馮文武，李 平，陳大芳，李 俊，楊 蓉，蔣桂榮，王 欽，蘇娜芬

（1.貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心，貴州 貴陽(yáng) 550018；2.沿河土家族自治縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 銅仁 565300）

公豬精液品質(zhì)直接影響到后代的數(shù)量、質(zhì)量以及豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益[1]，精子活力是評(píng)價(jià)精液品質(zhì)的重要指標(biāo)[2]。不同品種公豬精液品質(zhì)會(huì)因其遺傳特性有所差異。王立強(qiáng)等研究表明，杜洛克豬和長(zhǎng)白豬種公豬的精子活力與窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)及初生窩重極顯著正相關(guān)[3]。我國(guó)地方豬種的精子活力有較多研究。李家連等[4]研究表明，梅山公豬精子的活力較好可能是梅山豬繁殖性能較好的原因之一。胡啟蒙[5]、甄林青[6]的研究也表明，梅山豬獲能精子運(yùn)動(dòng)能力顯著優(yōu)于杜洛克豬的獲能精子?？聵?lè)豬是腌肉型[7]地方豬種，品種歸屬烏金豬，因主產(chǎn)并集散于貴州西北部畢節(jié)市赫章縣可樂(lè)彝族苗族鄉(xiāng)而得名，其腿部肌肉發(fā)達(dá)，是生產(chǎn)宣威火腿（云腿）和威寧火腿的上等原料，具有較好的商業(yè)化開(kāi)發(fā)前景[8-10]，但其繁殖力低，產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)亟需有針對(duì)性地提高其繁殖力。李平等研究表明[11]，活力檢測(cè)結(jié)果與蘇醒時(shí)長(zhǎng)有關(guān)，17 ℃條件下保存的精液轉(zhuǎn)移至37 ℃條件下蘇醒5 min時(shí)檢測(cè)為宜。本試驗(yàn)以柯樂(lè)豬、杜洛克豬、長(zhǎng)白豬精液為研究對(duì)象，對(duì)三者保存不同時(shí)間后蘇醒5 min的活力進(jìn)行檢測(cè)分析，試圖從精子活力的角度探討其繁殖性能差異的原因，以便在生產(chǎn)過(guò)程中為改善柯樂(lè)豬繁殖力提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)于2020年12月在貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)選擇健康無(wú)疾病并具有完整的系譜檔案的柯樂(lè)豬、杜洛克豬、長(zhǎng)白豬3個(gè)品種的成年種公豬各5頭份精液為試驗(yàn)對(duì)象，依據(jù)采精體積進(jìn)行原精密度檢測(cè)，換算稀釋比例，采用相同稀釋劑稀釋后置于17 ℃條件下保存。

1.2 儀器設(shè)備

精液質(zhì)量分析系統(tǒng)（Minitube）、恒溫預(yù)熱版、載玻片、蓋玻片、移液槍（Eppendorf）、17 ℃保存箱。

1.3 檢測(cè)環(huán)境及方法

在貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心精液檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)，室內(nèi)環(huán)境溫度控制在20～22 ℃，濕度控制在55%～65%。取兩個(gè)劑量的常溫精液輕輕搖動(dòng)均勻，分別用移液器吸取精液20μL置于載玻片上并加蓋玻片，在37 ℃條件下蘇醒5 min后，用200～400倍顯微鏡觀察每樣片不同液層內(nèi)的精子運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，利用精液質(zhì)量分析系統(tǒng)進(jìn)行全面評(píng)定。計(jì)算公式如下：

M：活力；n1：第一視野活力；n2：第二視野活力；n3：第三視野活力。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Excel表格處理，分析采用SPSS軟件（IBM Co.,Armonk,NY,USA），進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan法進(jìn)行多重比較，分析差異是否顯著，檢測(cè)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 地方品種與國(guó)外品種豬12 h精子活力分析

柯樂(lè)豬與杜洛克豬、長(zhǎng)白豬12 h精子活力檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可知，3個(gè)豬種12 h精子活力均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求的70%以上，活力依次為柯樂(lè)豬＞杜洛克豬＞長(zhǎng)白豬；參考WHO（World Health Organization）分級(jí)，柯樂(lè)豬、杜洛克豬、長(zhǎng)白豬a級(jí)（快速前向運(yùn)動(dòng)）+b級(jí)（呈中速直線運(yùn)動(dòng)）精子之和均較高，依次分別為93.61%、91.19%、87.53%；靜止精子數(shù)柯樂(lè)豬最低。

2.2 地方品種與國(guó)外品種豬36 h精子活力分析

柯樂(lè)豬與杜洛克豬、長(zhǎng)白豬36 h精子活力檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可知，3個(gè)豬種36 h精子活力依然符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求的70%以上，活力依次為杜洛克豬＞柯樂(lè)豬＞長(zhǎng)白豬；參考WHO分級(jí)，杜洛克豬、柯樂(lè)豬、長(zhǎng)白豬a級(jí)+b級(jí)精子之和保持較高水平，依次分別為87.60%、87.32%、74.02%；靜止精子數(shù)柯樂(lè)豬保持最低。

表2 柯樂(lè)豬與國(guó)外品種36 h精子活力

2.3 地方品種與國(guó)外品種豬72 h精子活力分析

柯樂(lè)豬與杜洛克豬、長(zhǎng)白豬72 h精子活力檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，3個(gè)豬種72 h精子活力同12 h相比，發(fā)生較大變化，其中柯樂(lè)豬和杜洛克豬活力仍然符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，且柯樂(lè)豬優(yōu)于杜洛克豬，a級(jí)+b級(jí)精子之和分別為75.90%、70.77%；長(zhǎng)白豬精液活力下降到要求以下，僅為66.43%；靜止精子數(shù)柯樂(lè)豬保持最低。

表3 柯樂(lè)豬與國(guó)外品種72 h精子活力

3 討論

3.1 柯樂(lè)豬精子活力優(yōu)于杜洛克豬及長(zhǎng)白豬

本試驗(yàn)結(jié)果表明，柯樂(lè)豬在12 h、72 h精子活力a級(jí)和b級(jí)精子高于杜洛克豬和長(zhǎng)白豬，36 h精子活力與杜洛克豬相近，且靜止精子數(shù)在3個(gè)檢測(cè)時(shí)間段中，均保持最低，這與陳永霞等[12]研究的，梅山豬快速運(yùn)動(dòng)比例依次高于杜洛克豬、巴克夏豬、大白豬、長(zhǎng)白豬，且不動(dòng)精子比例以梅山豬最低，梅山豬a級(jí)和b級(jí)比例均為最高，a級(jí)+b級(jí)之和高于大白豬、長(zhǎng)白豬、杜洛克豬、巴克夏豬的結(jié)果基本相同。提示柯樂(lè)豬同梅山豬等地方豬精子活力與外元豬相比，存在差異且比較具有優(yōu)勢(shì)。

3.2 柯樂(lè)豬、杜洛克豬精子活力下降趨勢(shì)優(yōu)于長(zhǎng)白豬

綜合柯樂(lè)豬與杜洛克豬、長(zhǎng)白豬精子活力的下降情況，柯樂(lè)豬與杜洛克豬的精子活力在12 h、36 h、72 h內(nèi)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯差異，下降趨勢(shì)保持穩(wěn)定，兩者與長(zhǎng)白豬精子活力在3個(gè)時(shí)間段檢測(cè)結(jié)果差異明顯，長(zhǎng)白豬的下降趨勢(shì)較為明顯，這與任廣志等[13]和孫德林等[14]研究的杜洛克豬公豬精液長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，活率顯著優(yōu)于長(zhǎng)白豬，杜洛克豬下降不明顯、長(zhǎng)白精液活率出現(xiàn)急劇下降結(jié)果相符，說(shuō)明柯樂(lè)豬與杜洛克豬在精子活力下降趨勢(shì)較為穩(wěn)定，并優(yōu)于長(zhǎng)白豬。

3.3 長(zhǎng)白豬精液不宜長(zhǎng)時(shí)間保存

本研究結(jié)果表明柯樂(lè)豬與杜洛克豬保存72 h后，活力檢測(cè)仍符合國(guó)家推薦性標(biāo)準(zhǔn)[15]所規(guī)定的活力70%以上，但長(zhǎng)白豬活力72 h降至66.43%，達(dá)不到使用要求。說(shuō)明長(zhǎng)白豬在實(shí)際應(yīng)用中，精液不適宜長(zhǎng)時(shí)間保存，這與梅軍四等[16]研究的長(zhǎng)白種公豬精液僅適合短期保存的結(jié)論相符。

4 結(jié)論

貴州地方豬種柯樂(lè)豬精液稀釋后，活力優(yōu)于杜洛克豬和長(zhǎng)白豬，下降趨勢(shì)同杜洛克豬一樣不明顯，在72 h后檢測(cè)時(shí)保持良好活力，高于70%，優(yōu)于長(zhǎng)白豬精液活力。