhì)量為2 190～4 310 g，平均(3 033.79±836.37)g。參考新生兒缺氧缺血性腦病分度標(biāo)準(zhǔn)[11]，將120例患兒進(jìn)一步分為輕度組(65例)、中度組(38例)和重度組(17例)。選擇同期在本院婦產(chǎn)科出生的120例健康新生兒作為對(duì)照組，其中男69例，女51例；新生兒為其母親首胎95例，非首胎25例；出生時(shí)孕周為37～42周，平均(39.15±2.13)周；出生體質(zhì)量2 235～4 408 g，平均(3 089.46±853.83)g。觀察組與對(duì)照組的性別比例、首胎比例和出生孕周等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。臨床研究開展前均與新生兒家屬簽署知情同意書，且經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過。

1.2方法 對(duì)照組新生兒于出生后立即采集3 mL靜脈血，而觀察組新生兒則分別于出生后1、2、7 d采集3 mL靜脈血。靜脈血采集后均在室溫下靜置30 min，5 000 r/min離心30 min，離心半徑12 cm，吸取上清液至另一潔凈離心管中，—80 ℃凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平。sLOX-1檢測(cè)試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：E13567，cTnI檢測(cè)試劑盒購自武漢菲恩生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：EH0348，CK-MB檢測(cè)試劑盒購自蘇州瑞諾德生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：ML0447。

1.3觀察指標(biāo) 于喂養(yǎng)1 h后檢測(cè)各組新生兒的NBNA評(píng)分[12]，主要包括行為能力評(píng)估(6項(xiàng))、原始反射評(píng)估(3項(xiàng))、主動(dòng)肌張力評(píng)估(4項(xiàng))和被動(dòng)肌張力評(píng)估(4項(xiàng))，總分<35分為腦損傷，35～36分為可疑腦損傷，>36分為正常。比較對(duì)照組(出生后1 d)和觀察組(出生后1 d)的血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平，比較輕度組、中度組和重度組在出生后1、2、7 d的血清sLOX-1、cTnI、CK-MB水平及NBNA評(píng)分。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組與觀察組的血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平比較 觀察組血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)照組與觀察組的血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平比較

2.2不同程度缺氧缺血性腦病患兒血清sLOX-1、cTnI、CK-MB水平及NBNA評(píng)分動(dòng)態(tài)變化 出生后1、2、7 d，重度組血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平明顯高于中度組和輕度組，而NBNA評(píng)分明顯低于中度組和輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。出生后1、2、7 d，中度組血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平明顯高于輕度組，而NBNA評(píng)分明顯低于輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析 血清sLOX-1、cTnI、CK-MB水平與NBNA評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.907、-0.855、-0.835，P<0.05)，見圖1。

2.4血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平對(duì)缺氧缺血性腦病新生兒的診斷價(jià)值 血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值明顯高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)，見表3。

表2 不同程度缺氧缺血性腦病患兒血清sLOX-1、cTnI、CK-MB水平及NBNA評(píng)分動(dòng)態(tài)變化

組別nCK-MB(ng/mL)1 d2 d7 dNBNA評(píng)分(分)1 d2 d7 d輕度組656.81±2.208.62±2.786.02±1.9434.76±5.7032.57±5.3436.69±6.01中度組3818.69±5.66*20.48±6.21*19.43±5.89*29.77±5.62*27.61±5.21*31.42±5.93*重度組1743.85±8.18*#47.05±7.07*#45.72±8.70*#5.26±1.46*#4.34±1.21*#22.42±6.23*#F14.73713.11116.33418.01918.4895.365P<0.001<0.001<0.001 <0.001<0.001<0.001

注：A為血清sLOX-1水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析；B為血清cTnI水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析；C為血清CK-MB水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析。

表3 血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平對(duì)缺氧缺血性腦病新生兒的診斷價(jià)值

3 討 論

缺氧缺血性腦病主要由腦部缺氧缺血所致，目前普遍認(rèn)為細(xì)胞代謝紊亂、免疫功能失調(diào)、炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和圍生期缺血再灌注等是缺氧缺血性腦病的主要發(fā)病機(jī)制[13-14]，因此，缺氧缺血性腦病是多因素作用的結(jié)果。缺氧缺血性腦病的發(fā)病過程較為復(fù)雜，病死率高且后遺癥多[15]，因此，尋找與缺氧缺血性腦病發(fā)病密切相關(guān)的血清標(biāo)志物，并將其應(yīng)用于缺氧缺血性腦病患兒的診斷和治療中具有重要的臨床意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，缺氧缺血性腦病患兒血清sLOX-1水平明顯升高，并且隨患兒病情嚴(yán)重程度增加其血清sLOX-1水平也隨之升高，表明sLOX-1水平升高與缺氧缺血性腦病的發(fā)生及病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切。分析其原因可能是由于在缺氧缺血性腦病發(fā)病過程中存在嚴(yán)重的氧化應(yīng)激反應(yīng)，氧化應(yīng)激過程中產(chǎn)生大量的氧自由基并使低密度脂蛋白發(fā)生氧化作用。KATTOOR等[16]的研究報(bào)道顯示，sLOX-1能夠結(jié)合氧化型的低密度脂蛋白。STANKOVA等[17]的研究結(jié)果顯示，sLOX-1與低密度脂蛋白結(jié)合會(huì)導(dǎo)致低密度脂蛋白的大量降解，從而產(chǎn)生脂質(zhì)代謝紊亂，因此，缺氧缺血性腦病患兒血清sLOX-1水平升高是一種反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，sLOX-1能夠中和氧化應(yīng)激產(chǎn)生的氧化型低密度脂蛋白，減少氧化型低密度脂蛋白對(duì)心腦血管造成的損傷，同時(shí)sLOX-1水平異常升高會(huì)促進(jìn)低密度脂蛋白的異常降解，導(dǎo)致患兒容易發(fā)生脂質(zhì)代謝紊亂，致使病情加劇[18]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，血清sLOX-1水平與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，表明sLOX-1水平升高可能引起患兒的神經(jīng)功能損傷。分析其原因可能是由于sLOX-1水平升高與氧化應(yīng)激的發(fā)生密切相關(guān)，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的過氧化物分子及超氧化物分子具有較強(qiáng)的氧化性，會(huì)對(duì)細(xì)胞膜上的受體蛋白造成氧化損傷，從而抑制神經(jīng)元細(xì)胞的增殖和損傷修復(fù)等過程，導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞大量死亡進(jìn)而引起患兒出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷[19]。

本研究結(jié)果也表明，cTnI也與缺氧缺血性腦病的發(fā)生及病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切。分析其原因可能是由于cTnI參與炎性反應(yīng)的發(fā)生，ZHANG等[20]的研究報(bào)道顯示，cTnI能夠活化腫瘤壞死因子-α(TNF-α)信號(hào)通路，由于TNF-α信號(hào)通路下游靶基因?yàn)榘准?xì)胞介素和腫瘤生長(zhǎng)因子等，因此在缺氧缺血性腦病患兒血清cTnI水平升高會(huì)活化TNF-α信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)炎性反應(yīng)的發(fā)生。白細(xì)胞介素和腫瘤生長(zhǎng)因子等作用于組織細(xì)胞，并引起組織細(xì)胞損傷，導(dǎo)致局部組織壞死。隨著血清cTnI水平升高，心腦血管組織壞死程度也隨之增加，患兒病情逐漸加劇[21]。同時(shí)GU等[22]的研究發(fā)現(xiàn)，cTnI水平異常升高會(huì)抑制腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信號(hào)通路的活化，因此，在缺氧缺血性腦病患兒中血清cTnI水平異常升高會(huì)抑制AMPK信號(hào)通路，引起患兒神經(jīng)元細(xì)胞糖代謝異常，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞損傷和凋亡，使患兒病情加劇。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，cTnI水平升高也會(huì)引起患兒的神經(jīng)功能損傷。分析其原因可能是由于cTnI水平升高會(huì)促進(jìn)炎癥因子的釋放，導(dǎo)致患兒腦部炎性反應(yīng)的發(fā)生。已有研究結(jié)果顯示，腦部炎性反應(yīng)的發(fā)生與神經(jīng)元壞死之間存在正相關(guān)性[23]，因此，缺氧缺血性腦病患兒的腦部炎性反應(yīng)會(huì)促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致患兒的神經(jīng)功能損傷。

同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)CK-MB參與缺氧缺血性腦病的發(fā)病過程，與患兒病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切，并且與患兒的神經(jīng)功能損傷密切相關(guān)。分析其原因可能是由于腦組織發(fā)生缺氧缺血性損傷時(shí)，CK-MB大量釋放至腦部?jī)?nèi)環(huán)境中。EL-MENYAR等[24]的研究結(jié)果顯示，CK-MB能夠插入到神經(jīng)元細(xì)胞膜上，并促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷，同時(shí)抑制神經(jīng)元的自我修復(fù)和再生功能，因此，缺氧缺血性腦病患兒血清CK-MB水平升高會(huì)促進(jìn)腦部損傷。同時(shí)，已有研究結(jié)果顯示，CK-MB能夠抑制細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝和糖代謝過程[25]，因此，缺氧缺血性腦病患兒血清CK-MB水平升高會(huì)抑制神經(jīng)元細(xì)胞的脂質(zhì)代謝和糖代謝過程，使神經(jīng)元細(xì)胞的增殖和修復(fù)功能下降，導(dǎo)致患兒病情加劇。同時(shí)，LI等[26]的研究結(jié)果顯示，CK-MB是絲氨酸-蘇氨酸激酶(AKT)信號(hào)通路的下游靶基因，缺氧缺血性腦病發(fā)病過程中可能誘導(dǎo)AKT信號(hào)通路的活化，進(jìn)而促進(jìn)CK-MB的表達(dá)，使患兒血清CK-MB水平升高。

本研究結(jié)果還顯示，血清sLOX-1、cTnI和CK-MB聯(lián)合診斷缺氧缺血性腦病新生兒的價(jià)值較高，ROC曲線下面積為0.879，靈敏度和特異度分別為87.26%和83.79%，明顯優(yōu)于sLOX-1、cTnI和CK-MB單獨(dú)檢測(cè)的價(jià)值。提示檢測(cè)新生兒血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平可作為診斷缺氧缺血性腦病的重要生化標(biāo)志物。

綜上所述，缺氧缺血性腦病新生兒血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平異常升高，并且隨患兒病情加劇逐漸升高。血清sLOX-1、cTnI和CK-MB水平與NBNA評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)，在缺氧缺血性腦病的診斷和治療中具有一定臨床價(jià)值。