叢倩倩 孔 怡 安秀榮

（泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安 271000）

傳統(tǒng)的食用菌分類和鑒定方法主要是基于子實(shí)體的形態(tài)特征和微觀結(jié)構(gòu)。但是這種分類和鑒定方法在鑒定一些較為相似的種時(shí)會(huì)比較困難，甚至?xí)霈F(xiàn)一些錯(cuò)誤，同時(shí)也阻礙了科學(xué)研究的進(jìn)程和食用菌的進(jìn)一步開發(fā)利用[1]。

筆者在進(jìn)行靈芝產(chǎn)業(yè)調(diào)研時(shí)，發(fā)現(xiàn)了一株袋栽食用菌，其子實(shí)體無(wú)明顯菌柄，菌蓋乳白色、扇形，近基部有不明顯的瘤狀突起，當(dāng)?shù)胤Q之為“白靈芝”。為了明確該“白靈芝”的種屬，采取分子生物學(xué)結(jié)合形態(tài)學(xué)方法，對(duì)其分類地位進(jìn)行初步鑒定，以便為其進(jìn)一步的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

樣品采自于山東省聊城市冠縣芝藝緣靈芝專業(yè)合作社，為大棚墻式立體栽培的子實(shí)體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 子實(shí)體的形態(tài)鑒定

肉眼觀察該菌株的子實(shí)體形態(tài)，分別用解剖鏡、顯微鏡觀察菌管的形狀和孢子的形態(tài)，然后參照卯曉嵐［2］的方法初步分類鑒定。

1.2.2 ITS分子鑒定

子實(shí)體組織分離培養(yǎng)長(zhǎng)出菌絲后，挑取尖端菌絲置空白PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。重復(fù)以上操作3次后即可得到純培養(yǎng)物（菌絲），保存于4℃冰箱備用。

首先用真菌DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司）提取菌絲DNA，然后用真菌通用引物ITS1/ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72℃后延伸10 min。在凝膠成像系統(tǒng)中觀察經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后的PCR產(chǎn)物，選擇600~700 bp的條帶進(jìn)行切膠回收，回收產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果輸入Gen?Bank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，查找與其同源性最高的序列。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

該菌株子實(shí)體中等或大，白色、乳白色或淺灰白色。菌蓋（10~18）cm×（8~10）cm，厚1~2 cm，半圓形、扇形或貝形，木栓質(zhì)，無(wú)菌柄，表面有微細(xì)絨毛漸變光滑，有小瘤狀凸起，邊緣鈍圓、波狀或瓣裂，菌肉白色（圖1）。菌管蜂窩狀、圓形，每毫米約3個(gè)（圖2）；孢子無(wú)色、光滑，寬橢圓形，（4.5~5）μm×（2.5~3.0）μm（圖3）。

查閱文獻(xiàn)并從其形態(tài)學(xué)特征，初步鑒定該菌株為多孔菌科栓孔菌屬的乳白栓孔菌。

2.2 ITS序列分析

該菌株的ITS核酸序列見圖4，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度共611 bp。將測(cè)序獲得的ITS序列輸入GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該菌株與登錄號(hào)為MT611189.1的Leiotrametes lactinea同源性為99.84%。綜合形態(tài)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，確定該袋栽菌株為乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea）。

圖2 菌管的形態(tài)

圖3 孢子

圖4 ITS區(qū)域核苷酸序列

3 小結(jié)與討論

食用菌生長(zhǎng)易受外界環(huán)境條件、分布地域等因素的影響，同一菌株在不同的地區(qū)會(huì)表現(xiàn)出形態(tài)的多樣性。筆者分離純化該乳白栓孔菌菌株后進(jìn)行栽培，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌株形態(tài)特征發(fā)生了明顯的變化，菌蓋表面有明顯的瘤狀凸起和不明顯的棱紋，邊緣瓣裂，菌肉白色（圖5）。此外，即使是不同菌株，有些也擁有相似的形態(tài)學(xué)和顯微學(xué)特征。因此單純依靠形態(tài)學(xué)特征對(duì)菌株進(jìn)行鑒定和分類往往會(huì)出現(xiàn)一定的偏差。

圖5 栽培的乳白栓孔菌的子實(shí)體形態(tài)

“白靈芝”又名“玉芝”，對(duì)心血管疾病有特效，具有祛風(fēng)除濕、止血、化痰、抗癌、提高免疫力及滋補(bǔ)強(qiáng)身等功效。研究從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)一株被稱之為“白靈芝”的袋栽菌株進(jìn)行分類鑒定，最終將其鑒定為乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea），還該菌株本來(lái)面目，糾正了對(duì)該菌株的錯(cuò)誤命名。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)乳白栓孔菌的研究較少[3]，研究為進(jìn)一步開發(fā)該菌株奠定了基礎(chǔ)。