陳建民，盧衛(wèi)紅，王衛(wèi)平，趙俊雄，華深，范衛(wèi)星，張晨

精神分裂癥病因?qū)W研究是目前精神醫(yī)學(xué)界的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。既往流行病學(xué)研究顯示該病具有較高的遺傳度，是一種多基因所致的復(fù)發(fā)性疾病[1]。多巴胺假說(shuō)是精神分裂癥的經(jīng)典病因?qū)W假說(shuō)。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)是一種依賴NAD+的III類組蛋白去乙?；?，與多巴胺能神經(jīng)傳遞相關(guān)，在神經(jīng)保護(hù)、損傷修復(fù)、神經(jīng)分化方面具有重要作用[2]。有研究報(bào)道SIRT1基因與精神分裂癥的發(fā)生有關(guān)[3-4]。因此，SIRT1基因被認(rèn)為是精神分裂癥的易感基因之一。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)具有生物學(xué)功能，影響該基因的表達(dá)[5]，本研究旨在驗(yàn)證rs3758391位點(diǎn)與精神分裂癥易感性及其癥狀維度之間的關(guān)系，以探討SIRT1基因在精神分裂癥發(fā)生過(guò)程中的作用機(jī)制。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象

2017年1月至2018年12月在浙江省金華市第二醫(yī)院就診的精神分裂癥患者467例。入組標(biāo)準(zhǔn)[6]：符合美國(guó)《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》第4版(DSM-IV)中精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡18～50歲，性別不限；初中及以上文化程度；入組前已處于穩(wěn)定狀態(tài)至少6個(gè)月；取得患者本人及家屬的知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：診斷不明者；6個(gè)月內(nèi)使用過(guò)改良電抽搐治療或經(jīng)顱磁刺激治療者；目前服用抗抑郁藥治療者；物質(zhì)濫用/依賴者；患有嚴(yán)重軀體疾病者。對(duì)照組為社區(qū)招募的健康志愿者492名，無(wú)嚴(yán)重軀體疾病史、精神疾病史和精神疾病家族史。病例組：男246例，女221例，平均年齡(35.41±13.62)歲，平均病程(7.42±4.83)年；對(duì)照組：男249名，女243名，平均年齡(34.25±8.18)歲。兩組性別、年齡比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

本研究經(jīng)浙江省金華市第二醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(倫理批號(hào)：2018-0-01)，所有入組對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，同意參與本研究。

1.2 方法

1.2.1 評(píng)估工具 采血當(dāng)天由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的專業(yè)精神科醫(yī)師對(duì)患者進(jìn)行陽(yáng)性和陰性癥狀量表(PANSS)評(píng)定，量表包括陽(yáng)性癥狀分、陰性癥狀分、一般病理分。卡爾加里抑郁癥狀評(píng)定量表(CDSS)用于評(píng)估精神分裂癥患者抑郁水平，分值越大抑郁癥狀越嚴(yán)重，以分值>7作為界限判斷是否抑郁。使用重復(fù)性神經(jīng)心理狀態(tài)測(cè)驗(yàn)(RBANS)評(píng)定患者認(rèn)知功能，該工具具有快速、有效、敏感、易操作等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于檢測(cè)精神分裂癥患者認(rèn)知功能水平具有較好的信度和效度[7]。

1.2.2 DNA提取和基因分型 DNA提取和基因分型：采集病例組及對(duì)照組EDTA抗凝靜脈血2 ml，采用離心柱型基因組DNA試劑盒(北京天根生物有限公司，DP304型)提取外周血白細(xì)胞全基因組DNA。采用TaqMan 探針SNP基因分型技術(shù)對(duì)rs3758391位點(diǎn)進(jìn)行分型：引物和探針由美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(ABI)定制，PCR反應(yīng)試劑TaqMan Universal PCR Master Mix由ABI公司提供。實(shí)驗(yàn)流程參照我們之前的工作[5]。

2 結(jié)果

2.1 兩組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)多態(tài)性比較

兩組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)基因型的觀察值和期望值Hardy-Weinberg平衡吻合度良好(P>0.05)，表明本研究收集到的樣本來(lái)自大的群體，個(gè)體間隨機(jī)婚配，不存在明顯自然選擇、遷移等因素對(duì)遺傳平衡的影響，具有群體代表性。

病例組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)CC、CT、TT基因型頻率分別為3.2%、30.4%、66.4%，對(duì)照組分別為2.4%、26.8%、70.7%，兩組基因型頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。病例組C、T等位基因頻率分別為18.4%、81.6%，對(duì)照組頻率分別為15.9%、84.1%，兩組比較等位基因分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)基因型和等位基因頻率比較(例數(shù)，%)

2.2 病例組SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)不同基因型患者的臨床癥狀比較

為了排除性別、年齡和病程對(duì)患者癥狀嚴(yán)重程度的影響，在進(jìn)行rs3758391位點(diǎn)多態(tài)性與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)分析時(shí)將這些因素作為協(xié)變量納入多因素方差分析。攜帶不同基因型的患者PANSS陰性癥狀評(píng)分及CDSS評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，RBANS各項(xiàng)評(píng)分差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩兩比較顯示攜帶CC基因型患者PANSS陰性癥狀評(píng)分以及CDSS評(píng)分相比攜帶CT和TT基因型患者更高(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 病例組rs3758391位點(diǎn)不同基因型患者PANSS、CDSS和RBANS評(píng)分比較

3 討論

精神分裂癥是一種病因未明的復(fù)雜性疾病，以幻覺(jué)、妄想為主的陽(yáng)性癥狀，以情感淡漠、意志要求減退為主的陰性癥狀，以及學(xué)習(xí)、記憶功能受損的認(rèn)知障礙為主要臨床特征。精神藥理學(xué)和病理學(xué)研究均支持精神分裂癥的多巴胺功能失調(diào)假說(shuō)，即多巴胺在腦內(nèi)關(guān)鍵區(qū)域傳遞失常是導(dǎo)致精神分裂癥各類癥狀出現(xiàn)的原因[8]。由于SIRT1在神經(jīng)元水平參與多巴胺傳遞過(guò)程，因此SIRT1基因被認(rèn)為可能與精神分裂癥的發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果顯示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)各基因型、等位基因分布在病例組和對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與之前在中國(guó)和日本人群中的報(bào)道一致[3-4]，由此提示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)可能并非精神分裂癥的致病因素。我們進(jìn)一步分析了rs3758391位點(diǎn)與精神分裂癥臨床特征的關(guān)系，結(jié)果顯示該位點(diǎn)與精神分裂癥的陰性癥狀和抑郁癥狀有關(guān)，特別是攜帶rs3758391位點(diǎn)CC基因型的患者具有更嚴(yán)重的陰性癥狀和抑郁癥狀；提示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)可能并非精神分裂癥的獨(dú)立致病因素，但與該病臨床癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)，特別是陰性癥狀和抑郁癥狀。

SIRT1基因變異引起的基因表達(dá)異?？赏ㄟ^(guò)多種途徑影響DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡和生物節(jié)律，進(jìn)而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，導(dǎo)致神經(jīng)精神疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加[9]。既往研究顯示位于5'UTR區(qū)域的rs3758391在功能上影響SIRT1基因mRNA表達(dá)[10]。研究發(fā)現(xiàn)rs3758391與枕葉皮質(zhì)中的SIRT1基因mRNA表達(dá)相關(guān)，而且攜帶CC基因型的個(gè)體枕葉皮質(zhì)中的SIRT1基因mRNA表達(dá)水平顯著低于攜帶TT基因型的個(gè)體[5]。因此，以上結(jié)果提示rs3758391可能影響了特定腦區(qū)內(nèi)SIRT1基因mRNA的表達(dá)。同樣，在蛋白質(zhì)組學(xué)水平上也有類似的發(fā)現(xiàn)[10]。既往神經(jīng)影像學(xué)研究顯示枕葉皮質(zhì)區(qū)域參與了抑郁癥的發(fā)生過(guò)程[11-12]。因此，rs3758391位點(diǎn)可能通過(guò)影響SIRT1基因在枕葉皮質(zhì)中的表達(dá)水平增加精神分裂癥患者的抑郁癥狀。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)與精神分裂癥陰性癥狀相關(guān)。最近研究中發(fā)現(xiàn)精神分裂癥患者的抑郁癥狀與陰性癥狀之間存在顯著相關(guān)[13]，抑郁更重的精神分裂癥患者往往預(yù)示其陰性癥狀更重，預(yù)后不佳[14]。那么，SIRT1基因在精神分裂癥陰性癥狀中的作用機(jī)制是否與抑郁機(jī)制相似？這還有待于未來(lái)研究加以研究說(shuō)明。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)可能并非精神分裂癥的獨(dú)立致病因素，但與該病的陰性癥狀和抑郁情緒的嚴(yán)重程度有關(guān)。然而，本研究采用橫斷面研究設(shè)計(jì)，存在一定局限性，首先本研究未剔除影響精神分裂癥患者臨床癥狀的其他因素，如環(huán)境因素、社會(huì)以及家庭支持程度、有無(wú)應(yīng)激事件、職業(yè)功能以及服藥情況等；其次，精神分裂癥不同亞型可能有其獨(dú)特的生物學(xué)機(jī)制，本研究未能就該病亞型進(jìn)行分別研究。因此，應(yīng)謹(jǐn)慎理解本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在未來(lái)需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，納入先證者一級(jí)親屬，開(kāi)展縱向研究，以驗(yàn)證本研究結(jié)果，并采用多模態(tài)研究手段進(jìn)一步揭示SIRT1基因?qū)穹至寻Y臨床癥狀嚴(yán)重程度的作用機(jī)制。