王金賀 王延鋒 史 磊 孟祥海 潘春磊 劉姿彤 盛春鴿 于海洋

20個松杉靈芝菌株寒地栽培適應(yīng)性比較研究

王金賀 王延鋒*史 磊 孟祥海 潘春磊 劉姿彤 盛春鴿 于海洋

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，牡丹江 黑龍江 157041）

為篩選出適宜寒地人工栽培的松杉靈芝優(yōu)良菌株，以不同來源的20個松杉靈芝菌株為材料，通過拮抗反應(yīng)將其分為12組，觀察（測）比較其菌絲形態(tài)、生長速度、子實體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量等。結(jié)果：以菌株‘G17’ ‘G36’ ‘G40’的綜合性狀較好，其菌絲生長速度快，抗雜性較強(qiáng)，產(chǎn)量高，產(chǎn)品商品性較好，適合在生產(chǎn)中大面積栽培應(yīng)用。

松杉靈芝；菌株；拮抗反應(yīng)；農(nóng)藝性狀

松杉靈芝（），又名鐵杉靈芝、松杉樹芝，隸屬靈芝目、靈芝科[1, 2]。野生松杉靈芝主要分布于黑龍江、吉林、甘肅等省，具有提高人體免疫力、安神、抗寒和活血的功效[2, 3]，但較為稀少，價格遠(yuǎn)高于赤芝。經(jīng)過多年馴化，現(xiàn)已實現(xiàn)人工栽培[4]。栽培所用的菌種多為野生松杉靈芝子實體經(jīng)組織分離純化獲得。栽培方式有代料栽培、生料段木栽培、熟料短段木栽培及仿生樹樁栽培[5]等。有關(guān)優(yōu)良菌株篩選的報道很少。本研究通過引進(jìn)、收集和野外采集等手段，以取自國內(nèi)外的20個性狀良好的松杉靈芝菌株為試驗材料，比較篩選優(yōu)良菌株，為人工栽培優(yōu)質(zhì)子實體提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）供試菌株。20個松杉靈芝菌株代碼及來源如表1所示。

（2）供試培養(yǎng)基。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。木屑培養(yǎng)基：木屑78%，麩皮20%，石灰1%，石膏1%。液體培養(yǎng)基：葡萄糖3%，蔗糖1%，蛋白胨0.3%，MgSO4·7H2O 0.05%，KH2PO40.05%，維生素B1微量，pH自然。

培養(yǎng)料配方：硬雜木屑86%，麩皮10%，玉米粉2.5%，石膏1%，石灰0.5%。

（3）試驗基地。黑龍江省牡丹江市溫春鎮(zhèn)。

1.2 試驗項目

（1）菌絲形態(tài)及生長速度測定。將供試菌株接種到PDA平板培養(yǎng)基上，在25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)5～7天后，觀察菌絲形態(tài)；將供試菌株接種到木屑試管培養(yǎng)基上，置于25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，測定菌絲生長速度。采用隨機(jī)區(qū)組排列，設(shè)3次重復(fù)。

（2）菌絲拮抗試驗。將收集的20個菌株每兩個為一組接種在同一PDA平板培養(yǎng)基上，采用隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)，菌種間相距3 cm，于25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)5～7天后，觀察菌落接觸部分是否出現(xiàn)拮抗線，以確定兩菌株體細(xì)胞之間是否有親和關(guān)系，從而鑒別菌株的異同。

（3）生長周期與抗性試驗。采用袋式栽培，聚乙烯袋規(guī)格為16.5×35（cm），塑料棒封口，100 ℃常壓滅菌10 h；采用液體菌種接種，置于25 ℃恒溫箱黑暗培養(yǎng)。每個菌株接種180袋，重復(fù)3次。菌絲長滿料袋后，經(jīng)過220天后熟培養(yǎng)，達(dá)到生理成熟后，入棚出芝。

（4）子實體性狀與產(chǎn)量考察。5月末入棚，在畦床上覆土栽培，畦床寬1.5 m，床間距0.4 m。剝?nèi)ニ芰洗?，將菌棒豎直擺放在菌床中，菌棒間距8～10 cm，蓋黑土或沙土至填縫后蓋過菌棒2cm，保持土壤濕潤，棚內(nèi)溫度控制在20～30 ℃，空氣相對濕度75%～85%，適當(dāng)通風(fēng)，保持空氣新鮮。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲形態(tài)及長速

由表2可知，各菌株在母種培養(yǎng)基上的菌絲顏色和長勢存在差異，菌絲生長速度差異顯著。菌絲顏色，菌株7、12、15、16、17、18、19、20為白色至黃褐色，菌絲生長點為白色；菌株2、3、4、5、6、8、9、13、14為黃褐色；菌株10、11為白色與黃褐色相間；菌株1菌絲潔白，有別于松杉靈芝菌絲顏色。菌絲生長勢，菌株1非常旺盛，菌株2、3、10、15、16和20相對較弱，其他菌株居中。各菌株的平均生長速度差異顯著，其中菌株1、7、11、13、20生長速度快，菌株5、6、18為次，菌株2、4、10最慢。

表1 供試菌株資源信息

表2 不同菌株的菌絲生長情況比較

注：“+” “++” “+++” “++++”分別表示菌絲生長勢較弱、正常、較旺盛和非常旺盛。

2.2 菌絲拮抗性

根據(jù)試驗結(jié)果，拮抗最佳觀察時間為菌絲平板培養(yǎng)基培養(yǎng)第15天，松杉靈芝體細(xì)胞不親和的表現(xiàn)為兩菌株間產(chǎn)生溝壑或隆起狀拮抗線。20個菌株兩兩拮抗的結(jié)果如表3所示。菌株4、5和6，菌株17、18和20，菌株10和11，菌株15和16之間無拮抗反應(yīng)，菌株體細(xì)胞親和，親緣關(guān)系很近；其他菌株相互之間均有拮抗反應(yīng)，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，為生理特性不同的菌株。拮抗反應(yīng)可以直觀地判定菌株間遺傳相似性，是初步鑒定不同菌種的有效手段之一。

根據(jù)以上試驗結(jié)果，因無拮抗反應(yīng)的菌株4、5和6，菌株17、18和20，菌株10和11，菌株15和16之間的親緣關(guān)系較近，故保留菌絲生長速度較快、長勢強(qiáng)的菌株5、20、11和15，去掉親緣關(guān)系近的其他菌株。菌株1的菌絲性狀（菌絲潔白、長勢強(qiáng)、生長速度快）與赤靈芝菌絲性狀相似，疑似赤靈芝，菌株2菌絲生長速度較慢，直接淘汰。因此，選擇菌株編號3、5、7、8、9、11、12、13、14、15、19和20等12個菌株進(jìn)行生育期與抗性測定、子實體性狀與產(chǎn)量考察。

2.3 生育期與抗性

根據(jù)松杉靈芝生育期與抗雜性的調(diào)查結(jié)果，各菌株的生長周期差異較大，268～320天不等（表4）。其中菌株12和15生育期最短，菌株7、8、13和14較短，菌株9和3較長。由原基發(fā)生早晚可以看出，各菌株菌絲后熟時間的長短不同，原基發(fā)生較早的菌株7、12和15適合一年出芝，原基發(fā)生較晚的菌株3和9適合兩年出芝。

各菌株在菌絲生長過程中幾乎都無污染，但在后熟培養(yǎng)期間污染率差異較大（表4）。經(jīng)比較，以菌株7、12、14和15較小，低于10%，其抗性較強(qiáng)；菌株3的污染率較高，抗性弱。

2.4 子實體性狀與產(chǎn)量

從表4看，各菌株子實體農(nóng)藝性狀存在差異，表現(xiàn)為菌蓋顏色為紅褐色或黃褐色，形狀為扇形或半圓形。各菌株間的產(chǎn)量差異極顯著，菌株12、7和14顯著高于其他菌株，生物學(xué)效率分別為6.6%、6.4%和6.2%。菌株3的產(chǎn)量低，每袋干重僅為16 g，生物學(xué)效率為3.2%。

3 結(jié)論與討論

本試驗對20個松杉靈芝菌株的菌絲體和子實體生長情況進(jìn)行試驗觀測與分析，結(jié)果以菌株2、4和10的菌絲生長速度較慢，予以淘汰；菌株4、5和6，菌株17、18和20，菌株10和11，菌株15和16組合之間無拮抗反應(yīng)，表明其親緣關(guān)系較近，淘汰相對劣勢菌株。各菌株的生育期差異較大，268～320天不等。由原基發(fā)生早晚可預(yù)測各菌株菌絲需要后熟時間的長短，原基發(fā)生較早的菌株7、12和15適合一年出芝，原基發(fā)生較晚的菌株3和9適合兩年出芝。各菌株的子實體農(nóng)藝性狀存在差異，產(chǎn)量差異極顯著。其中，菌株12、7和14產(chǎn)量較高，平均每袋干重分別為33 g、32 g和31 g，顯著高于其他菌株，生物學(xué)效率分別為6.6%、6.4%和6.2%。菌株11和20在栽培試驗中沒有產(chǎn)生子實體，原因可能是試驗中的出芝環(huán)境（溫度、濕度、光照強(qiáng)度等）不適合這兩個菌株的原基分化。這有待進(jìn)一步的試驗驗證。

表3 不同菌株間的拮抗反應(yīng)

注：“+”表示拮抗反應(yīng)明顯；“-”表示拮抗反應(yīng)不明顯或無拮抗反應(yīng)。

表4 不同菌株的生長周期、污染率及農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量

本試驗結(jié)果顯示，各菌株在菌絲顏色、生長速度、子實體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量上均存在一定差異，菌株‘G17’ ‘G36’ ‘G40’（本試驗菌株編號7、12、14）的菌絲生長勢和抗性較強(qiáng)，子實體形態(tài)好、產(chǎn)量高，適合作為優(yōu)良松杉靈芝菌株進(jìn)行大面積示范推廣。

[1] 張金霞, 趙永昌編著. 食用菌種質(zhì)資源學(xué)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2016: 12.

[2] 邢志偉. 靈芝不同品種的種質(zhì)鑒定及優(yōu)良菌株篩選[D]. 邯鄲: 河北工程大學(xué), 2017.

[3] 吳興亮, 戴玉成, 林龍河. 中國靈芝科資源及其地理分布[J]. 貴州科學(xué), 2004, 22(2): 27-33.

[4] 金鑫, 劉宗敏, 黃羽佳, 等. 我國靈芝栽培現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J]. 食藥用菌, 2016, 24(1): 33-37.

[5] 閆梅霞, 許世泉, 張瑞, 等. 不同栽培模式下松杉靈芝的生長與有效成分含量[J]. 食用菌學(xué)報, 2017, 24(4): 29-32.

Comparative study on cultivation adaptability in cold regions of 20 Stains ofGanoderma tsugae

Wang Jinhe Wang Yanfeng* Shi Lei Meng Xianghai Pan Chunlei Liu Zitong Sheng Chunge Yu Haiyang

（Mudanjiang Branch of Heilongjiang Agricultural Sciences,Mudanjiang,Heilongjiang 157041, China）

In order to screen the suitable strains offor cold region artifcial cultivation, 20 strains offrom different sources were compared. The results showed that 20 strains could be divided into 12 groups, by comparing the strain color, growth rate, agronomic characters of fruiting body, and yield of 20 strains, by antagonistic teaction, Strains 7, 12 and 14 have better comprehensive characters, which had the advantages of fast mycelium grows, strong resistance, high yield and good commercial character. Which can be widely used in production.

; strain; antagonistic reaction; agronomic characters

S646.2

A

2095-0934（2021）03-237-05

中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(ZY18C08-04) ；黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院成果轉(zhuǎn)化中試項目（2020ZSXN010）；黑龍江省自然基金聯(lián)合引導(dǎo)項目（LH2019C084，JJ2020LH2154）

王金賀（1982—），女，助理研究員，碩士研究生，主要從事食（藥）用菌育種與栽培研究；E-mail：jinhe-happy@163.com。

王延鋒（1973—），男，研究員，博士，主要從事食（藥）用菌遺傳育種、栽培和加工研究；E-mail：mdjnks@126.com。