王大春，李慶豐

（湘潭縣錦石鄉(xiāng)人民政府農(nóng)業(yè)服務中心，湖南 湘潭 411228）

在生豬養(yǎng)殖環(huán)境中存在各種機會致病性病原，健康豬群感染此類病原后不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，但可持續(xù)性攜帶。沙門氏菌屬于革蘭氏陰性菌，該病原可感染多種動物（如豬、牛、羊和人等），其中豬感染該病后可出現(xiàn)腸炎和敗血癥，繼而造成嚴重的經(jīng)濟損失。目前我國報道的沙門氏菌有超過300種血清型，且不同血清型菌株致病性具有差異[1-2]。豬鏈球菌在豬場環(huán)境中廣泛存在，豬群感染該病后可出現(xiàn)嚴重的臨床癥狀，其中包括敗血癥、腦膜炎等，且豬鏈球菌血清型2型可感染人，且近年來人鏈球菌病發(fā)生部分原因是由于患者接觸或食用被鏈球菌污染的豬肉所導致[3-4]。

2019年4月至2020年8月，從湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰場收集生豬淋巴結樣品共302份，通過細菌分離及鑒定，調(diào)查該地區(qū)健康屠宰豬沙門氏菌和鏈球菌隱性感染情況，同時對菌株的血清型進行調(diào)查，最后通過藥敏試驗確定不同菌株的耐藥情況，旨在為臨床上沙門氏菌和鏈球菌的防控提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019年4月至2020年8月，從湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰場共采集屠宰豬淋巴結樣品共302份，所有屠宰豬均為肥育豬，且外表健康，無臨床疾病。記錄采集樣本信息（如來源、日期等）后將其低溫送至湘潭市動物疫病預防控制中心，待檢。

1.2 細菌分離與鑒定

在超凈工作臺下用手術剪和手術刀將組織切開，使用接種環(huán)蘸取少量組織液接種于鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，其后挑選疑似鏈球菌或沙門氏菌的單菌落再次接種于鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進行純化，培養(yǎng)后將純化的菌落進行革蘭氏染色鑒定。

1.3 血清型鑒定

以PCR法對豬鏈球菌進行血清型鑒定。對疑似鏈球菌菌株進行擴增后，以DNA提取試劑盒提取細菌基因組DNA，設計針對鏈球菌2型、7型和9型血清型檢測特異性引物[5]，以細菌基因組DNA為模板，以PCR法對獲得的鏈球菌進行血清型鑒定；根據(jù)參考文獻[3]，參考White-Kauffmann-Le Minor抗原表，對本文獲得的沙門氏菌菌株進行血清型鑒定。

1.4 藥敏試驗

用生理鹽水將本研究分離的沙門氏菌或鏈球菌稀釋至0.5 MCF（麥氏濁度），取50 μL菌液均勻涂布于鮮血瓊脂固體培養(yǎng)基表面，待菌液稍干后在培養(yǎng)基表面貼上含不同抗生素的紙片，在37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后，用卡尺記錄各藥敏紙片的抑菌圈大小，參考相關標準判定菌株對藥物的敏感性[6]。

2 調(diào)查結果

2.1 湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰生豬來源樣品沙門氏菌和鏈球菌感染情況調(diào)查結果

調(diào)查結果顯示（表1），被檢測的302份樣品中沙門氏菌和鏈球菌陽性樣品分別為17和22份，檢出率分別為5.63%和7.28%，且不同地區(qū)來源樣品均含有沙門氏菌或鏈球菌陽性樣品，但檢出率差異相對較小，其中湘潭縣、雨湖區(qū)和韶山市來源樣品中沙門氏菌檢出率分別為4.63%、6.14%和6.25%，而鏈球菌檢出率分別為9.26%、7.02%和5.00%。

表1 湘潭縣及周邊地區(qū)屠宰生豬來源樣品沙門氏菌和鏈球菌感染情況調(diào)查結果

2.2 沙門氏菌和鏈球菌血清型檢測結果

通過對本文獲得的17株沙門氏菌進行血清型鑒定，共鑒定出4種血清型，分別為德爾卑沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌，其中德爾卑沙門氏菌所占比例最高，為52.94%（9/17），而鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌所占比例分別為23.53%（4/17）、11.76%（2/17）和11.76%（2/17）；22株鏈球菌中共鑒定出2種血清型，分別為2型和9型鏈球菌，其所占比例分別為27.27%（6/22）和72.73%（16/22）。

2.3 藥敏試驗結果

分別將本文獲得的17株沙門氏菌和22株鏈球菌進行藥敏試驗，結果如表2所示。本研究分離的沙門氏菌對頭孢菌素類抗生素、鏈霉素和環(huán)丙沙星較為敏感，其耐藥率分別為0（頭孢他啶）、0（頭孢唑林）、0和5.88%，對阿莫西林、氟苯尼考等抗生素屬于中介敏感，其耐藥率分別為47.06%和47.06%，對大觀霉素、慶大霉素和磺胺甲氧嘧啶等抗生素耐藥率較高，分別為76.47%、76.47%和88.24%；而鏈球菌也對頭孢他啶和頭孢唑林具有高度敏感性，其耐藥率均為0，但對氟苯尼考、環(huán)丙沙星、氨芐西林等抗生素耐藥性較強，其耐藥率分別為81.82%、72.73%和77.27%。

表2 本研究分離的沙門氏菌和鏈球菌菌株藥敏試驗結果 %

3 討論與分析

豬肉是我國消費最多的肉類之一，而屠宰場來源肉類食源性致病菌感染（污染）問題關系到食品衛(wèi)生安全，因此對屠宰場來源豬肉樣品中沙門氏菌和鏈球菌感染情況進行調(diào)查具有較重要的公共衛(wèi)生意義。湘潭縣生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達，本文選擇該地具有代表性屠宰場進行樣品采集，分離沙門氏菌和鏈球菌后進行血清型鑒定及耐藥性分析，分別分離出17和22株菌株，其分離率分別為5.63%和7.28%，其中沙門氏菌分離率結果與方忠意等[2]和高延玲等[7]基本一致，分別為5.63%和6.90%。其研究結果提示湘潭縣部分地區(qū)屠宰部分肥育豬存在沙門氏菌和（或）鏈球菌感染情況，相關部門需引起重視。

進一步血清型分析結果發(fā)現(xiàn)，17株沙門氏菌菌株鑒定出4種血清型，分別是德爾卑沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌和倫敦沙門氏菌，其中德爾卑沙門氏菌（52.94%）和鼠傷寒沙門氏菌（23.53%）所占比例較高，這與四川地區(qū)豬肉生產(chǎn)鏈沙門氏菌血清型優(yōu)勢菌特征基本一致[8]，同時也提示這兩種血清型沙門氏菌在我國生產(chǎn)中普遍存在，對人畜健康威脅較大。此外，22株豬鏈球菌分離株中存在2型和9型血清型，其所占比例分別為27.27%（6/22）和72.73%（16/22），本研究中2型鏈球菌所占比例低于劉澤文等[9]湖北地區(qū)調(diào)查結果（47.1%，16/34），這可能與樣品來源及數(shù)量等具有差異有關，但由于2型鏈球菌是重要的食源性病原，其威脅公共衛(wèi)生安全的問題不能忽視。

進一步藥敏試驗結果表明，本文獲得的沙門氏菌和鏈球菌均對頭孢唑林和頭孢他啶敏感，此外，沙門氏菌對鏈霉素和環(huán)丙沙星也較為敏感，其耐藥率均低于10.0%，對磺胺甲氧嘧啶、慶大霉素等耐藥率均高于60.0%，但鏈球菌對四環(huán)素、氟苯尼考等具有較高的耐藥性，故而在臨床上用藥應使用對細菌敏感的藥物，可采用聯(lián)合用藥方式同時對鏈球菌和沙門氏菌進行防控。