王娜娜，楊川

1延安大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，陜西延安716000

2河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻咽喉科，石家莊050000

3平昌縣人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，四川巴中636040

喉癌是耳鼻咽喉-頭頸外科第二高發(fā)腫瘤，其中喉鱗狀細(xì)胞癌占全部病理分型的95%。喉鱗狀細(xì)胞癌的病因復(fù)雜，近年來(lái)其發(fā)病率不斷增加，患者的晚期生存率仍較低。隨著機(jī)器人輔助手術(shù)在頭頸部腫瘤治療中的開展及食管、氣管一期重建技術(shù)的不斷成熟，中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（Chinese Society of Clinical Oncology，CSCO）頭頸部腫瘤診療指南也強(qiáng)調(diào)手術(shù)治療對(duì)提高生存率的重要性，但仍面臨術(shù)后功能障礙、生活質(zhì)量下降等嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。另一方面，頭頸部腫瘤手術(shù)仍被認(rèn)為是外科“皇冠”，手術(shù)水平直接關(guān)系到患者的生存預(yù)后。因此，進(jìn)一步闡明喉鱗狀細(xì)胞癌的分子機(jī)制，尋找潛在的生物學(xué)靶點(diǎn)，對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)行早期診斷和治療仍十分必要。信使RNA（messenger RNA，mRNA）、微小RNA（microRNA，miRNA）、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）在喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)腫瘤基因圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)挖掘，分別闡明lncRNA、miRNA和mRNA在喉鱗狀細(xì)胞癌中的作用機(jī)制及其潛在聯(lián)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)獲取及差異分析

在TCGA中下載喉鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和相關(guān)臨床信息，其中腫瘤樣本111例，正常樣本12例。采用“edgR”包進(jìn)行差異分析，設(shè)|logFC|﹥2，錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）﹤0.01，分別得到差異lncRNA、差異mRNA和差異miRNA，采用R軟件繪制可視化圖形并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析

采用STRING11.0（https://string-db.org/cgi/input.pl）在線工具將喉鱗狀細(xì)胞癌Top500差異mRNA構(gòu)建蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，相互作用值=0.7；Cytoscape插件CentiScape2.2、cytoHubba0.1用于尋找關(guān)鍵基因，并進(jìn)行可視化展示。

1.3 功能富集和通路富集分析

喉鱗狀細(xì)胞癌差異mRNA用Clusterprofiler包進(jìn)行細(xì)胞組分（cellular component，CC）、生物學(xué)過(guò)程（biological process，BP）、分子功能（molecular function，MF）的基因文本（gene ontology，GO）富集及京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）信號(hào)通路富集。

1.4 MYHAS的共表達(dá)mRNA（cor-mRNA）

采用Pearson方法計(jì)算cor-mRNA，并取相關(guān)系數(shù)cor≥0.4。

1.5 構(gòu)建競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）網(wǎng)絡(luò)和轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)

ceRNA網(wǎng)絡(luò)：采用本地版miRanda和Targetscan分別預(yù)測(cè)lncRNA結(jié)合的miRNA，并與差異miRNA取交集。再通過(guò)miRTarBase、Targetscan、miRBD分別預(yù)測(cè)miRNA結(jié)合的mRNA，并與差異mRNA取交集，建立lncRNA-miRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò)聯(lián)系，并通過(guò)Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化展示。

轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)：將鈣信號(hào)通路相關(guān)的mRNA于DAVID6.8在線網(wǎng)站（https://david.ncifcrf.gov/）中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子富集，建立lncRNA相關(guān)mRNA的轉(zhuǎn)錄因子聯(lián)系，并通過(guò)Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化展示。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

腫瘤患者的年齡、腫瘤T分期、病理分級(jí)、飲酒、吸煙情況對(duì)腫瘤患者總體生存率的影響不明顯。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移對(duì)患者總生存率的影響顯著，臨床轉(zhuǎn)移患者的5年生存率為0%，明顯低于無(wú)臨床轉(zhuǎn)移患者的50.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=12.230，P=0.0005）；病理轉(zhuǎn)移患者的5年生存率為0%，明顯低于無(wú)病理轉(zhuǎn)移患者的44.83%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=18.260，P=0.0001）。女性患者的5年生存率為30.00%，低于男性患者的50.11%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=4.454，P=0.0348）。發(fā)生病理淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的5年生存率為48.08%，低于未發(fā)生病理淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的70.14%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=4.539，P=0.0331），但臨床上發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的5年生存率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=1.150，P=0.2835）。

2.2 lncRNA、miRNA、mRNA差異表達(dá)情況

lncRNA、miRNA和mRNA各自的主成分分析結(jié)果顯示，腫瘤組與對(duì)照組間表達(dá)譜數(shù)據(jù)相互獨(dú)立，組內(nèi)重復(fù)性較好，數(shù)據(jù)可信度高（圖1A、1C和1E）。當(dāng)|logFC|﹥2，F(xiàn)DR﹤0.01時(shí)，得到的差異lncRNA共687個(gè)，其中上調(diào)561個(gè)，下調(diào)126個(gè)（圖1B）；得到的差異miRNA共54個(gè)，其中上調(diào)28個(gè)，下調(diào)26個(gè)（圖1D）；得到的差異mRNA共1818個(gè)，其中上調(diào)950個(gè)，下調(diào)868個(gè)（圖1F）。

圖1 lncRNA、miRNA、mRNA的主成分分析、火山圖

2.3 差異lncRNA和miRNA表達(dá)的喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的單因素分析

根據(jù)RNA-Seq臨床數(shù)據(jù)計(jì)算了差異lncRNA表達(dá)的喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的單因素分析結(jié)果，取

P

﹤0.05，共有64個(gè)lncRNA滿足條件，根據(jù)是否能在NCBI中查到相關(guān)lncRNA信息，總生存率是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，篩選了11個(gè)lncRNA，其中

LINC00278

、

LINC00689

、

MYHAS

屬于低風(fēng)險(xiǎn)基因（HR﹤1），

MNX1-AS1

、

LINC02575

、

HOXB-AS4

、

LSAMP-AS1

、

LINC02086

、

IGFL2-AS1

、

LINC02253

、

CASC20

屬于高風(fēng)險(xiǎn)基因（HR﹥1）。同理，計(jì)算出了差異miRNA表達(dá)的喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的單因素分析結(jié)果，

P

﹤0.05的miRNA共7個(gè)，其中miRNA-383、miRNA-196a-2、miRNA-196a-1、miRNA-100、miRNA-4652是高風(fēng)險(xiǎn)基因（HR﹥1），miRNA-99a、miRNA-301a是低風(fēng)險(xiǎn)基因（HR﹤1）。（表1）

表1 差異lncRNA和miRNA表達(dá)的喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的單因素分析

2.4 差異mRNA功能分析和關(guān)鍵基因篩選

將1818個(gè)差異mRNA用Clusterprofiler進(jìn)行GO分析和KEGG信號(hào)通路分析，取

P

值或

P.adjust

值﹤0.05。分子功能（MF）以通道活性和激活跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性為主，細(xì)胞組分（CC）以細(xì)胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）包含的膠原纖維和轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體為主，生物學(xué)過(guò)程（BP）以細(xì)胞外基質(zhì)形成和調(diào)節(jié)離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)為主（圖2A～2C）。KEGG信號(hào)通路中以細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體間相互作用和鈣信號(hào)通路為主要作用通路，其中也包括環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）信號(hào)通路、環(huán)磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）-cGMP依賴性蛋白激酶（cGMP-dependent protein kinase，PKG）信號(hào)通路和ECM受體相互作用等腫瘤發(fā)生、發(fā)展的經(jīng)典信號(hào)通路（圖2D）。將差異倍數(shù)前500的mRNA進(jìn)行String在線分析，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，并通過(guò)Centiscape插件進(jìn)行關(guān)鍵基因篩選，根據(jù)Degree進(jìn)行篩選，綠色﹤10，青色≥10，紫色≥15，紅色≥20，其中

ACTN2

、

ACTN3

、

MYL1

、

MYL2

、

MYL3

、

MYH6

、

TTN

網(wǎng)絡(luò)連接最多，屬于關(guān)鍵基因（圖2E）。

圖2 差異mRNA的GO、KEGG信號(hào)通路富集和PPI網(wǎng)絡(luò)

2.5 MYHAS的cor-mRNA、關(guān)鍵基因篩選及功能富集

MYHAS的共表達(dá)mRNA（cor≥0.4）共253個(gè)，采用插件cytoHubba分別計(jì)算Closeness、Degree、EPC、MCC、MNC和Radiality 6種算法下前10的基因并取交集，得到關(guān)鍵基因：

TNN

、

MYL1

、

MYL3

、

ACTN2

、

MYH6

。GO富集顯示cor-mRNA主要參與調(diào)節(jié)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體和肌動(dòng)蛋白結(jié)合等（圖3A～3C）。信號(hào)通路分析顯示，cormRNA主要富集在鈣信號(hào)通路、cGMP-PKG信號(hào)通路和催產(chǎn)素信號(hào)通路等（圖3D）。其中鈣離子信號(hào)通路中富集的基因分別是PRKACA、CAMK2A、SLC8A3、CAMK2B、RYR1、PLN、CASQ2、PHKG1、HRC、MYLK3、TNNC1、CACNA1S、MYLK2、CASQ1、ATP2A1、TNNC2。

圖3 MYHAS 的cor-mRNA的GO和KEGG信號(hào)通路富集

2.6 ceRNA網(wǎng)絡(luò)和轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)

將單因素分析與生存分析中P﹤0.05的lncRNA取交集，得到21個(gè)lncRNA，并分別進(jìn)行mi-Randa和Targetscan靶基因預(yù)測(cè)并取交集，得到2363個(gè)與lncRNA可以結(jié)合的miRNA，然后將預(yù)測(cè)的miRNA與差異miRNA的成熟體取交集，得到66個(gè)miRNA。對(duì)66個(gè)miRNA分別進(jìn)行miRTarBase、Targetscan和MiRDB靶基因預(yù)測(cè)后與差異mRNA取交集，并構(gòu)建ceRNA網(wǎng)絡(luò)（圖4A）。ceRNA網(wǎng)絡(luò)中有11個(gè)lncRNA（青色菱形），分別為L(zhǎng)INC02576、LINC02086、AC020659.1、LINC00528、LINC00689、HOXB-AS4、MNX1-AS1、LINC00278、AC010624.1、AC016773.1、MYHAS；5個(gè) miRNA（綠色三角形），分別為has-miRNA-206、has-miRNA-573、has-miRNA-3662、has-miRNA-133b、hasmiRNA-449a；12個(gè)mRNA（其中7個(gè)紅色6邊型為上調(diào)mRNA，5個(gè)藍(lán)色圓形為下調(diào)mRNA），分別為STC2、PAX3、NETO2、EIF5A2、ADPRHL1、SYNM、ACTA1、GPR156、CLIC5、BMP3、HNF4A、FOXL2。將cor-mRNA鈣信號(hào)通路中的16個(gè)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子富集，并繪制轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中綠色橢圓形代表mRNA，藍(lán)色菱形代表轉(zhuǎn)錄因子，這些轉(zhuǎn)錄因 子 分 別 是 MYOD、RSRFC4、TAL1BETAITF2、YY1、P300、PAX3、PAX5、ZID和OLF1（圖4B）。

圖4 ceRNA網(wǎng)絡(luò)和轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)

2.7 DNA甲基化分析

為了進(jìn)一步闡明關(guān)鍵基因在喉鱗狀細(xì)胞癌中的調(diào)控作用，進(jìn)一步分析了TCGA和GEO中的喉鱗狀細(xì)胞癌DNA甲基化數(shù)據(jù)。設(shè)Δβ絕對(duì)值≥0.4，P﹤0.05，取二者交集，共得到75個(gè)甲基化位點(diǎn)；其中cg15700197和cg17892556分別為甲基化差異最大的位點(diǎn)，cg15700197在正常組織中高甲基化，在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中低甲基化，cg17892556在正常組織中低甲基化，在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中高甲基化。這75個(gè)差異甲基化位點(diǎn)主要位于1stExon、TSS1500和TSS200，其次為5'非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）和基因體區(qū)，3'非翻譯區(qū)和基因間隔區(qū)（intergenic region，IGR）分布較少。上述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)高甲基化基因56個(gè)，低甲基化基因15個(gè)，ZNF625是Δβ值最大的高甲基化基因，OR10J1是Δβ值最大的低甲基化基因。

3 討論

喉鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部常見的腫瘤之一，病因較多，影響因素復(fù)雜。本研究針對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌患者的一般情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，患者年齡、T分期、病理分級(jí)、飲酒、吸煙情況對(duì)總生存率的影響不明顯，而遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移會(huì)降低患者的總生存率。關(guān)于腫瘤分期（T分期）和病理分級(jí)對(duì)腫瘤預(yù)后無(wú)影響，可能與目前分期系統(tǒng)的局限性有關(guān)；因此針對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌的分期，根據(jù)腫瘤萌芽活性（tumor budding activity，BA）和細(xì)胞巢大?。╟ell nest size，CNS）進(jìn)行分期對(duì)預(yù)后似乎更具指導(dǎo)意義。本研究結(jié)果中淋巴結(jié)浸潤(rùn)對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的影響與Ho等研究結(jié)果一致，尤其是病理組織上的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)指導(dǎo)臨床治療意義重大，當(dāng)然這也可能與從臨床到病理診斷的過(guò)程增加了“開始治療時(shí)間（time to treatment initiation，TTI）”，從而降低了預(yù)后有關(guān)。

近年來(lái)有關(guān)lncRNA在喉鱗狀細(xì)胞癌中作用的研究較多，尤其是miRNA“海綿”靶基因是喉癌發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。作為ceRNA，lncRNA通過(guò)靶向結(jié)合miRNA間接調(diào)控靶基因，是較好的生物標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。生存分析顯示，miRNA-210、miRNA-455和miRNA-4326的表達(dá)量與喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后相關(guān)（數(shù)據(jù)未展示），其中有關(guān)miRNA-210在肺癌、膠質(zhì)瘤、口腔癌、骨肉瘤等惡性腫瘤中的作用已廣泛報(bào)道，并且miRNA-210在組織、血清和外泌體中均可存在。miRNA-455也可通過(guò)自噬、p21活化蛋白激酶2（p21-activated kinase 2，PAK2）軸和 Janus激酶 1（Janus kinase 1，JAK1）軸等作用方式抑制腫瘤生長(zhǎng)，并且miRNA-455上述功能的發(fā)揮有賴于不同lncRNA的作用，這些lncRNA作為ceRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA-455；當(dāng)然，也有較多miRNA-455單獨(dú)發(fā)揮作用的報(bào)道。同時(shí)，Xu等亦報(bào)道m(xù)iRNA-4326通過(guò)抑制APC2基因表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖。但遺憾的是，目前尚未見上述3個(gè)miRNA在喉鱗狀細(xì)胞癌中被報(bào)道，有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

在具有抑癌作用的lncRNA中，LINC00689、LINC00278已分別在膠質(zhì)瘤和食管鱗狀細(xì)胞癌中報(bào)道，尤其是LINC00278編碼的多肽YY1BM，可抑制YY1與雄激素受體結(jié)合從而降低真核生物延伸因子2激酶（eukaryotic elongation factor 2 kinase，eEF2K）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。喉結(jié)是第二性征標(biāo)志，雄激素受體高表達(dá)，由此可推斷LINC00278在喉鱗狀細(xì)胞癌中是一個(gè)較好的潛在靶點(diǎn)。在具有促癌作用的lncRNA中，IGFL2-AS1、LSAMP-AS1和MNX1-AS1已分別在胃癌、前列腺癌和食管鱗狀細(xì)胞癌中報(bào)道，為下一步喉鱗狀細(xì)胞癌的研究提供了較好的參考意義。

基于目前報(bào)道的有關(guān)lncRNA-miRNA-mRNA的相互作用關(guān)系，本研究利用差異lncRNA、差異miRNA和差異mRNA構(gòu)建了ceRNA網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)該網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)絡(luò)中miRNA既無(wú)生存意義，又無(wú)單因素意義；網(wǎng)絡(luò)中mRNA亦不屬于Centiscape中的關(guān)鍵基因；同時(shí)，與miRTarBase疾病搜索中喉鱗狀細(xì)胞癌的miRNA無(wú)交集。因此認(rèn)為lncRNA并不能完全主導(dǎo)miRNA和mRNA發(fā)揮作用，lncRNA與miRNA在喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病過(guò)程中各自存在獨(dú)立的作用機(jī)制。為了進(jìn)一步說(shuō)明lncRNA的功能，本研究選擇了MYHAS作為代表，通過(guò)分析MYHAS共表達(dá)基因cor-mRNA，發(fā)現(xiàn)cor-mRNA得到的5個(gè)關(guān)鍵基因全部與差異mRNA得到的關(guān)鍵基因吻合；并且cor-mRNA的通路分析中主要信號(hào)通路鈣信號(hào)通路、cGMP-PKG信號(hào)通路和cAMP信號(hào)通路亦是差異mRNA的主要信號(hào)通路。有關(guān)cAMP、cGMP-PKG和鈣信號(hào)通路在不同腫瘤中的調(diào)控作用已有很多報(bào)道，有研究報(bào)道了cGMP-PKG在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的作用，認(rèn)為cGMP-PKG在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中是較好的治療靶點(diǎn)，并且全球第一個(gè)鳥苷酸環(huán)化酶激動(dòng)劑利那洛肽已于2019年初在中國(guó)上市。此外，Park和Juhnn亦報(bào)道cAMP信號(hào)激活可通過(guò)增加去乙酰化酶8的表達(dá)促進(jìn)順鉑對(duì)肺癌細(xì)胞的凋亡作用。而關(guān)于鈣信號(hào)通路在腫瘤中的作用，Raynal等研究表明，鈣信號(hào)通路中一系列激酶相互作用后，引起鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶Ⅱ（calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ，CAMKⅡ）激活，使甲基化結(jié)合域蛋白甲基化CPG結(jié)合蛋白2（methyl-CPG binding protein 2，MeCP2）出核，導(dǎo)致基因組發(fā)生去甲基化，使已經(jīng)甲基化的抑癌基因重新激活，以發(fā)揮抑癌作用。MYHAS屬于抑癌基因，其通過(guò)相關(guān)基因cormRNA在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中參與鈣信號(hào)通路的失活，從而引起下游靶基因高甲基化。基于上述結(jié)果，本研究又分析了數(shù)據(jù)庫(kù)中喉鱗狀細(xì)胞癌的DNA甲基化數(shù)據(jù)，共篩選出了71個(gè)基因；本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對(duì)ZNF667基因進(jìn)行了試驗(yàn)驗(yàn)證，其在喉鱗狀細(xì)胞癌組織和細(xì)胞中均呈高甲基化、低表達(dá)，發(fā)揮抑制喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、侵襲的作用。由此認(rèn)為MYHAS可以較好地代表喉鱗狀細(xì)胞癌中的差異lncRNA，在喉鱗狀細(xì)胞癌中是一個(gè)較好的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，具有潛在研究?jī)r(jià)值。

同時(shí)，本研究針對(duì)cor-mRNA中參與鈣信號(hào)通路的16個(gè)基因構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，擬進(jìn)一步說(shuō)明非編碼RNA在喉鱗狀細(xì)胞癌信號(hào)通路中的上下游調(diào)控關(guān)系。這些轉(zhuǎn)錄因子與MYHAS相互作用，直接在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控靶基因表達(dá)。網(wǎng)絡(luò)中PAX5是B淋巴細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，在B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，但也見于在其他惡性腫瘤中的報(bào)道，并且Brazao等報(bào)道了PAX5對(duì)不同階段B細(xì)胞中l(wèi)ncRNA的調(diào)控作用。而轉(zhuǎn)錄因子PAX3的功能較為復(fù)雜，這是因?yàn)镻AX3具有7個(gè)可變剪切體，不同剪切體在腫瘤中表現(xiàn)的功能不同。P300被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄共激活因子，是一種組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶，通常被招募到轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子中，并通過(guò)乙?；旧|(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)。Liang等研究報(bào)道，P300可在食管鱗狀細(xì)胞癌中調(diào)控LINC00460的表達(dá)，這亦為喉鱗狀細(xì)胞癌的研究提供了可行性。轉(zhuǎn)錄因子YY1是研究較多的腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子之一，其可調(diào)控lncRNA的表達(dá)，引起直腸癌、惡性膠質(zhì)瘤、乳腺癌和肝癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其中有l(wèi)ncRNANPCCAT1通過(guò)上調(diào)YY1促進(jìn)鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的報(bào)道，這對(duì)研究YY1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的作用具有重要參考意義。MYOD屬于肌源性轉(zhuǎn)錄因子，在橫紋肌肉瘤中與同類轉(zhuǎn)錄因子MYF5共同發(fā)揮重要作用；此外Dodd等亦報(bào)道了MYOD通過(guò)直接結(jié)合miRNA-182的啟動(dòng)子增加miRNA-182的表達(dá)，從而發(fā)揮促腫瘤作用。因此，在喉鱗狀細(xì)胞癌中轉(zhuǎn)錄因子MYOD與lncRNA的作用還是值得期待。

綜上所述，公共數(shù)據(jù)分析顯示喉鱗狀細(xì)胞癌中存在眾多差異lncRNA和miRNA，其中l(wèi)ncRNA MYHAS通過(guò)抑制鈣信號(hào)通路引起下游靶基因甲基化可能是喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的主要機(jī)制之一，lncRNA MYHAS是一個(gè)較好的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，具有潛在研究?jī)r(jià)值。