于前進 洪磊 楊梟雄 林斌 李文鋒 唐家廣

坐骨神經(jīng)痛是脊柱外科常見疾病，人群中發(fā)病率高達 40%，其中椎間盤來源的坐骨神經(jīng)痛占 85%[1]。早在 80年前，Mixter 等[2]就報道了椎間盤突出和坐骨神經(jīng)痛的關(guān)系。通過手術(shù)治療可使許多患者的癥狀緩解，但仍有 3% 的患者術(shù)后出現(xiàn)并發(fā)癥及慢性頑固性疼痛[3]。神經(jīng)根受壓程度與腰痛及下肢放射性疼痛程度也不完全一致，提示除了機械性壓迫因素外，炎性刺激等非壓迫因素在盤源性坐骨神經(jīng)痛的產(chǎn)生中發(fā)揮了作用。

星型膠質(zhì)細胞具有營養(yǎng)支持、調(diào)節(jié)突觸傳遞、參與神經(jīng)損傷修復(fù)、維護血管內(nèi)皮細胞穩(wěn)定及調(diào)節(jié)血流量[4]等作用。在神經(jīng)病理性疼痛和炎性疼痛模型中星形膠質(zhì)細胞均可被激活[5-6]。膠質(zhì)纖維酸性蛋白 ( glial fibrillary acidic protein，GFAP ) 可在成熟的星形膠質(zhì)細胞表達。星形膠質(zhì)細胞激活后GFAP 表達明顯增加，故可通過檢測 GFAP 來判斷星形膠質(zhì)細胞的活化狀態(tài)。

目前大鼠間盤刺破、神經(jīng)根結(jié)扎等誘發(fā)坐骨神經(jīng)痛的大鼠模型眾多，但與突出的椎間盤對神經(jīng)根的直接壓迫和炎性物質(zhì)刺激的病理生理過程仍有很大的差異。Hou 等[7]設(shè)計的大鼠模型很好地模擬了突出的椎間盤組織對神經(jīng)根的機械性壓迫和炎性物質(zhì)刺激。不同刺激模式下的坐骨神經(jīng)痛由不同的致病機制所致，推測在不同刺激模式誘致的坐骨神經(jīng)疼痛模型中，星形膠質(zhì)細胞活化也應(yīng)會有所不同。本研究旨在探討 Hou 設(shè)計的模型中大鼠機械刺激縮足閾值 ( paw withdrawal mechanical threshold，PWMT ) 變化、脊髓背角星形膠質(zhì)細胞活化狀況及兩者相關(guān)性。

材料與方法

一、準備實驗大鼠

選取健康完好的 90～100 日齡SD 雄性大鼠，體重 210～270 g，共 100 只。由解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心骨科實驗室實驗動物中心提供并飼養(yǎng)。設(shè)置動物房和實驗室溫度在 22 ℃～26 ℃。燈照時間為每天8∶00～20∶00，行為學(xué)實驗設(shè)定在 9∶00～17∶00間進行。實驗過程嚴格遵循國際實驗動物保健指導(dǎo)方針綱要的要求進行[8]。

二、實驗?zāi)Ｐ徒?/h3>

對大鼠稱重并行藥物腹腔注射 ( 3% 戊巴比妥鈉，50 mg / kg ) 麻醉。先用 1-0 絲線在近端結(jié)扎鼠尾，再用尖刀在鼠尾近端 ( 距鼠尾起始 2 cm 處 ) 切斷鼠尾，用 3-0 絲線間斷縫合斷端，按建模需要留取大鼠自體尾部纖維環(huán)、髓核等組織。選取后背正中切口，備皮消毒，以髂后上棘水平中點為中心，沿后背正中行 2 cm 縱向切口，鈍性分離至棘突，沿左側(cè)椎板分離并顯露橫突，確認并用咬骨鉗咬除L4～5左側(cè)關(guān)節(jié)突及左半部分椎板，顯露并游離 L5神經(jīng)根和背根節(jié)，用不同組織對 L5神經(jīng)根造成壓迫刺激 ( 具體見下文 )。生理鹽水沖洗，絲線逐層縫合關(guān)閉切口。

三、實驗分組及方法

用隨機數(shù)字表法將大鼠分為椎間盤壓迫 ( compression，CP ) 組、非壓迫的炎性刺激組和空白對照( Sham ) 組。每組含 SD大鼠20只，其中8 只用于行為學(xué)實驗，12 只用于取材行組織學(xué)實驗。具體分組如下：( 1 ) CP 組：將大鼠自體尾部完整的椎間盤，放置于左側(cè) L5神經(jīng)根背側(cè)直接壓迫神經(jīng)根；( 2 ) 非壓迫的炎性刺激組包括間盤移植 ( disc，DC ) 組：將大鼠自體尾部的椎間盤組織 ( 包括髓核和纖維環(huán)，各約 2 mg ) 無壓迫放置于左側(cè) L5神經(jīng)根近端旁側(cè)；(3) 髓核移植 ( nucleus pulposus，NP ) 組：將取自大鼠自體尾部的髓核組織 ( 約4 mg ) 無壓迫下放置于左側(cè) L5神經(jīng)根近端旁側(cè)；( 4 ) 纖維環(huán)移植 ( annulus fibrosus，AF ) 組：將大鼠自體尾部的纖維環(huán)組織( 約4 mg ) 取出，無壓迫下放于左側(cè) L5神經(jīng)根近端旁側(cè)；( 5 ) Sham 組：手術(shù)僅切除半椎板并暴露 L5神經(jīng)根，而不做自體組織壓迫等處理。

四、PWMT 測定

在安靜的觀察室內(nèi)，準備尺寸為 20 cm×20 cm×25 cm 的透明有機玻璃箱，放置于細格鐵絲網(wǎng)覆蓋的架子上，放入待測大鼠提前適應(yīng)半小時。用刺激強度分別為 1 g、1.4 g、2 g、4 g、6 g、8 g、10 g、15 g、20 g、26 g、60 g、100 g、150 g、180 g、300 g 的尼龍絲 von-Frey 纖維穿過鐵絲網(wǎng)格，對 SD大鼠的雙側(cè)后足底進行刺激。每個刺激強度重復(fù)進行 10 次，由小到大依次遞增，兩次刺激需間隔3～5 s。大鼠后足 PWMT 為誘發(fā) 5 次縮足反射以上的最小 von-Frey 纖維強度[7]。于手術(shù)前 1天測量 40 只 ( 5 組×8 只 ) SD 大鼠雙側(cè)后足 PWMT，作為基礎(chǔ)痛閾值。后繼續(xù)在設(shè)定時間點測定大鼠雙側(cè)后足底 PWMT。疼痛閾值變化用術(shù)后PWMT / 術(shù)前PWMT×100% 表示，＜ 100% 表明大鼠后足底刺激敏感性升高，反之則表明敏感性降低。

五、免疫組織化學(xué)染色

1. 大鼠脊髓取材及制片：分別于術(shù)前 1天、術(shù)后3天、7天、21天對各組內(nèi)3只大鼠進行取材，共60只 ( 5組×4個時間點×3只 )。大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，心臟灌注后對脊髓腰膨大部分取材，4% 多聚甲醛 ( paraformaldehyde，PFA ) 固定，置于 15%、30% 蔗糖磷酸緩沖鹽溶液 ( phosphate buffer saline，PBS ) 中，依次脫水沉底 ( 4 ℃ )，OTC( optimal cutting temperature compound ) 包埋劑包埋并置于 -20 ℃ 冰箱冰凍 2 h，再用冷凍切片機進行切片，切片厚度為 6 μm。放于 -70 ℃ 冰箱中低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

2. 免疫組織化學(xué)染色方法：切片固定后浸入修復(fù)盒內(nèi)檸檬酸 ( pH 6.0 ) 抗原修復(fù)液 ( 上海喬羽生物 ) 抗原修復(fù)后，阻斷過氧化物酶，用牛血清白蛋白 ( bovine serum albumin，BSA ) 封閉。滴加 GFAP一抗 ( 1∶400，Abcam )，放于 4 ℃ 冰箱過夜。滴加辣根過氧化物酶 ( horseradish peroxidase，HRP ) 標記山羊二抗，室溫孵育 60 min，用二氨基聯(lián)苯胺( 3，3’-diaminobenzidine，DAB ) 顯色后復(fù)染細胞核，脫水封片后光鏡觀察。

六、切片觀察及數(shù)據(jù)測量

HE 染色及免疫組織化學(xué)染色后的切片用光學(xué)顯微鏡直接觀察并拍攝照片。免疫組織化學(xué)取脊髓左側(cè)背角染色 ( 黃色 ) 密集處的 4個隨機 400 倍視野。照片用 Image Pro Plus 軟件分析染色密集處隨機區(qū)域 ( 面積為 5 cm×5 cm )，計算 GFAP 陽性細胞數(shù)和平均光密度值 ( optical density value，OD )。

七、統(tǒng)計學(xué)處理

采用 SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料采用±s表示。組內(nèi)差異采用重復(fù)測量方差分析方法或 Friedman 檢驗；術(shù)后組間的差異采用重復(fù)測量方差分析方法或兩因素方差分析方法進行統(tǒng)計學(xué)檢驗，術(shù)后某一時間點組間的差異采用 Mann-WhitneyU檢驗對比分析；數(shù)據(jù)相關(guān)性檢驗用 Pearson 相關(guān)分析，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、一般情況

有4只大鼠 ( DC組、AF組、NF組、Sham 組各1只 ) 在術(shù)后0.5～1.0 h 因麻醉過量死亡，并及時建立大鼠模型予以增補。余大鼠均于術(shù)后30 min 內(nèi)蘇醒，術(shù)后1～2 h 恢復(fù)運動。大鼠術(shù)后切口無感染發(fā)生，切口恢復(fù)愈合過程正常。體重及發(fā)育正常。

二、機械刺激疼痛閾值

1. 組內(nèi)對照：實驗組大鼠后足觀察點術(shù)后PWMT% 均出現(xiàn)了降低，即機械刺激敏感性增高，較術(shù)前差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜ 0.001 )，提示 CP 組及炎性刺激 ( DC、NP、AF ) 組均對大鼠神經(jīng)根造成了刺激，使大鼠足底痛閾降低。術(shù)后大鼠后足底PWMT% 逐漸降低，術(shù)后21天隨訪達到最低值，對側(cè)足底 PWMT% 也出現(xiàn)類似變化 ( 圖1 )。

2. 組間對照：為了區(qū)分機械壓迫和炎癥因素在痛覺過敏產(chǎn)生及發(fā)展中的不同作用，筆者進一步分析比較了 DC 組和 CP 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P= 0.009 )。NP組、AF 組和 CP 組相比較時，差異同樣有統(tǒng)計學(xué)意義 ( NP 組P= 0.011，AF 組P= 0.037 ) ( 圖1 )。

圖1 各觀察點大鼠后足底 PWMT 降低程度及變化趨勢。① 各組大鼠手術(shù)前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義用星號 ( * ) 表示；② DC 組與 CP組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，用 ( △ ) 表示；③ NP 組與 CP 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，用 ( ▲ ) 表示；④ AF 組與 CP 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，用 ( ★ ) 表示Fig.1 PWMT changes of rats. Significant differences pre- and post-surgery ( * ). Significant differences between DC and CP group ( △ ).Significant differences between NP and CP group ( ▲ ). Significant differences between AF and CP group ( ★ )

三、免疫組織化學(xué)染色

免疫組織化學(xué)染色淺，GFAP 陽性表達呈黃色或棕黃色，標記后陽性的星形膠質(zhì)細胞似蜘蛛形或星形，由胞體發(fā)出許多長而光滑的突起，分支少。突觸多分布于神經(jīng)細胞間隙，細胞突起的末端常膨大，有些則附在鄰近的毛細血管壁上 ( 圖2～6 )。

圖2 CP 組，紅色箭頭所示為星形膠質(zhì)細胞 ( GFAP × 400 ) a：術(shù)前 1天；b：術(shù)后3天；c：術(shù)后7天；d：術(shù)后21天Fig.2 GFAP-stained astrocytes of CP group ( red arrows ) ( × 400 ) a: 1 day before surgery; b:3days after surgery; c: 7 days after surgery;d: 21 days after surgery

1. 組內(nèi)對照：實驗組術(shù)后測定 GFAP 陽性細胞數(shù)及 OD 明顯增大，較術(shù)前差異有統(tǒng)計學(xué)意義 ( 表1 )，提示多種神經(jīng)根刺激模式均誘導(dǎo)了星形膠質(zhì)細胞活化 (P＜ 0.05 )。術(shù)后21天隨訪內(nèi) GFAP 陽性細胞數(shù)、OD 均維持在較高的水平，其中術(shù)后7天細胞計數(shù)明顯增多，OD 亦明顯增大，組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜ 0.05 ) ( 表1，圖7、8 )。

2. 組間對照：做模型組術(shù)后不同觀察點 GFAP陽性細胞計數(shù)及光密度值的柱狀圖及趨勢圖，對各組中術(shù)后不同觀察點 GFAP 陽性細胞計數(shù)及光密度值比較，均呈現(xiàn)出 DC組＞NP組＞AF組＞CP組＞Sham 組的變化趨勢 ( 圖7 )。對 4個實驗組 GFAP 陽性細胞計數(shù)及 OD 做兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜ 0.05 )。

圖3 DC 組，紅色箭頭所示為星形膠質(zhì)細胞 ( GFAP × 400 ) a：術(shù)前 1天；b：術(shù)后3天；c：術(shù)后7天；d：術(shù)后21天Fig.3 GFAP-stained astrocytes of DC group ( red arrows ) ( × 400 ) a: 1 day before surgery; b:3days after surgery; c: 7 days after surgery;d: 21 days after surgery

圖4 NP 組，紅色箭頭所示為星形膠質(zhì)細胞 ( GFAP × 400 ) a：術(shù)前 1天；b：術(shù)后3天；c：術(shù)后7天；d：術(shù)后21天Fig.4 GFAP-stained astrocytes of NP group ( red arrows ) ( × 400 ) a: 1 day before surgery; b:3days after surgery; c: 7 days after surgery;d: 21 days after surgery

圖5 AF 組，紅色箭頭所示為星形膠質(zhì)細胞 ( GFAP × 400 ) a：術(shù)前 1天；b：術(shù)后3天；c：術(shù)后7天；d：術(shù)后21天Fig.5 GFAP-stained astrocytes of AF group ( red arrows ) ( × 400 ) a: 1 day before surgery; b:3days after surgery; c: 7 days after surgery;d: 21 dayss after surgery

圖6 Sham 組，紅色箭頭所示為星形膠質(zhì)細胞 ( GFAP × 400 ) a：術(shù)前 1天；b：術(shù)后3天；c：術(shù)后7天；d：術(shù)后21天Fig.6 GFAP-stained astrocytes of sham group ( red arrows ) ( × 400 ) a: 1 day before surgery; b:3days after surgery; c: 7 days after surgery;d: 21 days after surgery

圖7 不同組別中各觀察點 GFAP 陽性細胞計數(shù)Fig.7 GFAP positive cell count at each observation point in different groups

圖8 不同組別中各觀察點平均光密度值 ( mOD )Fig.8 mOD at each observation point in different groups

表1 大鼠模型脊髓 GFAP 陽性細胞數(shù) / 平均光密度值 (±s，n= 60 )Tab.1 Mean optical density values / the number of GFAP positive cells (± s, n= 60 )

表1 大鼠模型脊髓 GFAP 陽性細胞數(shù) / 平均光密度值 (±s，n= 60 )Tab.1 Mean optical density values / the number of GFAP positive cells (± s, n= 60 )

注：① 手術(shù)前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義用 a 表示；② 術(shù)后7天與其余時間點比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義用 b 表示Notice: aStatistically significant differences before and after operation; bStatistically significant differences 7 days after operation and at other time points

項目 Sham 組 CP 組 DC 組 NP 組 AF 組術(shù)前 1天陽性細胞數(shù) 6.77±1.21 6.67±1.76 6.50±1.19 6.83±1.84 6.51±1.58平均光密度值 0.057±0.02 0.058±0.03 0.057±0.03 0.058±0.03 0.058±0.02術(shù)后3天陽性細胞數(shù) 6.78±2.07 9.13±2.26a 16.11±4.01a 13.82±2.83a 10.67±2.16a平均光密度值 0.057±0.01 0.12±0.01a 0.22±0.03a 0.19±0.02a 0.15±0.03a術(shù)后7天陽性細胞數(shù) 6.80±1.72 13.67±4.89ab 19.64±3.63ab 17.45±1.66ab 15.83±2.71ab平均光密度值 0.057±0.03 0.17±0.04ab 0.48±0.04ab 0.32±0.03ab 0.21±0.03ab術(shù)后21天陽性細胞數(shù) 6.77±1.41 11.57±3.42a 18.51±3.17a 15.68±1.27a 13.53±2.35a平均光密度值 0.057±0.01 0.10±0.02a 0.28±0.03a 0.17±0.02a 0.12±0.03a

四、PWMT 與星形膠質(zhì)細胞活化狀況相關(guān)性分析

對 4個實驗組大鼠按觀察時間順次編號，分別做 PWMT和GFAP 陽性細胞計數(shù)、PWMT和GFAP陽性細胞 OD 的 Pearson 相關(guān)性分析。結(jié)果均呈負相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜ 0.001，相關(guān)系數(shù)為-0.918；P= 0.002，相關(guān)系數(shù)為 -0.701 )。

討 論

椎間盤突出和坐骨神經(jīng)痛的相關(guān)研究由來已久，神經(jīng)根性疼痛的“壓迫學(xué)說”現(xiàn)已得到認可。在研究椎間盤突出的動物實驗中，大鼠坐骨神經(jīng)痛模型眾多，Chen 等[9]報道了大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型后大鼠后爪姿勢異常，此外還有間盤刺破模型[10]、異 / 自體髓核移植模型[11]、腰神經(jīng)根結(jié)扎模型[12]等，但與臨床上突出的間盤對神經(jīng)根的直接壓迫和炎性物質(zhì)刺激的病理生理過程仍有很大的差異。

Hou等[7]設(shè)計的大鼠模型將大鼠自體椎間盤成分區(qū)分后直接干預(yù)神經(jīng)根造模，創(chuàng)新地模擬了人體突出椎間盤組織對神經(jīng)根的機械性壓迫和炎性物質(zhì)刺激。本實驗中，CP組為代表的單純機械性壓迫組成功誘發(fā)盤源性坐骨神經(jīng)痛。與Hou 等[7]報道結(jié)果一致。這是因壓迫致使神經(jīng)根內(nèi)產(chǎn)生缺血、水腫，局部血管通透性增加導(dǎo)致痛閾降低、神經(jīng)根傳導(dǎo)速度下降，以及病理生理改變所致持續(xù)重復(fù)或者自發(fā)性放電；神經(jīng)纖維脫髓鞘后引起神經(jīng)根損傷和產(chǎn)生疼痛[13-14]。外科手術(shù)解除壓迫治療有效也支持這一觀點。

炎癥介質(zhì)也是導(dǎo)致盤源性坐骨神經(jīng)痛的原因之一，實驗中DC、NP和AF 組在僅有炎性刺激時同樣引發(fā)持續(xù)的機械刺激疼痛過敏，顯示炎性因素在盤源性坐骨神經(jīng)痛的早期 ( 21天 ) 發(fā)揮了更為顯著的作用。這與Kameda等[15]報道的結(jié)果一致。已知髓核等誘導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)在動物及人體神經(jīng)痛覺過敏發(fā)病、發(fā)展中發(fā)揮一定作用，在纖維環(huán)裂隙及間盤疝出的髓核被免疫系統(tǒng)認為“異己成分”，誘發(fā)免疫反應(yīng)，進一步召集巨噬細胞、淋巴細胞和其它炎癥細胞聚集，并分泌腫瘤壞死因子 α ( tumor necrosis factor α，TNF-α )、前列腺素 E2 ( prostaglandin E2，PGE2 )、一氧化氮 ( nitric oxide，NO )、干擾素g ( interferon-g，IFN-g )、神經(jīng)生長因子和 P 物質(zhì)誘發(fā)產(chǎn)生疼痛[3,16]。激活淋巴細胞引發(fā)炎性反應(yīng)的正反饋調(diào)節(jié)，并引起椎間盤和神經(jīng)根的損傷。有研究表明大鼠突出的髓核組織能產(chǎn)生 TNF-α 等多種炎性介質(zhì)，已經(jīng)證實 TNF-α 與鄰近神經(jīng)根的激惹相關(guān)[17]。在這些炎性介質(zhì)共同作用下可引起神經(jīng)根損傷，可出現(xiàn)神經(jīng)根水腫、電生理信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常，導(dǎo)致疼痛過敏。同樣纖維環(huán)碎片也可引起炎癥反應(yīng)，刺激內(nèi)源性間盤細胞產(chǎn)生炎性介質(zhì)，引發(fā)免疫反應(yīng)[18]。Molinos 等[19]研究發(fā)現(xiàn)纖維環(huán)細胞和神經(jīng)元樣細胞相互作用，纖維環(huán)破裂后誘發(fā)新血管形成 / 神經(jīng)內(nèi)生長，以及纖維環(huán)和神經(jīng)組織相互作用引發(fā) TNF-α /IL-1β 參與的炎性反應(yīng)，而 TNF-α 可直接參與痛覺過程。本實驗的數(shù)據(jù)提示機械壓迫和炎癥反應(yīng)在不同時間可能發(fā)揮不同作用，這可能涉及間盤內(nèi)各種內(nèi)因子在炎癥反應(yīng)過程的不同階段扮演不同角色，起到不同作用[20-23]。同時兩者不是孤立的單獨作用，Omarker 等[14]指出機械性和炎癥性刺激誘發(fā)的疼痛不是簡單的相加關(guān)系，而是交叉相互作用。結(jié)果中出現(xiàn)了大鼠對側(cè)后足 PWMT 降低，推測這可能是由于脊髓雙側(cè)背角間存在信號通路所導(dǎo)致[24]。而 Wang等[25]分析當外周神經(jīng)損傷會產(chǎn)生中樞敏化，靠觸摸能在非手術(shù)的對側(cè)足底引起痛覺。

神經(jīng)元細胞參與了疼痛調(diào)節(jié)觀點由來已久。近年來研究表明，星形膠質(zhì)細胞活化后釋放的炎癥細胞因子誘導(dǎo)炎性反應(yīng)及免疫激活，在神經(jīng)疼痛發(fā)生及維持中發(fā)揮著重要作用[26-27]。星形膠質(zhì)細胞通過多種直接和間接的方式影響突觸活動，通過應(yīng)答中樞神經(jīng)系統(tǒng)或產(chǎn)生各種細胞因子參與炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)，這些機制提供了星形膠質(zhì)細胞參與神經(jīng)疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的依據(jù)[28]。神經(jīng)根組織損傷后可釋放活性氧、NO、聚合或錯誤折疊的蛋白質(zhì)和核因子等，進一步誘發(fā)星形膠質(zhì)細胞激活。此外，星形膠質(zhì)細胞可識別損傷組織特定的分子模式，通過類似傳統(tǒng)的細胞免疫而激活。星形膠質(zhì)細胞可識別 Toll 樣受體 ( Toll-like receptors，TLRs )，引發(fā)類似免疫反應(yīng)的過程，如促炎細胞因子的釋放和細胞吞噬作用，這些過程進一步刺激 IL-1β、TNF-α和IL-6 經(jīng)由星形膠質(zhì)細胞釋放，從而保持星形膠質(zhì)細胞活化[29]。星形膠質(zhì)細胞激活后，表達各種功能的神經(jīng)遞質(zhì)受體，包括離子型 N-甲基-D-天冬氨酸 ( N-methyl-Daspartate，NMDA ) 受體和非天門冬氨酸 NMDA 受體、代謝性谷氨酸 ( mGluR3和mGluR5 ) 受體、嘌呤受體和 P 物質(zhì)受體等。此外，IL-1β、TNF-α和IL-6可獨立或聯(lián)合參與脊髓背根神經(jīng)節(jié)及背角中樞敏感化和疼痛擴大化，而 NMDA 受體通道開放導(dǎo)致的Ca2+內(nèi)流可使 NO和PGE2 增加，并進一步產(chǎn)生疼痛[30]。本研究高度模擬了人體椎間盤突出的大鼠模型研究中，在不同刺激模式干預(yù)下，實驗組大鼠術(shù)后GFAP 陽性細胞 OD、陽性細胞數(shù)均有不同程度的增加，反映星形膠質(zhì)細胞活化增高，以髓核和纖維環(huán)共同刺激的 DC 組最為突出 ( 髓核組其次 )，該組模型也最接近人體常見的椎間盤突出方式。術(shù)后1周實驗組 ( 尤其是DC組 ) GFAP 陽性細胞活化最為明顯，符合急性腰椎間盤突出患者疼痛發(fā)展的特點。這與 Park 等[31]報道的術(shù)后2天 GFAP 基因表達上調(diào)，在2周時明顯下降的結(jié)果類似。此外在不同的刺激模式下，實驗組大鼠 GFAP 陽性細胞活化與后足底 PWMT 改變呈現(xiàn)出顯著的負相關(guān)，進一步說明星形膠質(zhì)細胞參與了疼痛的過程。隨疼痛閾值的降低，星形膠質(zhì)細胞活化增強。

綜上所述，大鼠實驗?zāi)Ｐ秃芎玫啬M了人體椎間盤突出及誘發(fā)的疼痛，不同刺激模式誘致的坐骨神經(jīng)疼痛模型均可誘發(fā)大鼠術(shù)后PWMT 降低。炎性因素較機械壓迫在盤源性坐骨神經(jīng)痛的早期 ( 21天 )發(fā)揮了更顯著的作用。星形膠質(zhì)細胞參與了疼痛的過程，在不同的刺激模式下，隨疼痛閾值的降低，星形膠質(zhì)細胞活化增強，呈負相關(guān)性。此外，動物實驗研究顯示炎性因素在盤源性坐骨神經(jīng)痛的早期( 21天 ) 較機械壓迫因素發(fā)揮了更為顯著的作用，進一步提示早期非甾體、激素等抗炎治療腰椎間盤突出的可行性，實驗尚未能對炎癥細胞因子作用機制做深入研究。未來的研究重點也會放在不同刺激模式誘致坐骨神經(jīng)痛中星形膠質(zhì)細胞和炎癥細胞因子的具體作用機制上。