戎鳳敏 秦海霞 張景航 張嬌

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 453100）

卵巢癌是臨床常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第3位，死亡率位居?jì)D科惡性腫瘤第1位[1]。由于卵巢癌發(fā)病隱匿，目前缺乏有效的普查和早期診斷方法，約有70%以上的患者就診時發(fā)現(xiàn)腫瘤已處于晚期，預(yù)后極差[2]。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲與患者的預(yù)后密切相關(guān)，是患者死亡的直接原因，而nm23-H1基因重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因[3]，通過橡黃素上調(diào)肝癌細(xì)胞的nm23-H1可明顯抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力[4]。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)型鈣粘附蛋白（N-cadherin，Ncad）可通過上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial- mesenchymal transition，EMT）途徑參與腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，對妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定影響[5]?；诖?，本文對118例卵巢癌患者癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達(dá)及其臨床意義進(jìn)行探究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2013年12月間我院收治的118例卵巢癌患者的臨床資料以及保存的癌組織和癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行研究。所有患者年齡35～65歲、平均年齡51.61±10.65歲，≤60歲者44例、＞60歲者74例，絕經(jīng)前者43例、絕經(jīng)后者75例，病理類型：漿液型腺癌71例、黏液型腺癌39例、其他8例，病理分級：Ⅰ級49例、Ⅱ級40例、Ⅲ級29例，F(xiàn)IGO分期：Ⅰ～Ⅱ期47例、Ⅲ～Ⅳ71例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理檢查確診為卵巢癌；年齡＞18歲；經(jīng)我院倫理委員會審核通過。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；其他卵巢疾病者。所有患者術(shù)前均未接受放化療、激素治療等新輔助抗腫瘤治療，早期患者采用手術(shù)治療為主，晚期患者均接受新輔助化療及姑息性減瘤術(shù)。

1.2 方法

所有卵巢癌組織、癌旁組織標(biāo)本均采用免疫組化SP法[6]：所有病例標(biāo)本均經(jīng)石蠟包埋，切片機(jī)5 μm連續(xù)切片，溫箱烤干，切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水干燥，3%過氧化氫去內(nèi)源性過氧化物酶，pH 6.0枸櫞酸緩沖液抗原修復(fù)，血清工作液封閉10 min后加兔抗人nm23-H1單克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)），4℃冰箱孵育過夜后加入生物素標(biāo)記二抗，二氨基聯(lián)苯（DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、干燥后封片；利用光學(xué)顯微鏡 觀察腫瘤細(xì)胞的染色情況。若細(xì)胞質(zhì)或者是細(xì)胞核內(nèi)部出現(xiàn)棕黃色的顆粒，則將nm23-H1和Ncad標(biāo)記為陽性，用符號“+”代表，若沒有觀察到棕黃色顆粒，則將其標(biāo)記為陰性，用符號“－”代表[7]。

陽性染色為胞漿（少數(shù)為胞漿和胞核）有細(xì)小棕色顆粒沉著，陰性切片中午棕色物質(zhì)出現(xiàn)；陽性程度[8]按陽性細(xì)胞所占比例分為4級：0（-）、1%～30%（+）、31%～60%（++）、＞60%（+++）；無病生存期指首次化療日期開始至出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和（或）遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的時間[9]。

1.3 觀察指標(biāo)

根據(jù)卵巢癌病理分為Ⅰ級（n=49）、Ⅱ級（n=40）、Ⅲ級（n=29），全部隨訪者98例根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為轉(zhuǎn)移組（n=35）和無轉(zhuǎn)移組（n=63），分析nm23-H1蛋白、N-cad表達(dá)陽性率與卵巢癌病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系；以陽性++級及以上為高表達(dá)（nm23-H1高表達(dá)組，n=69；Ncad高表達(dá)組，n=34）、以陽性++級為低表達(dá)（nm23-H1低表達(dá)組，n=49；N-cad低表達(dá)組，n=84），比較臨床病理特征之間的nm23-H1、N-cad表達(dá)差異和兩組間的生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，行t檢驗(yàn)或單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料以例或率（n（%））表示，行χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組織及癌旁組織中nm23-H1、N-cad蛋白表達(dá)情況

118例卵巢癌組織中nm23-H1蛋白（見圖1-①）陽性表達(dá)率為78.81%（93/118），其中-級25例、+級24例、++級37例、+++級32例；癌旁組織nm23-H1蛋白陽性表達(dá)率為91.53%（108/118），癌組織nm23-H1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織（χ2=7.548，P=0.006）。

圖1 代表性免疫組化圖

N-cad蛋白（見圖1-②）陽性表達(dá)率為38.98%（46/118），其中-級72例、+級11例、++級19例、+++級16例；癌旁組織N-cad陽性表達(dá)率16.10%（19/118），癌組織N-cad蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（χ2=15.479，P＜0.0001）。

2.2 不同病理分級癌組織中nm23-H1和N-cad表達(dá)水平

Ⅰ級卵巢癌組織nm23-H1表達(dá)總陽性率最高，N-cad總陽性率最低（P＜0.05），見表1和表2。

表1 不同病理分級癌組織中nm23-H1（n（%））

表2 不同病理分級癌組織中N-cad表達(dá)水平（n（%））

2.3 nm23-H1蛋白和N-cad表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

隨訪40個月，獲得全部隨訪資料者98例，失訪率16.95%（20/118），其中轉(zhuǎn)移者35例，無轉(zhuǎn)移者63例；轉(zhuǎn)移者nm23-H1表達(dá)陽性率低于無轉(zhuǎn)移組（P＜0.05），轉(zhuǎn)移者N-cad表達(dá)陽性率（見圖1）高于無轉(zhuǎn)移組（P＜0.05），見表3。

表3 nm23-H1和N-cad表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.4 nm23-H1蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病例特征關(guān)系

nm23-H1低表達(dá)組漿液型腺癌比例更高（P＜0.05），nm23-H1低表達(dá)組和N-cad高表達(dá)組病理分級中Ⅲ級比例高、FIGO分期中Ⅲ～Ⅳ比例高（P＜0.05），見表4和表5。

表4 nm23-H1蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系

表5 N-cad蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系

2.5 生存分析

本文研究隨訪時間自首次化療日期開始，末次隨訪日期為2018年4月，隨訪40個月。獲得全部隨訪資料者98例，nm23-H1低表達(dá)組和N-cad高表達(dá)組3年生存率更低（P＜0.05），見表4。

表5 nm23-H1和N-cad表達(dá)與生存率的關(guān)系

3 討論

人類nm23基因位于17號染色體長臂，該基因編碼具有二磷酸核苷激酶活性的蛋白質(zhì)，對腫瘤的增殖、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移起重要作用[10]。研究表明，nm23基因編碼的蛋白幾乎存在于所有正常細(xì)胞中，而在高分化腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)較高，在低分化及具有高度轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤細(xì)胞中不表達(dá)或僅有微弱表達(dá)[11]。

既往nm23基因家族研究較多，目前已知nm23基因家族包括H1～H10等10個基因，其中nm23-H1與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[12]。E-cad是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白，在細(xì)胞極化、細(xì)胞間黏附以及組織結(jié)構(gòu)當(dāng)中起到重要作用，E-cad的表達(dá)和分布異常與腫瘤細(xì)胞的去分化、侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[13]。近年來研究發(fā)現(xiàn)N-cad在腫瘤發(fā)生進(jìn)展中的相關(guān)作用[14]。但在卵巢癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達(dá)水平的研究較少。

本研究結(jié)果顯示，nm23-H1蛋白表達(dá)與卵巢腫瘤分化程度，卵巢癌病情進(jìn)展相關(guān)。故nm23-H1的表達(dá)有利于維持細(xì)胞的正常分化，其高表達(dá)水平能夠下調(diào)卵巢腫瘤細(xì)胞的生長速率。nm23抑制基因的兩個重要作用分別是參與二磷酸鳥苷轉(zhuǎn)化，排斥腫瘤細(xì)胞微管蛋白的聚合，影響細(xì)胞骨架狀態(tài)以抑制腫瘤細(xì)胞移動；參與G蛋白調(diào)控的跨膜信息傳遞，阻斷生長信號傳導(dǎo)[15]。

基質(zhì)金屬蛋白酶是卵巢癌敏感性標(biāo)志物，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜來影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和擴(kuò)散[16-17]。nm23-H1基因可正向調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1mRNA與蛋白表達(dá)，負(fù)向調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9 mRNA與蛋白表達(dá)，從而改變細(xì)胞的黏附能力，最終抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移[18]。而N-cad在卵巢癌患者中的表達(dá)水平與腫瘤發(fā)生、病理分期明顯相關(guān)，這說明N-cad高表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞的去分化，增強(qiáng)腫瘤病情進(jìn)展。由于高表達(dá)N-cad可促進(jìn)腫瘤發(fā)生EMT，使相對靜止的腫瘤細(xì)胞變?yōu)橛羞\(yùn)動能力的細(xì)胞[19]，因此在腫瘤轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮重要作用。

本次結(jié)果顯示，N-cad高表達(dá)確能使卵巢癌患者預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)提高。

綜上所述，卵巢癌組織中的nm23-H1蛋白及N-cad高表達(dá)均能影響腫瘤細(xì)胞分化、干擾臨床病情進(jìn)展，從而影響卵巢癌患者的生存期。