吳麗娜 范曉萌 武爽 郭紅艷 徐晶 劉穎 黃丹璇 張春晶趙正林

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，齊齊哈爾 161006）

糖尿病周圍神經(jīng)病變（diabetic peripheral neu-ropathy，DPN）是目前糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，發(fā)病率高達(dá)50%以上；隨著病程延續(xù)，嚴(yán)重者會造成截肢，致殘率較高。DPN的發(fā)病機制復(fù)雜，至今尚未明確，多數(shù)研究者認(rèn)為其與體內(nèi)代謝紊亂導(dǎo)致的神經(jīng)營養(yǎng)因子含量變化、微循環(huán)障礙與血管損傷、氧化應(yīng)激、細(xì)胞炎癥因子的堆積等因素有關(guān)［1‐2］。因其復(fù)雜的發(fā)病機制，臨床上DPN尚無規(guī)范而效果良好的治療藥物。目前，中藥治療DPN受到廣泛關(guān)注，而人參是常用的名貴藥材，具有大補元氣、養(yǎng)血生津、寧心益智等功效。人參皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1，G‐Rg1）是人參的主要活性成分，具有多種生物學(xué)功效，包括調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)、增加機體免疫功能、調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤、抗氧化等多方面作用，其中包括對神經(jīng)組織的再生與營養(yǎng)改善作用和保護作用［3‐4］。本研究利用鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）誘發(fā)大鼠Ⅱ型糖尿病及其周圍神經(jīng)病變模型，觀察G‐Rg1對DPN結(jié)構(gòu)和功能的改善作用；同時，檢測血清和組織中的氧化應(yīng)激和炎癥因子水平，檢測氧化應(yīng)激信號通路中核因子E2相關(guān)因子（nuclear fac-tor erythroid‐2‐related factor 2，Nrf2）及其下游基因血紅素加氧酶‐1（heme oxygenase‐1，HO‐1）以及炎癥信號通路中NF‐κB的表達(dá)變化，探索G‐Rg1對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)損傷的保護作用及其機制，為G‐Rg1的進一步研發(fā)提供可靠的基礎(chǔ)實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑G‐Rg1購自韓國嶺南藥業(yè)公司，純度高于98%；STZ購自美國Sigma公司；鹽酸二甲雙胍片（0.85 g/片）購自中美上海施貴寶制藥有限公司；兔抗大鼠Nrf2、HO‐1、NF‐κB抗體、BCA蛋白濃度測定試劑盒購自美國Cell Signaling Technology；TNF‐α（貨號F16960）和IL‐6（貨號F15870）檢測試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司；TNF‐α、IL‐6和GAPDH引物由上海生工生物技術(shù)公司合成；TRIzol總RNA提取試劑盒、qPCR試劑盒購自美國Invitro-gen；HiFiScript cDNA合成試劑盒購自康為世紀(jì)生物科技有限公司；ROS測定試劑盒、MDA測定試劑盒購自南京建成科技有限公司。

1.1.2 儀器MDABL‐420E+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；瑞典LKB‐2088型超薄切片機（瑞典LKB公司）；EM‐1200EX型透射電子顯微鏡（日本JEOLJ公司）；電泳設(shè)備以及圖像分析系統(tǒng)（美國Bio‐Rad公司）；Q5實時熒光定量PCR儀（美國ABI公司）。

1.1.3 實驗動物雄性健康SD大鼠體重為180～200 g，由齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供和飼養(yǎng)。在溫度20～25℃、濕度30%～35%自動空氣清潔設(shè)備條件下飼養(yǎng)，自由攝食。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立、分組和給藥取雄性健康SD大鼠80只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機選取10只為正常對照組，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)；其余大鼠高糖高脂喂養(yǎng)4周后，禁食8 h，以0.1 mmol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH4.2）將STZ配成1%的溶液，40 mg/kg腹腔注射大鼠，正常對照組大鼠注射等量檸檬酸鈉緩沖液。注射藥物72 h和2周后，血糖測試儀取尾靜脈血測空腹血糖，2次檢測均大于11.1 mmol/L作為糖尿病大鼠模型［5］。糖尿病大鼠隨機分為模型組、G‐Rg1小劑量組、G‐Rg1大劑量組和二甲雙胍（Metformin）陽性對照組，10只/組。分組后立即開始給藥，G‐Rg1小劑量組和大劑量組分別每日灌胃1次劑量分別為10 mg/kg和30 mg/kg的G‐Rg1，二甲雙胍陽性對照組每日灌胃1次100 mg/kg的二甲雙胍，連續(xù)給藥8周［6］。正常對照組和模型組灌胃等量無菌蒸餾水。

1.2.2 坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的檢測［7］末次給藥1 h后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，俯臥位固定，沿坐骨神經(jīng)走行切開皮膚，暴露坐骨神經(jīng)，利用BL‐420E+生物機能實驗系統(tǒng)記錄近、遠(yuǎn)端坐骨神經(jīng)產(chǎn)生動作電位的潛伏期，測定兩記錄電極間的距離，按公式計算坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度。運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度（motor nerve conduction velocity，MNCV）=記錄電極間距離/動作電位潛伏期差值；感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度（sensory nerve conduction velocity，SNCV）測定時將刺激電極置于同側(cè)足背，記錄電極置于近端坐骨切跡處的電位。SNCV=刺激電極與記錄電極間距離/潛伏期。重復(fù)刺激3次后取平均值。測定坐骨神經(jīng)運動傳導(dǎo)速度后，取大鼠右側(cè)部分坐骨神經(jīng)標(biāo)本，立即冷凍備用于電鏡觀察。

1.2.3 電子顯微鏡觀察坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化取坐骨神經(jīng)，經(jīng)戊二醛、餓酸雙重固定以及系列丙酮脫水，EPON812和815混合樹脂包埋后，進行半薄切片，經(jīng)醋酸鈾‐檸檬酸鉛雙重染色后，透射電子顯微鏡觀察坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)及無髓神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)變化。

1.2.4 測定空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）及血清中炎癥因子TNF‐α和ⅠL‐6水平末次給藥后1 h，取尾靜脈血用血糖測試儀檢測各組大鼠FBG。實驗結(jié)束后，收集大鼠全血，離心后取血清，ELISA法測定各組大鼠血清中炎癥因子TNF‐α和IL‐6水平，實驗嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.5 坐骨神經(jīng)組織中MDA和ROS的含量測定取左側(cè)坐骨神經(jīng)組織后用0.9%生理鹽水制備勻漿，離心后取上清液，按照試劑盒說明測定各組坐骨神經(jīng)MDA和ROS含量。

1.2.6 qPCR法 檢 測 坐 骨 神 經(jīng)TNF‐α和ⅠL‐6 mRNA表達(dá)處死實驗動物后，提取坐骨神經(jīng)總RNA，按照試劑盒說明書逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，實時定量PCR儀擴增。各引物序列如下：TNF‐α，F(xiàn)：5′‐AGGGAATTGTGGCTCTGGT‐3′，R：5′‐AGGCCACT‐ACTTCAGCGTCT‐3′，擴增片段為190 bp；IL‐6，F(xiàn)：5′‐ATTCTGTCTCGAGCCCACCA‐3′，R：5′‐AGGCA‐ACTGGCTGGAAGTCT‐3′，擴增片段為133 bp；GAP-DH，F(xiàn)：5′‐GACAAGATGGTGAACTGTCGGT‐3′，R：5′‐CTTTGGCATCGTGGAAGGGCTC‐3′，擴增片段為108 bp。擴增條件為95℃預(yù)變性2 min，95℃變性30 s，58℃退火30 s、72℃延伸30 s，共進行38個循環(huán)。利用qPCR數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)軟件，以相對定量值進行統(tǒng)計分析。

1.2.7 Western blot檢測蛋白水平取坐骨神經(jīng)組織勻漿上清液，按照蛋白濃度檢測試劑盒說明進行蛋白質(zhì)定量。用已獲得的各組蛋白質(zhì)按照常規(guī)操作方法進行電泳、轉(zhuǎn)膜，分別加入特異性Ⅰ抗4℃反應(yīng)24 h，再加入Ⅱ抗孵育1 h后，ECL顯色。利用圖像分析系統(tǒng)掃描，以β‐actin為對照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理采用Grappad prism 5.0統(tǒng)計軟件進行分析。數(shù)據(jù)均采用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（One‐Way ANOVA），組間兩兩比較采用Newman-Keuls法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 G‐Rg1對糖尿病大鼠空腹血糖及坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV的改善作用由表1可知，模型組大鼠FBG顯著高于正常對照組，而G‐Rg1大劑量組FBG與模型組相比明顯降低（P＜0.05），G‐Rg1小劑量組大鼠FBG與模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；G‐Rg1大劑量組大鼠FBG與G‐Rg1小劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV與正常對照組相比明顯減慢（P＜0.05）；G‐Rg1連續(xù)給藥8周后，G‐Rg1小劑量組和大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV均有改善（P＜0.05），同時，G‐Rg1大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV高于G‐Rg1小劑量組（P＜0.05），表現(xiàn)出劑量依賴性。

2.2 G‐Rg1保護糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化圖1顯示，透射電鏡觀察坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化如下：正常對照組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整，髓鞘質(zhì)膜電子密度均勻，呈同心圓狀排列整齊，層次明顯，線粒體結(jié)構(gòu)完整，可見微管和微絲分布均勻。模型組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維明顯變性，多處可見空泡狀變性，神經(jīng)纖維多處有質(zhì)膜分離形成裂隙或扭曲，電子密度不均勻，軸索腫脹或變形；無髓神經(jīng)纖維的線粒體破壞，微管和微絲結(jié)構(gòu)不均勻；G‐Rg1小劑量組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)有輕微髓鞘脫離，質(zhì)膜層次明顯，電子密度比較均勻；G‐Rg1大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)完整，無板層分離現(xiàn)象，未見空泡變性，線粒體無腫脹，嵴未見斷裂，微管、微絲分布均勻，電子密度一致。

圖1 G‐Rg1改善糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化（電鏡，×4 000）Fig.1 Improvement of ultrastructural changes in sciatic nerve by G‐Rg1（electron microscopy，×4 000）

圖2 G‐Rg1減 少 糖 尿 病 大 鼠 坐 骨 神 經(jīng)TNF‐α和IL‐6 mRNA表達(dá)Fig.2 G‐Rg1 decreased TNF‐α and IL‐6 mRNA expres-sions in sciatic nerve tissues in diabetic rats

表1 G‐Rg1對糖尿病大鼠空腹血糖及坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV的改善作用（±s，n=10）Tab.1 Therapeutic effects of G‐Rg1 on fasting blood glu-cose levels，MNCV and SNCV in diabetic rats（±s，n=10）

表1 G‐Rg1對糖尿病大鼠空腹血糖及坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV的改善作用（±s，n=10）Tab.1 Therapeutic effects of G‐Rg1 on fasting blood glu-cose levels，MNCV and SNCV in diabetic rats（±s，n=10）

Note：1）P＜0.05 vs Control group；2）P＜0.05 vs Model group；3）P＜0.05 vs Low G‐Rg1 group.

SNCV（m/s）38.89±4.22 18.58±3.651）23.97±3.292）28.65±4.582）3）24.36±3.772）Treatment Control Model Low G‐Rg1 High G‐Rg1 Metformin FBG（mmol/L）5.68±1.04 21.05±5.141）17.98±4.08 12.89±2.472）3）11.65±2.852）MNCV（m/s）40.56±4.88 25.34±3.141）30.97±5.292）38.38±6.482）3）33.48±5.092）

圖3 G‐Rg1改善糖尿病大鼠Nrf2、HO‐1和NF‐κB總蛋白表達(dá)Fig.3 Improvement of the protein expressions of Nrf2，HO‐1 and NF‐κB in the sciatic nerve by G‐Rg1

表2 G‐Rg1降低糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)MDA和ROS以及血清TNF‐α和IL‐6的水平（±s，n=10）Tab.2 G‐Rg1 reduced levels of MDA and ROS of sciatic nerve tissues and concentrations of TNF‐α and IL‐6 of serumin di-abetic rats（±s，n=10）

表2 G‐Rg1降低糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)MDA和ROS以及血清TNF‐α和IL‐6的水平（±s，n=10）Tab.2 G‐Rg1 reduced levels of MDA and ROS of sciatic nerve tissues and concentrations of TNF‐α and IL‐6 of serumin di-abetic rats（±s，n=10）

Note：1）P＜0.05 vs Control group；2）P＜0.05 vs Model group；3）P＜0.05 vs Low G‐Rg1 group.

IL‐6（pg/ml）35.47±4.15 78.91±8.251）69.87±8.112）40.62±5.122）3）48.66±5.732）Treatment Control Model Low G‐Rg1 High G‐Rg1 Metformin MDA（nmol/L）5.28±0.98 10.23±1.251）8.26±1.622）6.88±1.332）3）8.84±1.962）ROS（U/mg prot）108.64±12.85 242.64±32.661）206.87±30.262）139.77±11.422）3）213.75±25.672）TNF‐α（pg/ml）43.26±5.15 88.35±9.141）79.72±8.832）48.37±5.082）3）58.78±6.332）

2.3 G‐Rg1降低糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)MDA和ROS以及血清中TNF‐α和ⅠL‐6水平由表2可知，模型組大鼠坐骨神經(jīng)組織MDA和ROS水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；G‐Rg1小劑量和大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)組織中MDA和ROS水平明顯受到抑制（P＜0.05）；G‐Rg1大劑量組MDA和ROS水平低于G‐Rg1小劑量組（P＜0.05），表現(xiàn)出劑量依賴性。ELISA檢測各組大鼠血清中TNF‐α和IL‐6的變化如下：與正常對照組相比，模型組大鼠血清中TNF‐α和IL‐6水平明顯升高（P＜0.05）；G‐Rg1小劑量和G‐Rg1大劑量組大鼠血清中TNF‐α和IL‐6水平比模型組顯著降低（P＜0.05）；G‐Rg1大劑量組血清中TNF‐α和IL‐6明顯低于G‐Rg1小劑量組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且呈劑量依賴性。

2.4 G‐Rg1減少糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)TNF‐α和ⅠL‐6 mRNA表達(dá)與正常對照組相比，模型組大鼠坐骨神經(jīng)TNF‐α和IL‐6 mRNA表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；G‐Rg1小劑量和G‐Rg1大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)TNF‐α和IL‐6 mRNA比模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。

2.5 G‐Rg1改善糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)Nrf2、HO‐1和NF‐κB總蛋白表達(dá)由圖3可知，模型組Nrf2和HO‐1表達(dá)明顯低于正常對照組（P＜0.05）；與模型組相比，G‐Rg1小劑量和G‐Rg1大 劑 量 組Nrf2和HO‐1表達(dá)增高（P＜0.05）；G‐Rg1大劑量組大鼠坐骨神經(jīng)Nrf2和HO‐1比G‐Rg1小劑量組明顯增多（P＜0.05），顯示出劑量依賴性。模型組NF‐κB表達(dá)明顯高于正常對照組（P＜0.05）；與模型組相比，G‐Rg1小劑量和G‐Rg1大劑量組NF‐κB表達(dá)明顯受到抑制（P＜0.05）。

3 討論

DPN是糖尿病患者常見的晚期并發(fā)癥之一，發(fā)病率高，但臨床上還沒有療效顯著的藥物。因此，目前對DPN發(fā)病機制及其治療的研究是眾多學(xué)者關(guān)注的熱點問題［8‐9］。本研究利用STZ制作糖尿病大鼠模型，隨著病程延長達(dá)到造模后8周時，模型組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV和SNCV明顯減慢，符合DPN神經(jīng)損傷的功能指標(biāo)。同時利用電鏡觀察，可見DPN大鼠坐骨神經(jīng)多處有明顯的超微結(jié)構(gòu)變化。這些功能與形態(tài)學(xué)的變化類似于人的DPN發(fā)病過程。

本研究發(fā)現(xiàn)G‐Rg1小劑量和大劑量治療對DPN大鼠坐骨神經(jīng)有明顯的保護作用。已有文獻報道G‐Rg1可有效降低糖尿病大鼠血糖水平，升高胰島素和C肽，抑制體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)，調(diào)節(jié)糖代謝作用［10‐11］。本研究發(fā)現(xiàn)，G‐Rg1干預(yù)后，G‐Rg1大劑量組大鼠空腹血糖比模型組明顯降低；小劑量組降血糖效果不明顯，但仍然對DPN有療效。因此認(rèn)為G‐Rg1對神經(jīng)組織的營養(yǎng)與保護作用不僅源于其降血糖作用，也源于其對神經(jīng)組織的直接作用。

DPN的發(fā)生與多種機制相關(guān)，如非酶促蛋白糖基化、氧化應(yīng)激、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏和炎癥級聯(lián)反應(yīng)通路的激活等，其中氧化應(yīng)激為其最重要、最普遍的機制之一。長期的高血糖誘導(dǎo)氧化應(yīng)激狀態(tài)，體內(nèi)產(chǎn)生過多的ROS，使機體對抗氧化功能的負(fù)荷過重，最終導(dǎo)致體內(nèi)氧化與抗氧化調(diào)節(jié)失衡，從而影響神經(jīng)細(xì)胞功能，引起神經(jīng)組織損傷。在此過程中，最受關(guān)注的是Nrf2和NF‐kB信號通路相關(guān)基因的表達(dá)［12‐14］。Nrf2和NF‐kB通路是體內(nèi)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵途徑。Nrf2是新型核轉(zhuǎn)錄因子，是CNC亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄激活因子家族成員，在代謝活躍的器官中高表達(dá)，是調(diào)控氧化與抗氧化系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)因子，維持氧化還原的相對平衡。其主要機制為正常情況下，Nrf2與細(xì)胞內(nèi)的伴侶蛋白Kelch‐like ECH相關(guān)蛋白1（Ke-ap1）結(jié)合抑制其激活，但處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時，在ROS的作用下Keap1與Nrf2分離，使Nrf2迅速進入核內(nèi)，啟動下游基因的轉(zhuǎn)錄［15］。尤其是在核內(nèi)與特異性作用元件ARE結(jié)合，上調(diào)HO‐1表達(dá)，發(fā)揮細(xì)胞的自我防御功能。因為HO‐1具有較強抗氧化活性的同時也參與抗炎癥因子的表達(dá)并調(diào)節(jié)各種免疫應(yīng)答，抑制細(xì)胞凋亡等功能。多數(shù)研究報道，氧化應(yīng)激狀態(tài)下，組織中Nrf2和HO‐1表達(dá)明顯受到抑制，因此提出上調(diào)Nrf2和HO‐1的表達(dá)作為DPN治療的新靶點［16‐17］。本 研究 發(fā)現(xiàn)，DPN大 鼠 血清 中ROS和MDA水平升高，可以判斷處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，同時坐骨神經(jīng)Nrf2與HO‐1表達(dá)明顯降低，符合氧化與抗氧化失衡導(dǎo)致細(xì)胞自我保護機制破壞造成組織損傷的理論。NF‐κB是一種核轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞的增殖分化及免疫應(yīng)答相關(guān)的信號通路，對啟動細(xì)胞內(nèi)炎癥因子表達(dá)起重要作用［18］。在正常生理活動時，NF‐κB與IκB在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)結(jié)合形成多聚體，表現(xiàn)為無活性的NF‐κB。在DPN的發(fā)病過程中，高血糖導(dǎo)致細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)堆積的ROS和其他細(xì)胞因子可激活I(lǐng)κB激酶（IKK），使之發(fā)生磷酸化導(dǎo)致其與NF‐κB解離，游離的NF‐κB進入細(xì)胞核內(nèi)啟動炎癥因子TNF‐α和IL‐6等的表達(dá)［19］。TNF‐α是炎癥反應(yīng)中重要的炎癥介質(zhì)之一，能激活各種炎癥細(xì)胞增加血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，促使其他細(xì)胞因子的合成與釋放。IL‐6能誘導(dǎo)B細(xì)胞分化并產(chǎn)生抗體，促進T細(xì)胞活化增殖，參與機體免疫應(yīng)答，介導(dǎo)并加快炎癥反應(yīng)進程。長期的高糖環(huán)境下，TNF‐α和IL‐6同時參與胰島素抵抗和炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和微血管病變引起神經(jīng)損傷從而加快DPN發(fā)生。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，破壞NF‐κB與其他各種核轉(zhuǎn)錄因子的相對穩(wěn)定和動態(tài)平衡會導(dǎo)致神經(jīng)組織損傷［9，14］。本研究發(fā)現(xiàn)，DPN大鼠坐骨神經(jīng)NF‐κB表達(dá)明顯增高，血清和坐骨神中的TNF‐α和IL‐6水平也增高，提示NF‐κB通路的激活誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)，不管在全身還是局部組織的炎癥均在DPN的病程中發(fā)揮作用，促進神經(jīng)損傷。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，DPN是因消渴日久，氣陰兩虛，陰陽氣血虧虛，血行不暢，筋脈肌肉失養(yǎng)所致。二甲雙胍為2型糖尿病臨床治療的常用藥物，具有降糖效果和抗炎作用，且具有價格低廉、治療效果明確等優(yōu)點。但根據(jù)DPN發(fā)病機制的特點，治療上提出以益氣養(yǎng)陰和溫陽通絡(luò)為原則，利用中藥藥理作用多途徑、多靶點、多系統(tǒng)的優(yōu)勢，開發(fā)多種中醫(yī)藥復(fù)方解決治療DPN的難點［20］。人參作為藥中之王，是常用的名貴中藥材，具有補氣固脫、寧心益智、養(yǎng)血生津、補脾益肺和大補元氣之功效，能夠調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、改善心肌功能、增加機體免疫功能、調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤、抗氧化等。目前已經(jīng)從人參中分離出40余種具有藥理活性的單體成分，如人參皂苷Rg1、Rg3、Rb1、Re等。其中人參皂苷Rg1是應(yīng)用最為廣泛的單體成分，其對神經(jīng)組織的調(diào)理和營養(yǎng)作用備受關(guān)注［21‐22］。因此，本實驗觀察到G‐Rg1大、小劑量組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比模型組明顯增高，同時電鏡觀察坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化明顯改善，提示G‐Rg1對神經(jīng)組織具有良好的營養(yǎng)作用，可促進周圍神經(jīng)組織再生，逐漸修復(fù)損傷的神經(jīng)。為進一步證實G‐Rg1對坐骨神經(jīng)的保護機制，本研究發(fā)現(xiàn)，G‐Rg1連續(xù)干預(yù)8周后，G‐Rg1治療組大鼠坐骨神經(jīng)組織和血清中MDA、ROS水平明顯受到抑制，提示G‐Rg1可有效清除體內(nèi)堆積的MDA和ROS，對坐骨神經(jīng)組織的氧化應(yīng)激有較好的改善作用，緩解氧化應(yīng)激對神經(jīng)的損傷，防止DPN進一步加重。同時G‐Rg1干預(yù)后，治療組大鼠坐骨神經(jīng)組織中Nrf2和HO‐1表達(dá)增多，而NF‐κB表達(dá)明顯抑制而減少體內(nèi)促炎因子TNF‐α和IL‐6表達(dá)。通過以上實驗結(jié)果可以推測，G‐Rg1對DPN大鼠周圍神經(jīng)具有明顯的保護作用和營養(yǎng)作用，主要表現(xiàn)在以氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)為主的DPN的發(fā)病機制中，通過氧化與抗氧化、炎癥因子表達(dá)通路中Nrf2、HO‐1及NF‐κB的相互調(diào)節(jié)，能夠發(fā)揮維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)，減少細(xì)胞炎癥從而保護神經(jīng)的作用。團隊后期實驗將進一步明確G‐Rg1的藥理作用及其相關(guān)的信號通路，為DPN治療藥物的開發(fā)提供更加可靠而準(zhǔn)確的基礎(chǔ)實驗依據(jù)。