王振田

摘 要：以銀杏莖段為材料，研究銀杏愈傷組織的誘導(dǎo)與不同培養(yǎng)基滲透勢(shì)的關(guān)系，研究結(jié)果表明，采用蔗糖和大量元素構(gòu)建不同滲透勢(shì)的培養(yǎng)基，愈傷組織的形成與培養(yǎng)基滲透勢(shì)密切相關(guān)：培養(yǎng)基滲透勢(shì)接近外植體滲透勢(shì)時(shí)誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)時(shí)間最短。

關(guān)鍵詞：生物教學(xué)；銀杏；愈傷組織；滲透勢(shì)；外植體

中圖分類號(hào)：G633.91 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-3561（2016）27-0081-01

一、教學(xué)銀杏與組織培養(yǎng)

銀杏又稱白果樹(shù)、公孫樹(shù)，屬于裸子植物，其樹(shù)干筆直。植物組織培養(yǎng)是指在無(wú)菌條件下，對(duì)離體植物組織（器官或細(xì)胞）分離并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使其能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，甚至分化發(fā)育成一完整的植株的一門實(shí)驗(yàn)技術(shù)。組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是植物細(xì)胞的全能性，即植物體的每個(gè)細(xì)胞攜帶著一套完整的基因組，因此，具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。植物組織當(dāng)中原本已經(jīng)分化的細(xì)胞，一旦脫離原有的機(jī)體環(huán)境，成為離體狀態(tài)，在適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件下就會(huì)表現(xiàn)出全能性，從已經(jīng)分化定型的細(xì)胞脫離分化，成為恢復(fù)分裂能力的細(xì)胞，并能重新生長(zhǎng)發(fā)育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)已經(jīng)走過(guò)了近百年的歷程，它的歷史不僅證明了植物的每一個(gè)生活細(xì)胞都含有一種植物的全部遺傳信息，在一定的條件下可以發(fā)育成一個(gè)完整的植株，而且在一定范圍內(nèi)人們可以按照意愿，改變和調(diào)節(jié)植物的發(fā)育。但這種調(diào)節(jié)和改變只是局部的，主要是通過(guò)改變培養(yǎng)其中的激素和培養(yǎng)條件，從遺傳基礎(chǔ)上的徹底改造僅僅是開(kāi)始。單就其組織培養(yǎng)而言，還有十分漫長(zhǎng)的道路。

二、教學(xué)意義

銀杏原來(lái)是我國(guó)特有的樹(shù)種，現(xiàn)在已經(jīng)廣泛栽種在世界各地。銀杏的樹(shù)形美麗，是優(yōu)良的園林綠化樹(shù)和行道樹(shù)種。銀杏的種子可以入藥，有治療哮喘等疾病的功效。該實(shí)驗(yàn)根據(jù)不同條件培養(yǎng)基及無(wú)菌水可以促進(jìn)或抑制細(xì)胞的分裂，誘導(dǎo)愈傷組織形成，對(duì)銀杏的愈傷組織形成進(jìn)行了初步研究，目的是研究銀杏愈傷組織的誘導(dǎo)與不同培養(yǎng)基滲透勢(shì)的關(guān)系，以便在盡量短的時(shí)間內(nèi)獲得銀杏的愈傷組織，從而為其進(jìn)一步的細(xì)胞分化及無(wú)菌苗的形成奠定基礎(chǔ)，使其獲得有益的價(jià)值。

三、教學(xué)實(shí)驗(yàn)材料與方法

教學(xué)實(shí)驗(yàn)材料選用的是銀杏樹(shù)，采自校園如意湖，本次實(shí)驗(yàn)用的是嫩的正在發(fā)育的銀杏莖段。（1）培養(yǎng)基的配制。培養(yǎng)基的選擇及配制是實(shí)驗(yàn)的第一步。此實(shí)驗(yàn)選用的是MS培養(yǎng)基，大量元素配制成10倍母液，微量元素及鐵元素的母液配制成100倍母液。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中配制1mg/ml的激素6-BA和NAA，并定容為100倍的母液。把具有不同滲透勢(shì)的培養(yǎng)基配好后裝入三角瓶中封口，并且都用瓊脂固化，瓊脂的用量是每升8克。（2）環(huán)境消毒。操作前先將培養(yǎng)基及其各種器具都移入接種室，然后打開(kāi)紫外燈及無(wú)菌操作臺(tái)的鼓風(fēng)箱。紫外燈滅菌時(shí)間可達(dá)30多分鐘，在此過(guò)程中中不要用眼睛直視開(kāi)啟的紫外燈。關(guān)閉紫外燈后，至少要等10分鐘之后才能開(kāi)啟日光燈，否則會(huì)降低滅菌效果。（3）外植體處理。取銀杏莖段，剪去葉片，用自來(lái)水沖洗過(guò)夜。剪取長(zhǎng)約3cm的嫩莖，在無(wú)菌條件下進(jìn)行外植體消毒。先用75%的酒精浸泡30秒鐘，接著去其酒精，然后置于0.1%氯化汞溶液中8分鐘。在此過(guò)程中動(dòng)作要快，滅菌時(shí)間長(zhǎng)、精確，以防處理不當(dāng)使外植體受到傷害。（4）接種和培養(yǎng)。把經(jīng)消毒的外植體放在無(wú)菌脂上，用剪刀剪去其兩端，然后接種于基本培養(yǎng)基上進(jìn)行光照培養(yǎng)。每次接種時(shí)鑷子都要灼燒，且盡量不碰瓶口。培養(yǎng)溫度為25攝氏度左右。

四、教學(xué)結(jié)果與分析

接種室接種前，先取銀杏莖段的一部分，用蒸汽滲透壓儀器測(cè)出多株植物的滲透壓，再求其平均值。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得植物的滲透勢(shì)為-5Bar。然后對(duì)其境段進(jìn)行無(wú)菌轉(zhuǎn)接，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。20天后，愈傷組織已經(jīng)長(zhǎng)得很好，對(duì)其分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)，對(duì)第12天時(shí)的愈傷組織出現(xiàn)率和愈傷組織的誘導(dǎo)率做了圖表，分別如圖1和圖2：

從上表中可以看出，當(dāng)培養(yǎng)基滲透壓為-4.8Bar時(shí)，即培養(yǎng)基滲透勢(shì)接近外植體滲透勢(shì)時(shí)其誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)時(shí)間最短。當(dāng)外植體的滲透壓與培養(yǎng)基的滲透壓接近時(shí)，為外植體提供了與其相似的生活環(huán)境，從而細(xì)胞更容易生長(zhǎng)與分裂，促進(jìn)了愈傷組織的形成。當(dāng)外植體的滲透壓與培養(yǎng)基的滲透壓不接近時(shí)，外植體需要一個(gè)適應(yīng)的時(shí)期，從而延緩了其生長(zhǎng)，愈傷組織形成的較晚。結(jié)果表明，培養(yǎng)基滲透勢(shì)接近外植體滲透勢(shì)時(shí)誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)時(shí)間最短。

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