魏博 潘登浪 劉子凡 曾憲海 李煒?lè)?/p>

摘 ?要：為探索出一套適于珠芽魔芋的組培快繁技術(shù)體系，本研究以珠芽黃魔芋不同發(fā)育時(shí)期的葉片為外植體，開(kāi)展組培快繁技術(shù)研究。結(jié)果表明：以開(kāi)始伸出鱗片葉片作為外植體材料，75%酒精消毒30?s后，0.1% HgCl₂溶液中浸泡15?min為宜，其成活率達(dá)到96.7%;最優(yōu)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+TDZ 0.5?mg/L+NAA 0.1?mg/L+蔗糖30.0?g/L+瓊脂6.0?g/L，其誘導(dǎo)率達(dá)到95.6%;最優(yōu)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 1.0?mg/L+NAA 0.5?mg/L+蔗糖30.0?g/L+瓊脂6.0?g/L，不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到71.1%，單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)達(dá)到2.88;全展葉片苗在MS+NAA 0.25?mg/L+蔗糖15.0?g/L+瓊脂?6.0?g/L培養(yǎng)基的生根率達(dá)到100.0%，平均根數(shù)達(dá)到1.36。以開(kāi)始伸出鱗片葉片為外植體建立的珠芽黃魔芋組培快繁技術(shù)體系，達(dá)到了魔芋種苗的規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)水平，對(duì)解決珠芽魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種芋供不應(yīng)求的問(wèn)題具有積極意義。

關(guān)鍵詞：珠芽魔芋;組織培養(yǎng);快速繁殖;耐蔭植物中圖分類號(hào)：S632.3??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Tissue Culture and Plant Regeneration of Amorphophallus bulbifer

WEI Bo^1，2， PAN Denglang^2*， LIU Zifan^1*， ZENG Xianhai²， LI Weifang²

1. College of Tropical Crops， Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China; 2. Rubber Research Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Danzhou Investigation and?Experiment Station of Tropical Crops， Ministry of Agriculture and?Rural Affairs， Danzhou， Hainan 571737， China

Abstract： In order to explore the tissue culture and rapid propagation ofAmorphophallus bulbifer，?the leaves of different growth period ofA. bulbiferwere used as explants.The best surface sterilization was achieved by immersing the explants in the solution of 75% alcohol for 30 seconds then in 0.1% HgCl₂solution for 15 minutes and the survival rate reached 96.7%.?The best callus induction medium was MS+TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+sugar 30.0 g/L+agar 6.0 g/L and the callus induction rate reached 95.6%. The best bud induction medium was MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+sugar 30.0 g/L+?agar 6.0 g/L on which?the bud induction rate and number of differentiation buds of callus with unit inoculation quality reached 71.1% and 2.88.?The best medium for rooting was MS+NAA 0.25 mg/L+sugar 15.0 g/L+agar 6.0 g/L， on which the rooting rate reached 100.0% and the average root number reached 1.36. Tissue culture and rapid propagation technology system ofA. bulbifer was established by extruding scale leaves as explants，which?reached the scale production technology level of konjac seedlings and is of positive significance to solve the problem of shortage of seed taro in the development of konjac industry.

Keywords： Amorphophallus bulbifer;?tissue culture; rapid propagation; shade plant

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.04.010

魔芋又名蒟蒻、鬼芋、花梗蓮、藥翦等，屬天南星科（Araceae）魔芋屬（AmorphophallusBlume）多年生單子葉植物^[1]，是植物界內(nèi)目前發(fā)現(xiàn)唯一能夠在其發(fā)達(dá)的地下球莖中合成大量葡甘聚糖的草本植物，葡甘聚糖是地下球莖的主要成分，含量高達(dá)50%以上，具有降脂降血糖^[2-3]、利便^[4]以及預(yù)防高血壓和血栓^[5]等功效，并且由其地下球莖制成的魔芋粉具有較好的穩(wěn)定性、持水性、凝膠性、復(fù)配性以及高黏性，被廣泛應(yīng)用于環(huán)保、食品、醫(yī)藥、保健、農(nóng)業(yè)、日化及建筑等領(lǐng)域^[6-7]，具有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。魔芋在我國(guó)已經(jīng)有2000多年的栽培歷史^[8]，其中花魔芋（Amorphophallusrivieri Durieu）是栽培比較廣泛的品種^[9]，但其繁殖系數(shù)低、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)且規(guī)?；N植病害嚴(yán)重^[10-12]，尤其不適于在熱帶高溫高濕多雨生態(tài)區(qū)種植，嚴(yán)重制約著我國(guó)魔芋產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

珠芽魔芋[Amorphophallus bulbifer（Roxb.） Blume]起源于東南亞熱帶雨林地區(qū)^[11]，是一類可以在植株主莖與分枝、分枝與分枝、分枝與裂葉、裂葉與裂葉交叉點(diǎn)上生長(zhǎng)出氣生珠芽球莖的魔芋種，主要分布在中國(guó)云南、老撾、緬甸、泰國(guó)、印度、孟加拉國(guó)以及馬來(lái)西亞等地^[13]。珠芽魔芋植株高1.6～1.8?m，喜高溫高濕的環(huán)境，但懼強(qiáng)光直射，在遮蔭度75%的環(huán)境下可以達(dá)到最佳產(chǎn)量^[14]，將其套種在3年生橡膠樹(shù)下的光合速率和產(chǎn)量最高，且魔芋也可以極大地促進(jìn)橡膠樹(shù)的生長(zhǎng)^[15]，不僅可以緩解林下土地資源閑置等問(wèn)題，還可以穩(wěn)固橡膠在國(guó)家可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略資源的地位。珠芽魔芋具有葡甘聚糖含量高、生長(zhǎng)周期短、生育期長(zhǎng)及抗病能力強(qiáng)等優(yōu)良特性，是魔芋屬中適宜于熱帶、亞熱帶低海拔地區(qū)高溫高濕環(huán)境的半陰性經(jīng)濟(jì)作物，具有良好的產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)與市場(chǎng)前景。但目前在珠芽魔芋栽培中存在用種量較大的問(wèn)題，生產(chǎn)中多采用繁育葉面球莖或地下球莖切塊的繁殖方式，遠(yuǎn)不能滿足與日俱增的種苗需求，并且種芋品系不純，

內(nèi)在品質(zhì)存在明顯差異，組培快繁技術(shù)對(duì)解決珠芽魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種芋純化及種芋供不應(yīng)求的問(wèn)題具有積極意義。雖然關(guān)于魔芋的組織培養(yǎng)技術(shù)已有諸多報(bào)道^[16-21]，但是關(guān)于珠芽魔芋組培研究的報(bào)道較少，吳金平等^[22]采用珠芽魔芋葉鞘為外植體建立了組培技術(shù)體系，但未報(bào)道愈傷組織、不定芽誘導(dǎo)率等技術(shù)參數(shù)。胡楠^[23]以珠芽魔芋2年生球莖為外植體，探索了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比和培養(yǎng)基狀態(tài)對(duì)外植體褐化和愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)的影響，發(fā)現(xiàn)在所試激素配比下淺層液體培養(yǎng)基對(duì)防止外植體褐化和愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)均優(yōu)于固體培養(yǎng)基，其研究結(jié)果還顯示用球莖做外植體褐化率較高。桂明春等^[24]以珠芽魔芋試管苗葉柄為外植體，探索了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)珠芽魔芋組織培養(yǎng)各環(huán)節(jié)的影響。珠芽魔芋外植體的選擇主要是球莖和葉柄，且珠芽類魔芋種質(zhì)較多，不同外植體材料及種質(zhì)使用的最佳植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合差異顯著，目前關(guān)于以珠芽魔芋不同發(fā)育時(shí)期的葉片為外植體建立組培快繁體系的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以從云南省景洪市獲得的珠芽黃魔芋不同發(fā)育時(shí)期的葉片為外植體，開(kāi)展組培快繁研究，以探索出一套適于珠芽黃魔芋的組培快繁技術(shù)體系，解決熱區(qū)魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展面臨的健康優(yōu)良種芋供應(yīng)不足等問(wèn)題，以期為加快熱區(qū)魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供技術(shù)支持。

1??材料與方法

1.1材料

2018年從云南省景洪市獲得珠芽黃魔芋（Amorphphallus bulbifer）葉面球莖，種植于海南省?？谑兄袊?guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所實(shí)驗(yàn)室的盆栽試驗(yàn)區(qū)內(nèi)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要分別采集不同發(fā)育時(shí)期的葉片作為外植體材料開(kāi)展組培實(shí)驗(yàn)，包括葉芽、開(kāi)始伸出鱗片葉片、完全伸出鱗片葉片、剛展開(kāi)的葉片和成熟的葉片（圖1）。

1.2方法

1.2.1??外植體消毒??采集珠芽黃魔芋開(kāi)始伸出鱗片的葉片作為外植體材料，將材料清洗干凈后，放置在干凈的燒杯中并蓋上一層紗布（用橡皮筋固定），然后用自來(lái)水沖洗1?h后，最后在超凈工作臺(tái)上按無(wú)菌操作要求對(duì)外植體材料進(jìn)行消毒處理。實(shí)驗(yàn)共設(shè)計(jì)4個(gè)消毒處理，即0.1% HgCl₂溶液浸泡5、10、15、20?min，每處理3個(gè)重復(fù)，每處理60段材料。無(wú)菌操作步驟如下：（1）用75%酒精消毒30?s，然后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次;（2）用0.1% HgCl₂溶液分別浸泡5、10、15、20?min，再用無(wú)菌水沖洗5次，最后用無(wú)菌濾紙吸干水分;（3）將材料切成小段，每段長(zhǎng)約0.5?cm，然后接種于MS+6-BA 1.0?mg/L+NAA 0.1?mg/L+蔗糖30?g/L+瓊脂7?g/L的培養(yǎng)基（pH?6.0）中;（4）接種后于25?℃條件下暗培養(yǎng)2周，再轉(zhuǎn)移到25?℃，光照1000～1500?lx下培養(yǎng)，每天光照12?h，30?d后統(tǒng)計(jì)外植體的污染率、褐化率及成活率。

1.2.2 ?外植體材料篩選???選取5種不同發(fā)育時(shí)期葉片作為外植體材料，即葉芽、開(kāi)始伸出鱗片葉片、剛完全伸出鱗片葉片、剛展開(kāi)的葉片、成熟的葉片，參照1.2.1中的外植體消毒（0.1% HgCl₂溶液浸泡15?min）、接種、暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)方法進(jìn)行處理，30?d后統(tǒng)計(jì)外植體的污染率、褐化率、愈傷組織誘導(dǎo)率及死亡率。

1.2.3 ?愈傷組織誘導(dǎo)??愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基設(shè)TDZ和NAA?2個(gè)因子，TDZ設(shè)置3個(gè)水平，分別為0.1、0.5、1.0?mg/L;NAA設(shè)置3個(gè)水平，分別為0.1、0.5、1.0?mg/L，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)基中添加蔗糖30?g/L，瓊脂6?g/L，pH調(diào)至6.0。實(shí)驗(yàn)采用開(kāi)始伸出鱗片的葉片為外植體材料，參照1.2.1中的外植體消毒方法（0.1% HgCl₂溶液浸泡15?min）進(jìn)行消毒并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種45段，然后參照1.2.1中的暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，30?d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。

1.2.4 ?不定芽誘導(dǎo)??不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基設(shè)6-BA和NAA?2個(gè)因子，6-BA設(shè)置3個(gè)水平，分別為0.1、0.5、1.0?mg/L;NAA設(shè)置3個(gè)水平，分別為0.1、0.3、0.5?mg/L，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)基中添加蔗糖30?g/L，瓊脂6?g/L，pH調(diào)至6.0。選取接種質(zhì)量約為5?g的愈傷組織小塊，接種至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種45塊，然后置于28?℃、光照2000?lx下培養(yǎng)，每天光照12?h，培養(yǎng)45?d后統(tǒng)計(jì)各處理的不定芽誘導(dǎo)率及單位質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)。

1.2.5 ?生根誘導(dǎo)??設(shè)4個(gè)因素，分別為NAA、不同狀態(tài)的組培苗、基本培養(yǎng)基和蔗糖濃度。其中NAA濃度設(shè)4個(gè)水平，分別為0.00、0.10、0.25、0.50?mg/L;組培苗狀態(tài)設(shè)2個(gè)水平，3?cm長(zhǎng)的芽和全展葉片苗;基本培養(yǎng)基設(shè)2個(gè)水平，1/2 MS和MS;蔗糖濃度設(shè)2個(gè)水平，15、30?g/L;添加瓊脂6?g/L，pH調(diào)至5.8。采用L₈（4×2⁴）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每處理3個(gè)重復(fù)，每處理接種45株。將叢芽分切成單芽，接種于生根培養(yǎng)基，然后置于28?℃、光照1000?lx下培養(yǎng)，每天光照12?h，4周后統(tǒng)計(jì)各處理生根株數(shù)及長(zhǎng)于2?cm根數(shù)。

1.3計(jì)算公式

污染率=污染外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

褐化率=褐化外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

成活率=成活外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

死亡率=死亡外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

愈傷組織誘導(dǎo)率=長(zhǎng)愈傷組織外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

不定芽誘導(dǎo)率=萌芽的外植體塊數(shù)/接種總塊數(shù)×100%

單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)=N/（W₂–W₁）

式中，N：芽長(zhǎng)大于2 cm個(gè)數(shù);W₁：培養(yǎng)基+?瓶子;W₂：培養(yǎng)基+瓶子+培養(yǎng)物。

生根率=生根株數(shù)/接種單苗總株數(shù)×100%

平均根數(shù)=長(zhǎng)于2?cm根數(shù)/接種單苗總株數(shù)

1.4數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016和DPS 7.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多重比較采用鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法（Duncans multiple ranger test）。

2??結(jié)果與分析

2.1不同消毒時(shí)間對(duì)開(kāi)始伸出鱗片葉片外植體消毒效果的影響

從表1可知，0.1% HgCl₂的消毒時(shí)間對(duì)開(kāi)始伸出鱗片葉片外植體消毒效果具有顯著性的影響。消毒時(shí)間低于15?min，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，污染率降低，消毒時(shí)間為5?min和10?min時(shí)污染率分別為36.7%和23.3%，污染率較高，觀察到的污染均是細(xì)菌性污染，而消毒時(shí)間為15?min和20?min時(shí)污染率均為0，所以消毒時(shí)間過(guò)短不能完全殺死細(xì)菌。但是隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，褐化率也逐漸升高，消毒時(shí)間為15?min和20?min時(shí)褐化率分別達(dá)到3.3%和8.3%。通過(guò)綜合評(píng)價(jià)，最佳消毒方式為使用0.1% HgCl₂消毒15?min，其污染率為0，褐化率3.3%，成活率達(dá)到96.7%。

2.2不同發(fā)育時(shí)期外植體材料對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

不同發(fā)育時(shí)期的外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)效果存在差異（表2）。葉芽的污染率和褐化率較高，分別達(dá)到16.7%和56.7%，可能原因是葉芽較幼嫩，消毒劑對(duì)其自身傷害較大，且卷曲多縫，消毒劑難以到達(dá)部分區(qū)域，導(dǎo)致消毒不夠徹底。剛展開(kāi)的葉片和成熟的葉片外植體材料生長(zhǎng)緩慢，葉片邊緣黃化，最終全部死亡。開(kāi)始伸出鱗片葉片與剛完全伸出鱗片葉片的污染率、褐化率、死亡率均差異不顯著，并且愈傷組織誘導(dǎo)率分別達(dá)到96.7%和93.3%。通過(guò)綜合評(píng)價(jià)，最佳的外植體材料為開(kāi)始伸出鱗片葉片。

2.3不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)效果存在差異（表3）。當(dāng)TDZ濃度一定時(shí)，隨著NAA濃度的增大，愈傷組織誘導(dǎo)率逐漸下降，在TDZ濃度為0.1?mg/L與NAA濃度為1.0?mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最低，僅為26.7%;而當(dāng)NAA一定時(shí)，隨著TDZ濃度的增大，愈傷組織誘導(dǎo)率先升高后下降，在NAA濃度為0.1?mg/L與TDZ濃度為0.5?mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最高。這表明在愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，TDZ起主導(dǎo)作用，而低濃度NAA有利于愈傷組織的誘導(dǎo)。通過(guò)綜合評(píng)價(jià)，愈傷組織誘導(dǎo)最佳植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比為：TDZ濃度為0.5?mg/L，NAA濃度為0.1?mg/L，此時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到95.6%（圖2A）。

2.4不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)不定芽誘導(dǎo)率的影響不顯著，而對(duì)單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)的影響存在顯著差異（表4）。隨著6-BA濃度的增大，單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)增大，當(dāng)6-BA濃度為0.1、0.5?mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大，單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)降低，當(dāng)6-BA濃度為1?mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大，單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)增大。通過(guò)綜合評(píng)價(jià)，不定芽誘導(dǎo)最佳植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比為：6-BA濃度為1?mg/L，NAA濃度為0.5?mg/L，此時(shí)單位接種質(zhì)量愈傷組織分化芽數(shù)達(dá)到2.88個(gè)/g（圖2B）。

2.5不同培養(yǎng)基成分對(duì)生根誘導(dǎo)的影響

將叢芽分切成單芽，接種于生根培養(yǎng)基，在各處理間生根率差異較大（表5），其中處理6的生根率最高（圖2C），達(dá)到100.0%，處理7的生根率最低，僅為44.5%。通過(guò)比較F值發(fā)現(xiàn)，對(duì)生根誘導(dǎo)影響大小依次為：組培苗不同狀態(tài)>?NAA>蔗糖濃度>基本培養(yǎng)基。

由表5可見(jiàn)，當(dāng)NAA濃度在0～0.25?mg/L范圍內(nèi)增大時(shí)，全展葉片苗的生根率逐漸升高，在

NAA濃度達(dá)到0.25?mg/L時(shí)，生根率達(dá)到100.0%。當(dāng)NAA濃度在0.1～0.5?mg/L范圍內(nèi)增大時(shí)，全展葉片苗的平均每株生根數(shù)逐漸下降，但是長(zhǎng)出的根會(huì)更加粗壯。綜合考慮下，全展葉片苗在MS+NAA 0.25?mg/L+蔗糖15?g/L+瓊脂6.0?g/L培養(yǎng)基中最適合生根誘導(dǎo)。

2.6馴化移栽

將經(jīng)生根培養(yǎng)獲得的具根、莖、葉組培苗（根長(zhǎng)2～8 cm，苗高3～5 cm）移到室溫、自然光下閉口放置4 d，移出苗并洗凈粘附于植株基部的培養(yǎng)基，移栽于裝有基質(zhì)的10×7穴盤(pán)中，基質(zhì)成分比為表土∶泥炭∶有機(jī)肥=1∶2∶1，移栽基質(zhì)用

50%多菌靈1000倍+70%農(nóng)用鏈霉素200?mg/L進(jìn)行消毒。移栽后前3?d早晚覆蓋薄膜，4～15?d白天蓋薄膜，晚上揭開(kāi)薄膜，整個(gè)過(guò)程控制濕度在90%以上，并遮蓋2層遮陽(yáng)網(wǎng)，移栽15?d后，可揭開(kāi)薄膜進(jìn)行苗圃常規(guī)管護(hù)^[22]。移栽30?d后，移栽成活率為97%（圖2D）。

3??討論

影響愈傷組織誘導(dǎo)的因素一般包括消毒方式、外植體的類型以及培養(yǎng)基的類型等。其中，消毒時(shí)間是獲得無(wú)菌培養(yǎng)材料的重要因素，在本研究中發(fā)現(xiàn)隨著0.1% HgCl₂消毒時(shí)間的增加，污染率逐漸下降，褐化率逐漸升高，而成活率先升高再下降，這表明消毒劑消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)對(duì)外植體本身造成傷害，這與李新等^[25]對(duì)山蔞嫩莖消毒的研究結(jié)果一致。不同部位的外植體以及外植體的新老程度都會(huì)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有極大影響。目前關(guān)于魔芋組培外植體的選取研究中，使用芽、芽鞘^[26]、葉片^[27]、葉柄^[28]、球莖^[29]、種子^[30]作為外植體材料并成功誘導(dǎo)出完整植株的研究皆有報(bào)道，而在珠芽魔芋組培快繁研究中，主要以球莖和葉柄作為外植體材料^[23-24]，而對(duì)不同發(fā)育時(shí)期的葉片作為外植體的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用珠芽黃魔芋不同發(fā)育時(shí)期的葉片作為外植體時(shí)發(fā)現(xiàn)，開(kāi)始伸出鱗片至剛完全伸出鱗片的葉片的污染率、褐化率、死亡率均最低，而愈傷組織誘導(dǎo)最高，可能是該葉片發(fā)育時(shí)期的外植體生長(zhǎng)最活躍，帶菌少，細(xì)胞含酚類化合物較少，生理狀態(tài)處于最適誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)期;葉芽的污染率和褐化率較高，可能是因?yàn)轫斞可L(zhǎng)在高溫高濕的土壤中，不可避免地?cái)y帶了大量的外生菌和內(nèi)生菌，而內(nèi)生菌極難通過(guò)表面消毒殺死，所以造成外植體污染率極高，這與劉進(jìn)平^[31]對(duì)胡椒組培過(guò)程中污染問(wèn)題的研究結(jié)果一致;本研究中葉芽褐化率和死亡率較高，可能是因?yàn)槿~芽期材料幼嫩，消毒劑對(duì)其傷害比較重。剛展開(kāi)的葉片和成熟的葉片在愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，其生長(zhǎng)速度緩慢，葉片邊緣黃化，最終全部死亡，這與秦正偉等^[27]采用全展開(kāi)時(shí)期葉片作為外植體材料的研究結(jié)果一致。王自布等^[7]以魔芋幼葉、塊莖、莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷組織過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中加入2，4-D或者IAA后，幼葉和莖段的愈傷組織誘導(dǎo)率大于塊莖。張征蘭等^[26]在魔芋組織培養(yǎng)與植株再生的研究中發(fā)現(xiàn)，在MS培養(yǎng)基中只加入細(xì)胞分裂素或生長(zhǎng)素均不能誘導(dǎo)出愈傷組織，只有同時(shí)加入細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素才能成功誘導(dǎo)出愈傷組織。本研究采用剛伸出鱗片葉片作為外植體材料，發(fā)現(xiàn)不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)效果差異顯著，當(dāng)TDZ濃度為0.1?mg/L與NAA濃度為1.0?mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最低，僅為26.7%，而當(dāng)NAA濃度一定時(shí)，隨著TDZ濃度的增大，愈傷組織誘導(dǎo)率先升高后下降，在NAA濃度為0.5?mg/L與TDZ濃度為0.1?mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最高，這表明在愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，細(xì)胞分裂素起主導(dǎo)作用，而低濃度的生長(zhǎng)素有利于愈傷組織的形成，這與莊承紀(jì)等^[28]對(duì)魔芋屬植物愈傷組織誘導(dǎo)的研究結(jié)果一致。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是通過(guò)改變植物內(nèi)源激素的平衡起作用，而內(nèi)源激素的平衡影響植物器官的分化^[32]，所以不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度對(duì)不定芽的誘導(dǎo)具有重要作用。胡悅等^[33]對(duì)魔芋組培快繁的影響因素研究結(jié)果表明，不同細(xì)胞分裂素種類及濃度對(duì)花魔芋腋芽的誘導(dǎo)具有顯著差異，細(xì)胞分裂素濃度過(guò)低或過(guò)高都不利于腋芽的形成。段龍飛等^[34]在花魔芋實(shí)生種子組織培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，低濃度的生長(zhǎng)素與適宜濃度的細(xì)胞分裂素有利于不定芽的分化。本研究中，隨著細(xì)胞分裂素的增加，不定芽誘導(dǎo)率沒(méi)有顯著差異，但單位愈傷組織分化芽數(shù)逐漸增大，最高達(dá)到2.88個(gè)/g，可能原因是設(shè)置的細(xì)胞分裂素濃度范圍尚未達(dá)到不定芽分化最適濃度。

生長(zhǎng)素可以有效促進(jìn)組培苗生根^[35-36]，但濃度過(guò)高則會(huì)產(chǎn)生乙烯，從而產(chǎn)生抑制作用^[37]。趙青華等^[38]在對(duì)魔芋叢生芽生根的誘導(dǎo)過(guò)程中，添加了多效唑，可以與生長(zhǎng)素起協(xié)同作用，使組培苗生根更快。本研究采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，探明了不同狀態(tài)組培苗與培養(yǎng)基成分對(duì)組培苗生根的影響情況，通過(guò)比較F值發(fā)現(xiàn)，對(duì)生根誘導(dǎo)影響大小依次為：組培苗不同狀態(tài)>NAA>蔗糖濃度>基本培養(yǎng)基。原因可能是因?yàn)槿谷~片組培苗能夠進(jìn)行光合作用產(chǎn)生更多的生長(zhǎng)素，更有利于促進(jìn)組培苗的生根，而NAA對(duì)組培苗生根的影響僅次于組培苗不同狀態(tài)，當(dāng)NAA濃度在0～0.25?mg/L范圍內(nèi)增大時(shí)，全展葉片苗的生根率逐漸升高，在NAA濃度達(dá)到0.25?mg/L時(shí)，生根率達(dá)到100.0%，這與蔣曉云等^[39]在研究紅魔芋塊莖生根誘導(dǎo)試驗(yàn)中的結(jié)果相似，蔗糖濃度和基本培養(yǎng)基對(duì)組培苗生根的影響較小。

本研究初步建立了包括外植體消毒與篩選、愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)及馴化移栽的珠芽黃魔芋組培快繁技術(shù)體系，為魔芋種苗的規(guī)?；a(chǎn)提供了技術(shù)支撐，對(duì)解決珠芽魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種芋供不應(yīng)求的問(wèn)題具有積極意義。

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