邵躍

（錦州市科學(xué)技術(shù)研究院，遼寧 錦州 121000）

海洋污損生物主要類群包括藻類、水螅、龍介蟲、藤壺和海鞘等，具有代表意義的有牡蠣、紫貽貝等，它們會(huì)吸附在船舶、網(wǎng)箱、海底各種管道上，給生產(chǎn)和生活帶來(lái)一定的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

Hns（一種從植物中提取的毒性物質(zhì)，其毒性和機(jī)理暫不清楚，暫稱Hns）對(duì)生物的不同組織細(xì)胞都有一定的毒害作用。一定濃度的Hns對(duì)生物脅迫一定時(shí)間后，會(huì)造成細(xì)胞核腫脹、核膜消失或脫落、線粒體腫脹、線粒體含量增多等亞顯微結(jié)構(gòu)的病理變化[2]，嚴(yán)重時(shí)核膜消失，核降解，線粒體內(nèi)脊崩解，細(xì)胞膜系統(tǒng)空泡化，溶酶體增多，而后減少。這樣的變化會(huì)隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而加劇，直到細(xì)胞枯萎死亡，說(shuō)明Hns對(duì)牡蠣等海洋污損生物具有一定的防污作用?，F(xiàn)通過(guò)研究Hns對(duì)牡蠣機(jī)體的超顯微結(jié)構(gòu)的影響，以了解Hns的毒性，進(jìn)而確定Hns是否可成為新型低毒高效的防污試劑。

1 研究方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）生物。牡蠣，購(gòu)自大連黃海海區(qū)黑石礁水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)，殼長(zhǎng)（8.0±0.5）cm，殼寬（6.0±0.5）cm，殼高（3.0±0.5）cm，洗去殼外污物。選取10枚大小均等的牡蠣在10 L水缸中馴化72 h，曝氣，每天更換1/2新鮮海水。

（2）儀器。電子顯微鏡。

（3）藥品。Hns（粗提物，由大連大學(xué)生物工程學(xué)院提供，母液10.000 g/L）。

1.2 試驗(yàn)方法

將牡蠣在ρ（Hns）為32 mg/L的海水中暫養(yǎng)7 d，以備實(shí)驗(yàn)用。取材時(shí)將貝殼打開，取外列鰓的中段，用生理鹽水反復(fù)清洗后，放入2.5%的戊二醛（0.1 mol/L的磷酸緩沖液配制，pH值7.2）中，4℃冰箱固定12 h；后于0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）中用超聲波清洗器震蕩0.5 min，用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）反復(fù)沖洗3次，每次15 min；再放入1%鋨酸中固定12 h，而后用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）反復(fù)沖洗3次，每次15 min。乙醇脫水，醋酸異戊酯置換，DX-1臨界點(diǎn)干燥器干燥，IB-3離子濺射儀噴鉑，掃描電鏡觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物表面超顯微結(jié)構(gòu)對(duì)比分析

在ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣的鰓絲發(fā)生脫落，牡蠣鰓表面的變化見圖1（a）（b）（c）（d）（e）（f）。由圖1可見，鰓絲脫落最終導(dǎo)致牡蠣的鰓微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使呼吸功能大大降低，進(jìn)而說(shuō)明Hns對(duì)牡蠣等海洋污損生物具有一定的防治作用。

圖1 Hns對(duì)鰓的影響

2.2 生物內(nèi)部超顯微結(jié)構(gòu)對(duì)比分析

在 ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣鰓組織細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生了病理變化，如核膜腫脹、線粒體腫脹、內(nèi)脊消失、溶酶體含量增多，細(xì)胞器邊緣模糊變化，牡蠣鰓內(nèi)部的變化見圖2（a）（b）。

圖2 Hns對(duì)鰓內(nèi)部的影響

由圖2可見，細(xì)胞核核膜出現(xiàn)了消失趨勢(shì)，細(xì)胞核開始崩解，這樣的病理變化會(huì)導(dǎo)致機(jī)體趨于死亡，手動(dòng)刺激牡蠣的外殼，如發(fā)現(xiàn)外殼無(wú)閉殼現(xiàn)象，可判斷為死亡。在 ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣肝胰腺內(nèi)部的變化如圖3（a）（b）。

圖3 Hns對(duì)肝胰腺內(nèi)部的影響

肝胰腺是貝類消化、代謝、解毒的主要組織器官。由圖3可見，在一定的ρ（Hns）、一定時(shí)間的脅迫下，牡蠣肝胰腺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定的病理變化。細(xì)胞核邊際模糊，核膜破碎，細(xì)胞核開始分解，染色質(zhì)顏色加深且分布不均勻，核降解，線粒體腫脹破碎。由此可知，Hns對(duì)牡蠣肝胰腺內(nèi)部具有一定的影響。