張丹鳳 林金盛 駱 昕 曲紹軒 侯立娟 李輝平 蔣 寧 馬 林，3*

（1江蘇省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點實驗室，南京 210014；2丹陽市園藝技術指導站，江蘇丹陽 212300；3江蘇紅葉福茸農(nóng)業(yè)科技有限公司，江蘇丹陽 212310）

香菇（Lentinula edodes）是目前世界上栽培總量第一的食藥用絲狀真菌[1]，也是我國食用菌總產(chǎn)量最高的品種[2]，據(jù)中國食用菌協(xié)會對全國28個省、自治區(qū)、直轄市（不含寧夏、青海、海南和港澳臺等省區(qū)）的統(tǒng)計調(diào)查，2019年全國香菇總產(chǎn)量為1 115.94萬t，占食用菌總產(chǎn)量（3 933.87萬t）的28.37%，是香菇栽培主產(chǎn)區(qū)農(nóng)村經(jīng)濟和農(nóng)民收入的主要來源。香菇的栽培遍布全國各地，栽培模式、栽培技術、設施設備等都根據(jù)當?shù)卦耘嗔晳T各具特色[3]，且出菇時間因氣候不同亦有所差異，全年都有鮮菇產(chǎn)出。但也由于香菇栽培技術的參差不齊，尤其是一些老產(chǎn)區(qū)，蟲害不斷發(fā)生，影響了香菇產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展[4]。

在食用菌的栽培過程中，因栽培環(huán)境陰暗潮濕，培養(yǎng)料營養(yǎng)豐富，食用菌氣味濃郁等特點，適宜跳蟲、螨蟲等多種害蟲的生長繁殖，這些害蟲在取食食用菌菌絲和子實體的同時能夠傳播多種病原微生物，導致培養(yǎng)料污染、菌絲死亡、產(chǎn)量降低等，嚴重時甚至無法出菇[5]。目前國內(nèi)對香菇害蟲種類的報道較少，且多為單個地區(qū)的發(fā)生情況分析[4]。研究對國內(nèi)多個香菇主產(chǎn)區(qū)香菇發(fā)菌期和出菇期出現(xiàn)蟲害進行調(diào)查取樣和分類鑒定，明確害蟲種類，并提出對應的防控措施，以期對香菇蟲害防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 蟲樣采集方法

在浙江、江蘇、云南、河南、河北、北京、新疆、山東等8省的20個香菇栽培基地采集香菇發(fā)菌期和出菇期的蟲害樣本，幼蟲、成蟲均采集于香菇培養(yǎng)料或子實體上，每個基地隨機采集活躍的幼蟲、成蟲蟲樣10份（表1），小型蟲樣分別浸泡于裝有75%乙醇的離心管中保存[6]。在同一基地同一時間采集的蟲樣鑒定結果相同時視為一個蟲樣種類，合并記錄。

1.2 形態(tài)學鑒定

將采集的雙翅目蟲樣按張曉云等[7]的方法制作成玻片標本后在顯微鏡下觀察，主要觀察成蟲頭部的復眼、觸角和唇基，胸部的足和翅脈，腹部的尾器等部位[8]；跳蟲蟲樣按Nesbitt’s fluid法制片后在顯微鏡下觀察，主要觀察成蟲頭部、胸部和腹部上的關鍵部位；鱗翅目、鞘翅目蟲樣直接在體視鏡下觀察，觀察幼蟲或成蟲的頭部、胸部和腹部上的關鍵部位。參考昆蟲分類學相關文獻[9，10]和http：//www.collembola.org/的分類描述，將蟲樣鑒定到科。

1.3 分子生物學鑒定

取采集的單只幼蟲或成蟲頭部于1.5 mL離心管中，加入適量液氮研磨呈粉狀后，提取基因組DNA。以基因組DNA為模板，用正向引物COF14（5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3'）和反向引物COR72（5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAA ATC-3'）[11]PCR擴增線粒體COI基因片段。PCR反應體系和擴增程序見文獻[12]。擴增產(chǎn)物由擎科生物工程（南京）股份有限公司進行測序。

1.4 序列分析

測序結果在NCBI（美國國家生物技術信息中心）上BLAST進行同源性比對分析，初步確認蟲樣分類學地位。選擇蟲害種類中數(shù)量和種類最多科構建系統(tǒng)進化樹，以鱗翅目歐洲谷蛾為外群種類，用MEGA6.0軟件Neighbor-joining法構建，用Maxi?mum Composite Likelihood計算基因距離，自展分析重復1000次。

2 結果與分析

2.1 香菇發(fā)菌期主要害蟲鑒定結果

香菇發(fā)菌期相對封閉，培養(yǎng)料和菌絲有出菇袋的保護，不易受到害蟲的為害，但一些體型較小的昆蟲仍然可以從接種口、袋砂眼處進入袋內(nèi)為害。在浙江省麗水市和桐廬市香菇基地的蟲害調(diào)查中，采集到的害蟲均為雙翅目害蟲，由形態(tài)特征分別確定屬于眼蕈蚊科、癭蚊科和蚤蠅科三科，通過在NC?BI上與已公開序列的COI基因片段序列比對，同源性都在98%以上，因此初步確定為異遲眼蕈蚊、癭蚊和泰納異蚤蠅三種害蟲（表2）。這三種昆蟲幼蟲都具有體型小、喜鉆蛀、繁殖快的特點，發(fā)生初期很難發(fā)現(xiàn)，即使發(fā)現(xiàn)幼蟲在袋內(nèi)鉆蛀，難以防治（圖1）。

2.2 香菇出菇期主要害蟲鑒定結果

在香菇轉色完成后脫袋出菇，由于失去塑料袋的保護，昆蟲可直接取食或產(chǎn)卵，因此出菇期的害蟲種類較發(fā)菌期在種類和數(shù)量上都有明顯上升（圖2）。形態(tài)特征鑒定（表2），收集到的200多條蟲樣與雙翅目、鱗翅目、鞘翅目、彈尾目4個目的8個科描述一致，COI序列分析結果顯示所有蟲樣的同源性均在98%以上，但與長角跳蟲和出尾蕈甲同源性最高的已知序列僅鑒定到科和亞科，布菌蚊鑒定到屬。在采集到的害蟲中，雙翅目的眼蕈蚊科發(fā)生范圍廣，危害程度高。

表1 香菇蟲樣采集地點及時間

表2 香菇發(fā)菌期的蟲害種類

圖1 香菇發(fā)菌期癭蚊幼蟲的為害癥狀及體視鏡下幼蟲形態(tài)

表3 香菇出菇期的害蟲種類

圖2 香菇出菇期蟲害癥狀及體視鏡下幼蟲、成蟲形態(tài)

2.3 眼蕈蚊科聚類分析

選擇調(diào)查中發(fā)生較多的眼蕈蚊科蟲樣進行聚類分析，構建基于COI基因的系統(tǒng)進化樹（圖3）。11個樣本聚為三類，采自湖北省遠安縣的蟲樣Hbya-2020與Bradysia peraffinis聚為一支；采自湖北省隨州市（Hbsz-2017）、北京市大興區(qū)（Bjdx-2018）、山東省淄博市淄川區(qū)七河村（Sdqh-2019）、江蘇省丹陽市（Jsdy-2020）和河北省阜平縣（Hbfp-2020）的5個樣本與厲眼蕈蚊（Lycoriella ingenua）聚為一類；采自河南省駐馬店市（Hnzmd-2019）、河南省確山縣（Hnqs-2019）、云南省楚雄州（Yncx-2017）、浙江省桐廬縣（Zjtl-2020）和江蘇省泰州市（Jstz-2019）的5個蟲樣與異遲眼蕈蚊（Bradysia impatiens）聚為一個單元，其中Jstz-2019與其他4個親緣關系相對較遠；發(fā)育樹中所有供試蟲樣與外群分開。

圖3 基于COI基因的眼蕈蚊科物種系統(tǒng)發(fā)育樹

3 小結與討論

目前國內(nèi)栽培香菇大多采用以木屑為主要原料的菌棒栽培法，需要有塑料大棚、溫控大棚等設施以維持發(fā)菌、出菇所需的溫度、濕度等環(huán)境條件的相對穩(wěn)定，而為害香菇的大部分害蟲為腐食性昆蟲，所需生存環(huán)境與香菇栽培環(huán)境一致，同時香菇菌絲和子實體都能夠產(chǎn)生氣味濃郁的揮發(fā)性物質，容易吸引外界昆蟲進入菌袋產(chǎn)卵[13]。因此，在栽培香菇過程中，害蟲多數(shù)為腐食性且體型較小的昆蟲，陳俏彪等[4]調(diào)查浙江代料香菇的蟲害，共調(diào)查到昆蟲綱71種害蟲，其中平菇厲眼菌蚊和黑糞蚊為當?shù)貎?yōu)勢種群；曹建剛[14]報道了西安的香菇生產(chǎn)中真菌癭蚊為害嚴重。筆者研究結果表明雙翅目害蟲的數(shù)量和種類最多，與前人報道基本一致。

從調(diào)查結果可以看出，在香菇的兩個生長期都會受到害蟲為害，發(fā)菌期有出菇袋阻擋，鉆進袋內(nèi)為害的幼蟲無法通過噴施殺蟲劑的方式防治；出菇期的菌絲和子實體完全裸露在外，且對化學農(nóng)藥敏感，藥劑防蟲易出現(xiàn)藥害，因此一旦發(fā)生蟲害，很難防治。對于香菇的蟲害防控，應以安全性較高的物理防控和生物防控為主，林金盛等[15]對輕簡化設施栽培食用菌的蟲害調(diào)查后提出以“產(chǎn)前預防、產(chǎn)中阻斷、采后清理”為原則的物理防控措施，這些措施對工廠化栽培香菇的蟲害防控同樣有效[16]。

首先要保持栽培場所環(huán)境清潔，減少蟲源繁殖。保持栽培區(qū)及周邊環(huán)境的清潔，及時清理廢料、垃圾、雜草等可能成為蟲害繁殖溫床的源頭，未使用的原材料應堆放在干燥、潔凈、避雨的專用原料倉庫，發(fā)菌室、出菇棚以外的區(qū)域可定期使用藥物殺蟲。發(fā)菌室、出菇棚在空置期進行徹底消毒殺蟲，減少蟲源殘留。密閉性好且有蒸汽加溫設施的大棚或夏季空置的大棚可通過高溫悶棚的方式殺滅棚內(nèi)殘留雜菌害蟲。

其次可利用物理設施，阻斷蟲源進入途徑。在栽培區(qū)添加必要的防蟲裝置，阻擋外界蟲源進入栽培區(qū)繁殖為害。工廠化生產(chǎn)模式，應在發(fā)菌室內(nèi)設置新風系統(tǒng)，空氣過濾后進入發(fā)菌室，定時清洗、更換過濾網(wǎng)；出菇棚可采用“兩網(wǎng)一燈一板”的物理防控技術，棚外覆蓋遮陽網(wǎng)、防蟲網(wǎng)等防護設施；大棚內(nèi)掛黃板、誘蟲燈等，在出入口增設緩沖間或安裝紗簾，均可起到阻擋外界蟲源的作用。

當蟲口密度較高并影響香菇生長時，應選擇安全高效的殺蟲劑防治，尤其是一些環(huán)境兼容性好的微生物制劑[17]或植物源農(nóng)藥[18]，都能達到防治效果。